【摘要】：微小RNA(miRNAs)是類長度約為22個(gè)堿基的非編碼RNA,在人體生理過程有重要功能。miRNAs的異常表達(dá)與多種疾病相關(guān),例如癌癥、代謝性疾病等。因此,miRNAs已經(jīng)成為重要的疾病早期診斷標(biāo)志物。檢測細(xì)胞中微小RNA(miRNA)的含量有助于了解miRNA的生理功能,并研究其與疾病的關(guān)系。本論文第一章介紹了miRNA及檢測miRNA的幾種方法;并闡述了本文的主要內(nèi)容及創(chuàng)新點(diǎn)。第二章介紹設(shè)計(jì)的用于檢測miRNA的方法:利用toehold介導(dǎo)的鏈置換(TMSD)反應(yīng)引發(fā)滾環(huán)擴(kuò)增(RCA),實(shí)現(xiàn)待測miRNA的信號(hào)放大,這一過程稱為TIRCA。將TIRCA的產(chǎn)物與分別連有FAM(6-羧基熒光素)和TAMRA(羧基四甲基羅丹明)兩種熒光團(tuán)的DNA鏈相連接,兩種靠近的熒光團(tuán)會(huì)產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)。利用熒光聚集增強(qiáng)效應(yīng)與兩種熒光染料靠近產(chǎn)生的熒光共振能量轉(zhuǎn)移,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)miRNA的定性檢測。這種方法可以更好的幫助我們分析miRNA在人類疾病中的作用。第三章介紹準(zhǔn)備探究miR-494和miR-6126在不同細(xì)胞中的存在狀態(tài),進(jìn)而探究它們的生理功能。選擇出檢測miR-6126的探針,驗(yàn)證了探針的成功合成并且反應(yīng)產(chǎn)物的形成。為下一步探究miRNAs的生理功能奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

都會(huì)導(dǎo)致胚胎致死[43,44]。同樣，任一基因的組織特異性敲除發(fā)育缺陷，這凸顯了大多數(shù)組織類型對(duì) miRNA功能的需求[研究是鑒定單個(gè) miRNA的生物學(xué)作用的另一種方法。這些干擾的缺點(diǎn)，這可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)的錯(cuò)誤分析。然而，它們已被RNA家族龐大而在敲除研究中未檢測到的生物學(xué)作用。此外常在疾病中發(fā)生改變，過表達(dá)研究可以模擬這種病理狀態(tài)。A靶組鑒定一起揭示了 miRNA途徑在體內(nèi)大多數(shù)組織的發(fā)育miRNA與許多生理功能有關(guān)，例如 miRNA與神經(jīng)元功能的括發(fā)育重塑和有絲分裂后神經(jīng)元細(xì)胞存活等[46-49]。miRNA還功能有關(guān)，包括中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞能[50-61]。

MB的設(shè)計(jì)中的不對(duì)稱性而不受非特異性切口的影響。一旦產(chǎn)生雙鏈酶引入切口，該切口產(chǎn)生 λ外切核酸酶的識(shí)別位點(diǎn)。在切口兩側(cè)的λ外切核酸酶通過切口酶特異性地消化含有 5'-羥基末端的鏈，并保補(bǔ)的單鏈。結(jié)果，MB的序列被消化，并且其互補(bǔ)序列被再循環(huán)。是第二個(gè)擴(kuò)增循環(huán)。由于靶標(biāo)擴(kuò)增不僅通過靶 miRNA本身的線性，而且通過新生成的單鏈 DNA的二次循環(huán)來誘導(dǎo)，因此可以檢測靶 miRNA。另外，兩個(gè)循環(huán)在同一反應(yīng)中進(jìn)行。因此，它可以方胞提取物。這種設(shè)計(jì)即使在單細(xì)胞水平也是可行的。然而，該方法離 miRNA，當(dāng)只有一些體液樣品可用時(shí)，該方法可能很麻煩，例3）。
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R440;O657.3

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