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口腔cGVHD患者外周血Smads及miRNA155表達水平和相關性研究

發(fā)布時間:2020-06-06 18:02
【摘要】:目的:口腔慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host-disease,cGVHD)是異基因造血干細胞移植后(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)最常見的并發(fā)癥,但其發(fā)病機制尚未明了。本實驗通過研究口腔cGVHD患者Smads蛋白、miRNA155表達水平差異及相關性,并對miRN155進行生物信息學分析,探索miRNA155是否調(diào)控Smads蛋白的表達,以及兩者的表達與口腔cGVHD的關系。方法:將因重型β地中海貧血或白血病行allo-HSCT后100天以上且原有疾病未復發(fā)、遵囑規(guī)律使用抗排斥藥物的病人50例納入研究,收集所有病人的病史資料。其中口腔cGVHD18例,根據(jù)患者情況記錄口腔表征評分表和視覺類比量表(visual analogous scale,VAS)。從上述50例患者中選取移植后300天以上未出現(xiàn)口腔及其他器官系統(tǒng)cGVHD病變的18例患者納入無口腔cGVHD組。選取與口腔cGVHD患者年齡、性別匹配的18例健康志愿者作為對照組。采集所有納入的研究對象外周靜脈血及唾液。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測各組血漿和唾液中Smad2、Smad3、Smad4、Smad7蛋白含量,使用定量實時熒光定量PCR(quanntitative real time RT-PCR,qRT-PCR)檢測各組外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA以及血漿中miRNA155相對表達水平,分析并通過生物信息學對miRNA155進行靶基因預測、GO富集和KEGG信號通路分析。結果:1、口腔cGVHD患者的臨床情況分析:allo-HSCT后口腔cGVHD的患病率為36%,患者口內(nèi)均出現(xiàn)白色網(wǎng)狀條紋樣病損,集中在雙頰和舌部。其中有14例患者出現(xiàn)潰瘍和糜爛,9例患者出現(xiàn)口干,5例患者出現(xiàn)紅斑樣病損,5例患者出現(xiàn)唇皸裂,3例患者出現(xiàn)張口受限,2例患者出現(xiàn)舌乳頭萎縮,1例患者出現(xiàn)唇皰疹?谇籧GVHD組患者口腔表征評分為4.11±2.11,VAS評分為3.44±2.53,兩者呈正相關。2、Smads蛋白在口腔cGVHD組,無口腔cGVHD組和健康對照組血漿中表達:Smad2在口腔cGVHD組中表達高于其他兩組(p0.05),Smad3在口腔cGVHD組中表達明顯低于其他兩組(p0.05),而Smad4和Smad7在口腔cGVHD組中表達高于健康對照組(p0.05)。其余各組比較差異均無統(tǒng)計學意義。3、Smads mRNA在口腔cGVHD組,無口腔cGVHD組和健康對照組PBMC中的相對表達水平:Smad2 mRNA及Smad4 mRNA在口腔cGVHD組表達較高于其他兩組(p0.05),Smad3 mRNA在口腔cGVHD組表達低于其他兩組(p0.05)。而Smad7 mRNA在口腔cGVHD組表達稍高于另外兩組,但差異均無統(tǒng)計學意義。4、miRNA155在血漿中的表達以及生物信息學分析:miRNA155在口腔cGVHD組中表達水平最低,無口腔cGVHD組次之,在健康對照組中表達最高。運用生物信息學方法預測了miRNA155的靶基因,共2524個;其中TargetScan、miRDB、TargetMiner 3個生物信息學網(wǎng)站中有交集的靶基因共100個。KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)有12個信號通路與miRNA155有關。將其與Smad2表達水平進行相關性分析,兩者呈負相關關系。結論:1、口腔cGVHD患者血漿中Smad2、4、7蛋白高表達,Smad3低表達;PBMC中Smad2 mRNA、Smad4 mRNA高表達,Smad3 mRNA低表達。miRNA155在口腔cGVHD患者外周血中表達較低。2、miRNA155的表達與Smad2蛋白的表達呈負相關,在口腔cGVHD的發(fā)生過程中miRNA155可能通過調(diào)控靶基因影響TGF-β/Smad信號通路發(fā)揮一定作用。
【圖文】:

曲線,曲線


Smad2濃度標準曲線

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Smad3濃度標準曲線
【學位授予單位】:廣西醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:R781;R457.7

【相似文獻】

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本文編號:2700053

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