發(fā)布時(shí)間：2020-05-28 23:38

【摘要】：第一部分交泰丸對慢性不完全性睡眠剝奪大鼠睡眠結(jié)構(gòu)的影響目的選擇性飼養(yǎng)并篩選獲得肥胖抵抗(OR)大鼠,給予噪音干擾建立慢性不完全性睡眠剝奪(PSD)動物模型,并研究交泰丸(JTW)對PSD大鼠睡眠結(jié)構(gòu)的干預(yù)作用。方法制備交泰丸并進(jìn)行交泰丸配方顆粒高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜分析。200只雄性SD大鼠經(jīng)高脂高能量飼料喂養(yǎng)2周后,選擇體重增長率最低的80只(大鼠總數(shù)量40%以下)大鼠做為OR大鼠。并在慢性睡眠剝奪前一周對其中30只OR大鼠進(jìn)行顱骨腦電極植入術(shù),另50只OR大鼠用于第二、三部分動物研究。將該30只OR大鼠隨機(jī)分為正常組,模型組,低劑量交泰丸組,高劑量交泰丸組及艾司唑侖組。除正常組外其余大鼠給予噪音干擾進(jìn)行慢性不完全性睡眠剝奪,睡眠剝奪期間同時(shí)給予相應(yīng)組別藥物(交泰丸或艾司唑侖)灌胃,4周后采集各組OR大鼠腦電圖并分析其睡眠結(jié)構(gòu)。結(jié)果交泰丸主要成分包括鹽酸小檗堿、肉桂酸、桂皮醛、鹽酸藥根堿、鹽酸黃連堿和鹽酸巴馬汀。與正常組比較,模型組大鼠總睡眠時(shí)間(TST)、總慢波睡眠時(shí)間(SWS_(total))、慢波睡眠1期(SWS_1)和慢波睡眠2期(SWS_2)時(shí)間均顯著減少(P0.01);與模型組比較,兩組交泰丸組和艾司唑侖組大鼠總睡眠時(shí)間(TST)、總慢波睡眠時(shí)間(SWS_(total))均顯著增加(P0.01),尤其是慢波睡眠1期(SWS_1)(P0.01,P0.01和P0.05)。交泰丸輕度增加慢波睡眠2期(SWS_2)時(shí)間,但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論交泰丸對慢性不完全性睡眠剝奪OR大鼠的睡眠具有明顯的改善作用。第二部分交泰丸對慢性不完全性睡眠剝奪大鼠腸粘膜損傷的干預(yù)作用目的睡眠不足可以導(dǎo)致機(jī)體腸道損傷。本實(shí)驗(yàn)研究交泰丸對慢性不完全性睡眠剝奪大鼠腸道損傷的干預(yù)作用及其可能的相關(guān)機(jī)制。方法肥胖抵抗(OR)大鼠(來自第一部分實(shí)驗(yàn))隨機(jī)分為正常組,模型組,低劑量交泰丸組,高劑量交泰丸組和艾司唑侖組。以噪音干擾建立OR大鼠慢性PSD模型,每日10:00-14:00,連續(xù)4周。睡眠剝奪的同時(shí)分別給予治療組大鼠不同劑量交泰丸或艾司唑侖灌胃。4周后采集各組大鼠血漿及回腸組織,并檢測血漿中脂多糖(LPS)濃度。HE染色觀察小腸上皮病理改變。免疫熒光和Western blot方法測定回腸組織緊密連接蛋白Occludin(Ocln)。腸道中生物鐘隱花色素1蛋白(CRY1)和隱花色素2蛋白(CRY2)的表達(dá)亦通過Western blot方法測定。結(jié)果與對照組比較,模型組大鼠血漿LPS濃度顯著增高(P0.05)。同時(shí)模型組大鼠出現(xiàn)腸道損傷,表現(xiàn)為小腸絨毛變短、變稀疏且結(jié)構(gòu)不完整,絨毛間隙變寬,粘膜水腫充血等,伴隨小腸組織緊密連接蛋白Ocln表達(dá)減少(P0.01)和生物鐘蛋白CRY1和CRY2的表達(dá)減少(P0.01)。與模型組比較,高劑量交泰丸組大鼠血漿LPS水平顯著降低(P0.05)。兩組交泰丸組中大鼠腸道損傷較模型組明顯改善,同時(shí)小腸組織緊密連接蛋白Ocln表達(dá)增加(P0.05,P0.01),生物鐘蛋白CRY1和CRY2的表達(dá)增加(P0.01)。結(jié)論交泰丸對慢性不完全性睡眠剝奪肥胖抵抗大鼠腸道損傷有一定的改善作用,其機(jī)制可能是交泰丸上調(diào)腸道生物鐘隱花色素蛋白CRY1、CRY2并上調(diào)腸道緊密連接蛋白Ocln的表達(dá)從而改善腸道損傷引起的炎癥。