【摘要】：背景Spexin(SPX)又稱神經(jīng)肽Q,是一種新發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性神經(jīng)肽。人Spexin前原肽由基因組12號染色體上C12orf29基因編碼。Spexin的氨基酸序列在脊椎動物中高度保守,Spexin基因和蛋白在人及嚙齒類動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織中廣泛表達。Spexin參與調(diào)節(jié)多種生理功能,包括攝食、胃腸運動、能量代謝、葡萄糖及脂質(zhì)代謝等。Spexin免疫陽性細胞在嚙齒動物的腦干,三叉神經(jīng)節(jié)和大腦皮層等與疼痛信號傳遞密切相關(guān)的區(qū)域有分布,這表明Spexin可能與疼痛有關(guān)。本實驗通過應(yīng)用福爾馬林誘導(dǎo)的急性炎癥痛和乙酸誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛兩種模型,采用行為學(xué)檢測、qRT-PCR、Western blot、免疫組織化學(xué)等實驗方法研究Spexin在急性痛模型中的鎮(zhèn)痛作用及其機制。福爾馬林致痛模型可模擬人類損傷后疼痛的某些特征,具有很好的重復(fù)性,被廣泛應(yīng)用于疼痛機制的研究。乙酸誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛是研究中樞和外周疼痛的常用模型。目的探討Spexin對小鼠痛覺的影響。方法(1)采用福爾馬林炎癥痛小鼠模型,通過側(cè)腦室注射Spexin、Galr2、Galr3、KOR和MOR拮抗劑,檢測小鼠的痛覺行為;(2)側(cè)腦室注射Spexin或拮抗劑后,取腦組織,提mRNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,用qPCR檢測Galr2、Galr3、Adcy1-9、Pomc、Penk、Pdyn、Oprm1、Oprd1、Oprk1、c-Fos、Jun和Egr1 mRNA水平;(3)Spexin注射后,取腦組織,提蛋白,用Western blot檢測KOR的表達水平;(4)Spexin注射后,灌注,固定,組織包埋,切片,免疫組織化學(xué)檢測中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)區(qū)(PAG)內(nèi)c-Fos陽性細胞數(shù)目;(5)在乙酸誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛小鼠模型中,檢測側(cè)腦室注射Spexin(0.081-2.43 mg/kg)對小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)的影響,qRT-PCR檢測腦組織Galr2、Galr3、Adcy1-9、Pomc、Penk、Pdyn、Oprm1、Oprd1、Oprk1、Gabra1-5、c-Fos、Jun、Egr1 mRNA水平。結(jié)果(1)在福爾馬林炎癥痛小鼠模型中,0.81 mg/kg和2.43 mg/kg Spexin可顯著縮短小鼠在第I時相第(早期時相,0-10 min)的舔/咬后爪時間,2.43 mg/kg Spexin顯著減少第II時相(晚期時相,10-30 min)舔/咬的時間,陽性對照甘丙肽GAL(0.32 mg/kg)在第I時相和第II時相均明顯縮短小鼠舔/咬后爪時間;(2)qRT-PCR結(jié)果顯示,側(cè)腦室注射Spexin能顯著提高Galr3及Galr3下游Adcy4mRNA水平,并且Galr3拮抗劑SNAP37889(0.018 mg/kg)能夠阻斷Spexin在福爾馬林炎癥痛模型中的鎮(zhèn)痛作用,說明Spexin的鎮(zhèn)痛作用是通過Galr3介導(dǎo)的;(3)阿片受體拮抗劑nor-BNI(73.47 mg/kg)能阻斷Spexin(2.43 mg/kg)的鎮(zhèn)痛反應(yīng);qRT-PCR結(jié)果顯示Spexin提高了Pdyn和Oprk1 mRNA水平,但不影響Pomc、Penk、Oprm1和Oprd1 mRNA水平;Western blot結(jié)果顯示Spexin顯著提高了KOR蛋白的表達,這表明Spexin的鎮(zhèn)痛作用是通過Pdyn/KOR實現(xiàn)的;(4)Spexin顯著提高了小鼠腦組織c-Fos mRNA水平;c-Fos抑制劑T-5224(100mg/kg)能夠拮抗Spexin誘導(dǎo)的Pdyn和Oprk1 mRNA升高;免疫組織化學(xué)技術(shù)結(jié)果顯示Spexin(2.43 mg/kg)能顯著增加尾側(cè)(前囟-4.9 mm)PAG背內(nèi)側(cè)、端側(cè)和腹外側(cè)c-Fos陽性細胞個數(shù);表明Spexin的鎮(zhèn)痛作用與c-Fos有關(guān);(5)在乙酸誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛模型中,Spexin能夠顯著減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),qRT-PCR結(jié)果顯示Spexin提高Galr2、Adcy1、Pomc、Oprm1、c-Fos mRNA水平。結(jié)論1側(cè)腦室注射Spexin(0.81,2.43 mg/kg)在福爾馬林致小鼠急性炎癥痛模型中具有明顯鎮(zhèn)痛作用,該作用是通過Galr3/Adcy4/FOS/Pdyn/KOR路徑實現(xiàn)的;2中樞Spexin(0.81,2.43 mg/kg)在乙酸誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛小鼠模型中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用,該作用與Galr2、Adcy1、c-Fos、Pomc、Oprm1基因有關(guān)。
【圖文】：

觀察30 min內(nèi)小鼠第I時相（0-10 min）和第II時相（10-30 min）舔/咬爪時間。在第I時相（圖3-1A），Spexin0.81 mg/kg和2.43 mg/kg可顯著縮短小鼠的舔/咬時間（P<0.01，P<0.001），低劑量組（Spexin 0.081 mg/kg）與對照組相比無明顯差異（P=0.80）。在第II時相（圖3-1B），與對照組比較，2.43 mg/kg的Spexin，小鼠的舔/咬時間顯著減少（P<0.05），，在0.081或0.81mg/kg劑量（0.081 mg/kg，P=0.97；0.81 mg/kg
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R402

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本文編號：2691523