【摘要】：本研究成功合成出兩種稀土熒光螯合劑并對(duì)通過核磁氫譜與質(zhì)譜對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn),對(duì)它們的熒光性質(zhì)的研究結(jié)果顯示兩種稀土熒光螯合劑均保持有三價(jià)銪離子的特征激發(fā)峰與發(fā)射峰,其中Eu~(3+)?bpy.bpy.py(CO_2H)_2的最大激發(fā)波長(zhǎng)為312nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為598nm和615nm,Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2的最大激發(fā)波長(zhǎng)為311nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為597nm和616nm。兩種稀土螯合劑的熒光強(qiáng)度均與濃度呈線性相關(guān),線性方程分別為Eu~(3+)?bpy.bpy.py(CO_2H)_2:y=310x-565.98,R~2=0.999;Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2:y=310x-1930,R~2=0.999。熒光壽命分別為1064μs與398μs;量子產(chǎn)率分別為10.1%與12.1%。兩種稀土螯合劑的熒光性質(zhì)滿足時(shí)間分辨熒光免疫分析的需求。以Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NH_2]_2為基礎(chǔ)進(jìn)行修飾,合成并通過質(zhì)譜確認(rèn)得到Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NHCOCH_2OCH_2COOH_2]_2。最大激發(fā)波長(zhǎng)為312nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為598nm和615nm,熒光強(qiáng)度與濃度線性方程為y=310x-1041.4,R~2=0.999。利用DCC/NHS作為脫水劑,在DMAP的催化作用下使螯合劑與抗降鈣素原檢測(cè)抗體(anti-PCT detection antibody)相結(jié)合。優(yōu)化標(biāo)記條件后通過發(fā)現(xiàn)Eu~(3+)?bpy.bpy.py[CONH(CH_2)NHCOCH_2OCH_2COOH_2]_2與抗體最佳標(biāo)記條件為:螯合劑與DCC/NHS的摩爾比為1:4:6,室溫反應(yīng)6h,與抗體蛋白以20:1的摩爾比反應(yīng)10h,可以得到標(biāo)記比為10的稀土熒光螯合劑標(biāo)記抗體。ELISA檢測(cè)結(jié)果確認(rèn)標(biāo)記后抗體蛋白效價(jià)為1:800。利用標(biāo)記的抗降鈣素原檢測(cè)抗體(anti-PCT detection antibody)與抗降鈣素原包被抗體(anti-PCT coating antibody)構(gòu)建檢測(cè)降鈣素原的時(shí)間分辨免疫熒光分析方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,anti-PCT coating antibody的最佳稀釋比例為1:200,anti-PCT detection antibody的最佳稀釋比例為1:400,最佳孵育時(shí)間為60min,在0.5~50ng/mL濃度范圍內(nèi),檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度與抗原濃度呈線性相關(guān),線性方程為y=2552.6x+4.8222,R~2=0.9928,靈敏度為0.5ng/mL,CV10%,重復(fù)性良好,與常見臨床標(biāo)志物AFP,CEA,CRP無交叉反應(yīng)。
【圖文】：

1.1 蒸餾 CCl41）向 CCl4中加入適量無水氯化鈣，放置 3 天以上；2）將三口圓底燒瓶固定于油浴鍋中，上方固定鐵圓環(huán)，并插入漏斗，漏斗下底燒瓶中。漏斗中放置適當(dāng)大小濾紙，濾紙邊緣低于漏斗邊緣；3）過濾除去 CCl4中無水氯化鈣，每次過濾液體量應(yīng)低于濾紙高度的 2/3；4）三口圓底燒瓶的中間口連接蒸餾頭，兩側(cè)分別接溫度計(jì)及加塞密封。蒸餾塞密封，側(cè)面與直流冷凝管連接，直流冷凝管后端與連接兩個(gè)單口燒瓶的三相連接。兩個(gè)單口燒瓶分別用于接取餾頭與餾分；5）直流冷凝管內(nèi)通入流動(dòng)水，油浴鍋升溫加熱至 CCl4沸點(diǎn)，溫度計(jì)監(jiān)測(cè)燒溫度；6）液體沸騰后，蒸汽在直流冷凝管中凝結(jié)流出，在一燒瓶中接取少量餾頭后股尾接管，使用另一燒瓶持續(xù)接取蒸餾出的液體；7）蒸餾出的液體置于錐形瓶中，加塞，并使用封口膜密封，，干燥器中保存

將裝置整體提出油浴鍋，加入適量碘，有劇烈氣泡產(chǎn)生，待反應(yīng)溶液顏色逐漸變淡黃色時(shí)將裝置放回油浴鍋中，反應(yīng)液中逐漸生成固體，并從四周開始聚集，即成的具有除水作用的乙醇鎂，待生成足量乙醇鎂后加入待蒸餾乙醇，回流 1h。取形冷凝管，更換直流冷凝管，操作同 2.2.1，蒸餾后收集乙醇裝于錐形瓶中，加塞保存于干燥器中。2）烘干反應(yīng)所需玻璃儀器，三口圓底燒瓶置于水浴中，上端與蛇形冷凝管連加塞密封，燒瓶?jī)蓚?cè)分別接溫度計(jì)與 N2，燒瓶中加入 42mL 絕醇。乙醇清洗刀片去鈉塊表面鈉，將鈉切絲加入反應(yīng)瓶中，產(chǎn)生氣泡并聚集，待全部加入完畢后，水浴，反應(yīng)放熱致溫度升高，待溫度穩(wěn)定后，將裝置整體移入油浴鍋中，加熱3）溫度到達(dá) 50℃時(shí)，加入對(duì)甲苯磺酰胺，提高轉(zhuǎn)速，反應(yīng)液呈糊狀乳白色4）溫度到達(dá) 78℃時(shí)，反應(yīng)液沸騰回流，反應(yīng)液粘稠度隨溫度升高而下降，反應(yīng) 2h，停止反應(yīng)；5）反應(yīng)液抽濾，使用乙醇洗滌 3 次，得到乳白色粉末進(jìn)行真空干燥。2.2.2.3 4,9-二甲苯基-4,9-二氮雜-1,2,6,7(2,6)-四吡啶環(huán)己烷的合成
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R446.6

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本文編號(hào)：2678631