【摘要】：目的通過初步研究探討核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)信號(hào)通路抑制劑PS1145對(duì)膿毒癥炎癥反應(yīng)影響,研究多糖-蛋白復(fù)合物(Glycocalyx,GCX)在膿毒癥血管功能障礙中的作用以及其與血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB信號(hào)之間的關(guān)系,為膿毒癥的治療提供新的思路和方法。方法1、通過腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(10 mg/kg)復(fù)制膿毒癥小鼠模型(Lipopolysaccharide組,LPS組,簡(jiǎn)稱L組);同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組(Control組,簡(jiǎn)稱C組),予腹腔注射等劑量0.9%生理鹽水;實(shí)驗(yàn)組為給腹腔注射LPS的小鼠采用尾靜脈注射IκB激酶特異性阻滯劑PS1145(50mg/kg)抑制NF-κB信號(hào)(PS-1145 dihydrochloride+Lipopolysaccharide組,簡(jiǎn)稱P組),實(shí)驗(yàn)共分三組,即C組,L組,P組。2、監(jiān)測(cè)三組小鼠血流動(dòng)力學(xué)情況,給予靜脈注射去甲腎上腺素(300 ng/kg,iv)和乙酰膽堿(600 ng/kg,iv),通過監(jiān)測(cè)小鼠模型給藥后收縮壓變化幅度值觀察其對(duì)血管收縮劑和舒張劑的反應(yīng)性。3、采用ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)三組小鼠血漿中核心蛋白質(zhì)多配體聚糖-1(Syndecan-1,SDC-1)水平以反映血管內(nèi)皮多糖-蛋白復(fù)合物的情況。4、采用Western-Blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)腸系膜動(dòng)脈血管上內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,i NOS)的表達(dá)情況,采用ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)血漿中一氧化氮(Nitrogen Monoxide,NO)水平,探討膿毒癥血管功能障礙與血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB信號(hào)之間的關(guān)系。5、通過伊文思藍(lán)染色(Evans blue dye,EBD)法測(cè)定小鼠心肌組織、肺臟和腸系膜組織EBD值,研究三組小鼠模型血管通透性的變化情況。6、通過濕干重比值測(cè)量觀察三組小鼠心肌組織、肺臟和腸系膜組織的水腫情況。7、采用ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)三組小鼠模型血漿中腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平以反映它們的炎癥反應(yīng)情況。結(jié)果1、造模后小鼠的一般情況:L組小鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少,精神萎靡,毛發(fā)直立,眼部膿性分泌物增多等膿毒癥癥狀明顯,P組小鼠上述癥狀較L組輕,C組無上述癥狀。三組小鼠模型的膿毒癥狀表現(xiàn)程度明顯不一樣(c2=12.9,p=0.002),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。L組膿毒癥狀(平均秩12.5)明顯高于C組(平均秩3.0)和P組(平均秩8.5)。2、三組小鼠模型血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果:(1)重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果指出,三組小鼠模型基礎(chǔ)收縮壓值有時(shí)間效應(yīng)(F=118.02,p=0.000),三組小鼠模型基礎(chǔ)收縮壓隨時(shí)間變化組間均值差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.926,p=0.000)。三組小鼠沒有使用血管活性藥物時(shí)的收縮壓基本情況:模型建立1 h時(shí),L組基礎(chǔ)收縮壓(102.4±1.0 mm Hg)低于C組(113.3±1.528 mm Hg,p=0.000)和P組(104.0±1.0 mm Hg,p=0.004);模型建立2 h時(shí),L組基礎(chǔ)收縮壓(102.0±1.0 mm Hg)明顯低于C組(114.3±0.928 mm Hg,p=0.001),略低于P組(102.67±0.577 mm Hg,p0.05);模型建立6 h時(shí),L組基礎(chǔ)收縮壓(85.67±1.528 mm Hg)明顯低于C組(112.33±2.082 mm Hg,p=0.003)和P組(89.0±1.0 mm Hg,p=0.002)。(2)重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果分析指出,三組小鼠模型對(duì)去甲腎上腺素收縮壓增幅值沒有時(shí)間效應(yīng)(F=9.489,p=0.095)。三組小鼠對(duì)血管收縮劑反應(yīng)性監(jiān)測(cè)結(jié)果:模型建立1 h時(shí),給小鼠尾靜脈注射去甲腎上腺素(300 ng/kg)后,L組收縮壓上升幅度(8.88±0.177 mm Hg)較C組(14.65±0.495 mm Hg,p=0.006)和P組(10.93±0.099 mm Hg,p=0.005)低;2、6 h結(jié)果類似。(3)重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果分析指出,三組小鼠模型對(duì)乙酰膽堿收縮壓減幅值沒有時(shí)間效應(yīng)(F=0.055,p=0.948)。三組小鼠對(duì)血管舒張劑反應(yīng)性監(jiān)測(cè)結(jié)果:模型建立1 h時(shí),給小鼠尾靜脈注射乙酰膽堿(600 ng/kg,iv)后,L組收縮壓下降幅度(4.72±0.395 mm Hg)較C組(7.115±0.219 mm Hg,p=0.001)和P組(7.94±0.077 mm Hg,p=0.003)低;2、6 h結(jié)果類似。