【摘要】：研究目的:篩選復(fù)發(fā)性泌尿系感染(Recurrent Urinary Tract Infection,RUTI)病例,收集并鑒定尿路致病大腸埃希菌(UropathogenicEscherichia coli,UPEC)菌株;分析UPEC菌株的藥物敏感性特征,為臨床治療RUTI提供幫助;分析UPEC菌株的分子流行病學(xué)特征和毒力特征,及其在引起RUTI過程中的生物學(xué)作用,為后續(xù)探索RUTI的治療和預(yù)防方法提供信息。研究方法:1.通過WHONET軟件篩選2011-2015年間解放軍總醫(yī)院收治的RUTI病例;采用VITEK MS對(duì)UPEC菌株進(jìn)行菌種鑒定;使用VITEK藥敏卡分析UPEC菌株對(duì)常用抗菌藥物的敏感性。2.使用脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field Gel Electrophoresis,PFGE)方法分析 UPEC菌株的同源性特征;使用多重聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法鑒定菌株的系統(tǒng)發(fā)生分型;多位點(diǎn)序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)按照網(wǎng)站推薦的方法分析。3.使用多重PCR方法分析UPEC菌株的毒力基因分布;按照相關(guān)文獻(xiàn)所述方法分析UPEC菌株的血清抵抗能力、運(yùn)動(dòng)能力與趨化能力、生物被膜形成能力以及細(xì)胞粘附與侵入能力;UPEC菌株的血清抵抗能力及細(xì)胞粘附與侵入能力結(jié)果進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),運(yùn)動(dòng)能力與趨化能力是測(cè)定菌落的生長直徑,生物被膜形成能力則測(cè)定每株菌株被結(jié)晶紫染液染色后的OD值。4.采用SPSS 22.0軟件對(duì)所有結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果:1.經(jīng)篩選、分離、鑒定共收集得到121例RUTI病例,311株UPEC菌株。這些UPEC菌株對(duì)10種抗菌藥物的耐藥率大于60%,并且超過75%的UPEC菌株對(duì)青霉素類以及喹諾酮類抗菌藥物耐藥;而大部分UPEC菌株對(duì)阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢替坦以及碳青霉烯類藥物較為敏感。隨著患者年齡增長,所分離的UPEC菌株對(duì)頭孢菌素類、單環(huán)內(nèi)酰胺類、以及硝基呋喃類藥物耐藥率呈下降趨勢(shì)。超過70%的產(chǎn)超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶(Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBL)UPEC 菌株對(duì)復(fù)方磺胺甲VA唑以及四環(huán)素耐藥。住院與門診患者所分離菌株的耐藥情況無明顯差異。2.經(jīng)同源性分析后,將RUTI患者分為兩組:持留感染組(Persistence)59例,共分離到59株UPEC菌株;再感染組(Reinfection)32例,共分離到64株UPEC菌株。其中,再感染組中初次感染組和再次感染組分別為32例。持留感染組UPEC菌株系統(tǒng)發(fā)生型以B2型為主,D型、A型和B1型次之;再感染組UPEC菌株則以A型為主,其次為B2型、D型和B1型,其中,初次感染組的系統(tǒng)發(fā)生型主要為A型,D型次之,再次感染組菌株則以A型為主,其次為D型。持留感染組UPEC菌株的ST型以ST131為主,其次為ST648、ST1193.、ST405。再感染組UPEC菌株的ST型以 ST1193 居多,其次為 ST167、ST405、ST648、ST131。3.持留感染組UPEC菌株所攜帶的毒力因子種類平均為12.3種,而再感染組UPEC菌株為9.5種,兩組有顯著差異(P0.001)。兩組UPEC菌株的血清抵抗能力(P0.001)、細(xì)胞粘附能力(P=0.017)及侵入能力(P=0.041)均有顯著差異。兩組UPEC菌株的運(yùn)動(dòng)能力(P=0.858)及生物被膜形成能力(P=0.07)沒有顯著差異。結(jié)論:1.本文研究收集的UPEC菌株數(shù)量符合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析大樣本要求。在臨床條件允許情況下,RUTI患者可以選擇哌拉西林/他唑巴坦、頭孢派酮/舒巴坦等抗菌藥物作為用藥參考;青霉素類以及喹諾酮類藥物已不適合作為RUTI的經(jīng)驗(yàn)性治療藥物。頭孢哌酮/舒巴坦、厄他培南可作為治療老年RUTI患者的用藥選擇。2.UPEC菌株的系統(tǒng)發(fā)生型別及MLST型別表明持留感染組UPEC菌株具有更強(qiáng)的毒力,能為后續(xù)UPEC菌株的毒力研究提供參考依據(jù)。3.UPEC菌株毒力特征研究結(jié)果表明,持留感染組UPEC菌株攜帶有更多的毒力因子,但對(duì)正常人機(jī)體血清較為敏感;再感染組RUTI患者初次分離的UPEC菌株與持留感染組UPEC菌株具有相類似的生物學(xué)特性。UPEC菌株的運(yùn)動(dòng)與趨化能力及生物被膜形成能力可能不是其引起機(jī)體泌尿系統(tǒng)持留感染中的關(guān)鍵因素。持留感染組UPEC菌株對(duì)泌尿道上皮細(xì)胞具有更強(qiáng)的粘附與侵入能力可能是其引起機(jī)體泌尿系統(tǒng)持留感染的重要前提。
【圖文】：

圖１邋ＰＣＲ產(chǎn)物電泳條帶結(jié)果圖逡逑４．３．８統(tǒng)計(jì)分析逡逑

１．ＰＦＧＥ同源性分析結(jié)果逡逑對(duì)１２１例ＲＵＴＩ病例的３１１株ＵＰＥＣ菌株進(jìn)行脈沖場凝膠電泳，截取部分電泳圖逡逑譜結(jié)果如圖２所示，Ｈ９８１２標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)酶切后有１６條電泳條帶，與標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果較為接逡逑近。所有電泳圖譜使用軟件Ｂｉｏｎｕｍｅｒｉｃｓ分析后，將ＵＰＥＣ菌株分為兩組，持留感染逡逑組５９例，，共５９株菌株（圖３）和再感染組３２例，共６４株菌株（圖４）。持留感染組逡逑為經(jīng)ＰＦＧＥ同源性分析后，同一邋ＵＰＥＣ菌株引起的多次ＵＴＩ；再感染組為經(jīng)ＰＦＧＥ同逡逑源性分析后，不同ＵＰＥＣ菌株引起的多次ＵＴＩ。持留感染組選取每例病例首次分離的逡逑ＵＰＥＣ菌株作為后續(xù)研究對(duì)象，編號(hào)為ＵＲ００１－ＵＲ０５９，Ｇｒｏｕｐｌ。再次感染組每例病逡逑例的兩株ＵＰＥＣ菌株均選取納入作為后續(xù)研究對(duì)象，編號(hào)為ＵＲ１０１－ＵＲ１６４，邋Ｇｒｏｕｐ２。逡逑１２３４５６７８９邐１０邐１１逡逑ｆｃ—ｉ＂】ｉ－邋ｉｓｉ逡逑圖２邋ＰＦＧＥ電泳圖，第１、６、１１泳道為Ｈ９８１２標(biāo)準(zhǔn)菌株，其他為ＵＰＥＣ菌株。逡逑３３逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.5;R691.3

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