第三部分從生物鐘蛋白CRY相關(guān)炎癥信號通路探討交泰丸改善慢性不完全性睡眠剝奪大鼠睡眠和胰島素抵抗的共同分子機(jī)制目的從生物鐘蛋白CRY相關(guān)炎癥信號通路探討交泰丸改善慢性不完全性睡眠剝奪大鼠睡眠和胰島素抵抗的共同分子機(jī)制。方法肥胖抵抗(OR)大鼠隨機(jī)分為正常組,模型組,低劑量交泰丸組、高劑量交泰丸組和艾司唑侖組。以噪音干擾建立OR大鼠慢性PSD模型,每日10:00-14:00,連續(xù)4周。睡眠剝奪的同時(shí)分別給予治療組大鼠不同劑量交泰丸或艾司唑侖灌胃。4周后采集各組大鼠血漿、下丘腦、肝臟及脂肪組織。計(jì)算總進(jìn)食量及代謝指標(biāo)如體重增長率、空腹血漿血糖濃度(FPG)及空腹胰島素濃度(FINS),并計(jì)算HOMA-IR值。ELISA法檢測血漿中炎癥指標(biāo)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素6(IL-6)和白細(xì)胞介素1β(IL-1β)的水平。Real-time PCR法檢測下丘腦、肝臟及脂肪組織炎癥指標(biāo)TNF-a、IL-6和IL-1βm RNA的表達(dá)水平。使用Western Blot法檢測下丘腦、肝臟及脂肪組織核因子k B(NF-k B p65)蛋白的活性,檢測胰島素磷脂酰肌醇激酶3/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路中各相關(guān)蛋白如胰島素受體(Ins R)、磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)、蛋白激酶B、磷酸化蛋白激酶B及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和生物鐘蛋白CRY1和CRY2的表達(dá)。同時(shí)使用Western Blot法檢測下丘腦組織環(huán)磷酸腺苷蛋白(c AMP)及血管擴(kuò)張刺激磷蛋白(VASP)的表達(dá)。結(jié)果與對照組比較,模型組大鼠具有更高的總進(jìn)食量和體重增長率(P0.01,P0.05);FPG、FINS及HOMA-IR顯著增高(P0.01);血漿各炎癥指標(biāo)濃度顯著增高(P0.01)。與模型組比較,交泰丸組的大鼠食物攝取量和體重增長率明顯降低(低劑量組P0.05,高劑量組P0.01);高劑量交泰丸組FPG、FINS及HOMA-IR顯著降低(P0.01)。血漿各炎癥指標(biāo)的水平下降(P0.01);同時(shí),交泰丸組大鼠下丘腦、肝臟及脂肪組織NF-k B活性下降,炎癥因子m RNA的表達(dá)水平降低。高劑量交泰丸組大鼠下丘腦組織中PI3K、AKT磷酸化水平和GLUT3表達(dá)水平顯著升高(P0.05,P0.01);肝臟組織中Ins R、PI3K、AKT磷酸化水平和GLUT4表達(dá)水平顯著升高(P0.05,P0.01);脂肪組織中Ins R、PI3K、AKT磷酸化水平和GLUT2表達(dá)水平亦顯著升高(P0.05,P0.01)。高劑量交泰丸組大鼠生物鐘蛋白CRY1和CRY2的表達(dá)較模型組增加(P0.05,P0.01)。同時(shí),高劑量交泰丸組大鼠下丘腦c AMP/PKA信號通路被抑制(P0.01)。結(jié)論交泰丸可改善慢性睡眠剝奪肥胖抵抗大鼠的睡眠和胰島素抵抗,其機(jī)理可能和上調(diào)生物鐘蛋白CRY1和CRY2的表達(dá),抑制其下游c AMP/PKA和NF-k B炎癥信號通路,從而改善胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)PI3K/AKT信號通路缺陷有關(guān)。
【圖文】：

交泰丸主要成分三維UPLC

批交泰丸HPLC指紋圖譜
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R740

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2686013