3、三組小鼠模型血漿中SDC-1檢測(cè)結(jié)果:重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果分析指出,三組小鼠模型SDC-1濃度隨時(shí)間變化而變化(F=865.445,p=0.001)。模型建立1 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組SDC-1濃度(121.12±3.76 ng/ml)較C組(93.64±3.64 ng/ml)高(p=0.003),較P組(144.30±6.3ng/ml,p=0.108)低;模型建立2 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組SDC-1濃度(224.76±6.83ng/ml)較C組(98.80±0.35 ng/ml,p=0.002)和P組(197.54±3.91 ng/ml,p=0.001)高;模型建立6 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組SDC-1濃度(324.06±1.93 ng/ml)明顯高于C組(85.28±2.50 ng/ml,p=0.012)和P組(233.42±1.64 ng/ml,p=0.005)。4、三組小鼠模型血管功能障礙相關(guān)分子檢測(cè)結(jié)果(1)三組小鼠模型腸系膜組織血管上e NOS、i NOS的表達(dá)水平Western-Blot檢測(cè)結(jié)果:建立模型6 h取得小鼠腸系膜組織血管測(cè)得,L組e NOS表達(dá)相對(duì)灰度值(3.46±0.07)較C組(5.124±0.03)降低(p=0.013),P組e NOS表達(dá)相對(duì)灰度值(4.80±0.09)較L組升高(p=0.042);L組i NOS表達(dá)相對(duì)灰度值(0.572±0.003)較C組(0.331±0.001)升高(p=0.002),P組i NOS表達(dá)相對(duì)灰度值(0.538±0.005)較L組降低(p=0.003)。(2)三組小鼠模型血漿中NO ELISA檢測(cè)結(jié)果:重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果分析指出,三組小鼠模型NO濃度有時(shí)間效應(yīng)(F=7.529,p=0.017)。模型建立1 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組NO濃度(0.21±0.04mg/dl)較C組(0.18±0.08 mg/dl)高(p=0.044),P組NO濃度(0.33±0.01 mg/dl)較L組高(p=0.047);模型建立2 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組NO濃度(1.23±0.03mg/dl)較C組(0.34±0.04 mg/dl,p=0.021)和P組(0.58±0.07 mg/dl,p=0.019)明顯升高;模型建立6 h取得小鼠血漿測(cè)得,小鼠NO濃度較前有所下降,但L組NO濃度(0.37±0.07 mg/dl)較C組(0.15±0.03 mg/dl,p=0.025)和P組(0.22±0.03mg/dl,p=0.039)高。5、三組小鼠模型EBD染色測(cè)定結(jié)果模型建立6 h取得小鼠心肌組織、腸系膜組織、肺臟組織測(cè)得,L組EBD濃度均較C組和P組高(p0.05)。6、三組小鼠模型心肌組織、肺臟和腸系膜組織的濕干重比值(W/D)結(jié)果模型建立6 h取得小鼠心肌組織、肺臟組織、腸系膜組織測(cè)得,L組W/D值均大于C組和P組(p0.05)。7、三組小鼠模型血漿中TNF-ɑELISA檢測(cè)結(jié)果重復(fù)測(cè)量方差分析結(jié)果分析顯示,三組小鼠模型TNF-ɑ濃度沒有時(shí)間效應(yīng)(F=8.134,p=0.109)。模型建立1 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組TNF-ɑ濃度(3695±29pg/ml)較C組(2115±27 pg/ml)高(p=0.001),P組TNF-ɑ濃度(4435±31 pg/ml)較L組高(p=0.081);模型建立2 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組TNF-ɑ濃度(4099.99±22.56 pg/ml)高于C組(3691±26 pg/ml,p=0.003)和P組(3983.33±27.8pg/ml,p=0.017);模型建立6 h取得小鼠血漿測(cè)得,L組TNF-ɑ濃度(3699.66±21.73pg/ml)較C組(3008.21±50.08 pg/ml,p=0.001)和P組(3499.9±16.02 pg/ml,p=0.011)高。結(jié)論1、LPS可引起小鼠嚴(yán)重的膿毒癥,表現(xiàn)為嚴(yán)重血管炎癥反應(yīng),血壓下降,對(duì)血管收縮劑和舒張劑反應(yīng)性降低,血管內(nèi)皮多糖-蛋白復(fù)合物損傷脫落,血管通透性增加和組織水腫嚴(yán)重。2、NF-κB信號(hào)通路抑制劑PS1145則可明顯抑制膿毒癥血管炎癥反應(yīng),改善動(dòng)物對(duì)血管收縮劑和舒張劑的反應(yīng)性,減輕血管內(nèi)皮多糖-蛋白復(fù)合物損傷脫落,改善血管通透性,減輕組織水腫。
【圖文】：

6.25 0.0873.125 0.0551.5625 0.0430.78125 0.0390.390625 0.039表 1：倍比稀釋 EBD 濃度與對(duì)應(yīng)吸光度值注：EBD 指伊文思藍(lán)染色(Evans blue dye）；OD 指吸光度

圖 2 小鼠模型基礎(chǔ)收縮壓值比較注 * ：與 C 組對(duì)比 p<0.05；#：與 LPS 組對(duì)比 p<0.05；h 指小時(shí)；LPS(Lipopolysaccharide，，LPS)組；PS1145+LPS 組指 PS1145 dihydrochloride+Lipop組；數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SEM）表示，每組樣本量為 n=5；1、2、6較分析見重復(fù)測(cè)量分析結(jié)果。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：2688523