【摘要】：目的:1.通過新一代測序技術(shù)、DNA微陣列技術(shù)及Sanger測序技術(shù)等方法,分析出血性疾病的分子病理,建立疑難的遺傳性出血性疾病病例的分子診斷與鑒別診斷平臺。本研究選取了兩例疑難出血性病例進行分析:通過對一例22q11微缺失綜合征患者的研究,探索影響該綜合征發(fā)病的新候選致病基因及分子病理,以深化我們對22q11微缺失綜合征的認識;通過對一例血紅蛋白Hornchurch并發(fā)血小板減少癥患者的研究,探索血紅蛋白Hornchurch的實驗室及臨床特征。2.通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)建立遺傳性出血性疾病模型,并進行基因治療的初步探索,希望能夠為單基因遺傳性疾病的基因治療提供新策略。采用CRISPR/Cas9技術(shù)建立罕見病α1-抗胰蛋白酶Pittsburgh突變的細胞模型,為下一步的基因治療奠定基礎(chǔ)。方法:1.收集于2015-2017年間在蘇州大學附屬第一醫(yī)院血液科門診未獲得明確診斷的出血性疾病患者標本,采用基因測序技術(shù)進行基因診斷,并對確診患者進行臨床及實驗室特征分析和總結(jié)。2.通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)建立α1-抗胰蛋白酶Pittsburgh突變的細胞模型,并采用實時熒光定量PCR技術(shù)(q-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(Western Blot,WB)檢測α1-抗胰蛋白酶在m RNA和蛋白質(zhì)水平上的表達情況。結(jié)果:1.22q11微缺失綜合征發(fā)病的新候選致病基因篩選通過應(yīng)用微陣列分析技術(shù)對1例22q11微缺失綜合征患者進行檢測,發(fā)現(xiàn)了長度為125kb的基因片段缺失(染色體22:24276973-24402263),涉及8個基因:GSTT2B、GSTT2、DDTL、DDT、GSTTP1、LOC391322、GSTT1和GSTTP2。以上基因不在已報道的致病位點中,它們可能參與第三和第四咽弓的發(fā)育,也可能參與調(diào)控22q11DS的已知致病基因。2.血紅蛋白Hornchurch患者的臨床及實驗室特征通過對血紅蛋白基因測序診斷1例血紅蛋白Hornchurch患者,我們對其臨床及實驗室特征進行了分析和總結(jié)。該例患者表現(xiàn)為異丙醇沉淀試驗陽性,表明血紅蛋白Hornchurch的結(jié)構(gòu)異常和功能特性的關(guān)系需要進一步研究。另一方面,這提示中國人群中可能存在更多待發(fā)現(xiàn)的血紅蛋白變異體及其攜帶者。3.α1-抗胰蛋白酶Pittsburgh突變的細胞模型建立我們通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)成功建立了α1-抗胰蛋白酶Pittsburgh突變的細胞模型。結(jié)論:1.本研究通過對診斷未明的出血性疾病病例進行基因診斷,確診了數(shù)例罕見出血性疾病并分析了相應(yīng)臨床特點及實驗室特征,同時揭示了基因測序在遺傳性出血性疾病診斷中的重要作用。2.應(yīng)用微陣列分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)了22q11微缺失綜合征的8個可能的新致病基因:GSTT2B、GSTT2、DDTL、DDT、GSTTP1、LOC391322、GSTT1和GSTTP2。我們發(fā)現(xiàn)了血紅蛋白Hornchurch患者的異丙醇沉淀實驗陽性,提示血紅蛋白Hornchurch結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性,同時表明中國人群中可能存在更多的血紅蛋白變異體及其攜帶者。3.通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)成功建立了α1-抗胰蛋白酶Pittsburgh突變細胞模型,為后續(xù)基因治療研究奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

3圖 1. 微 陣 列 分 析 揭 示 長 度 為 125kb 的 基 因 片 段 缺 失 （ 染 色 體 22 ：24276973-24402263），涉及8個基因：GSTT2B、GSTT2、DDTL、DDT、GSTTP1、LOC391322、GSTT1和GSTTP2表 1. 患者病史的時間表日期 診治摘要 實驗室檢查 干預2005 反復呼吸道感染; 診斷：先天性房間隔缺損超聲心動圖：房間隔缺損手術(shù)修復2006 頸部、下頜下淋巴結(jié)腫大內(nèi)窺鏡：扁桃體肥大 扁桃體切除術(shù)2013 反復呼吸道感染 纖維支氣管鏡：氣管狹窄氣管淋巴結(jié)摘除2014.7 打鼾和張口呼吸; 診 多導睡眠圖：呼吸暫停 淋巴結(jié)清掃，枕部脂

蛋白：118 g/L，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)：36×10/L，平均紅細胞體積：94.2 fL，紅細胞分寬度：13.5％和血小板計數(shù) 62×109/L。白細胞計數(shù)在正常范圍內(nèi)。肝功能顯示總膽素、直接膽紅素和間接膽紅素水平正常。溶血試驗顯示異丙醇沉淀試驗陽性。H和 HbA2分別為 7.3％（正常范圍 0.2-1.2％）和3.6％（正常范圍 2.3-3.3％）。直接 Coom試驗、紅細胞滲透脆性試驗、G-6-PD 熒光斑點試驗、Ham 試驗和蔗糖溶血試驗均陰性。高效液相色譜分析表明變異體血紅蛋白在 S 窗中洗脫，百分比為 43.1％。HB基因測序發(fā)現(xiàn) E44K（G>A）突變（圖 1）。另 方面，，患者網(wǎng)織血小板百分比和血板相關(guān)免疫球蛋白 G（PAIgG）分別為 9.8％（正常范圍 12.5±4.15％）和 43.4％（常范圍 35.6±7.4％）。單克隆抗體特異性固定血小板抗原術(shù)顯示抗 GPⅡb 抗體陽性綜合以上結(jié)果，患者被診斷為異常血紅蛋白�。℉b Hornchurch）合并血小板減少癥我們給予患者環(huán)孢菌素 A（75 mg，bid），利可君（20mg，tid）和左旋咪唑（25mgtid，3d/w）治療 3 個月。治療過程中患者未發(fā)生出血。至 2017 年 4 月底，患者血蛋白水平和血小板計數(shù)已經(jīng)恢復到 124g/L 和 66×109/L。（表 1）
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R554;R450

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7 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

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本文編號：2685298