【摘要】：背景獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS),即艾滋病,其是由人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染,全身免疫系統(tǒng)遭到破壞而引起各系統(tǒng)的疾病,統(tǒng)稱為綜合征。HIV是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒,是艾滋病的病原體,對其檢測對艾滋病的診斷具有重要意義。目前對艾滋病的診斷主要是依據(jù)HIV抗體、抗原、核酸、CD4~+/CD8~+T細胞及HIV病毒的檢測。但現(xiàn)有檢測方法尚存在些許不足,如ELISA局限于處在感染窗口期、抗體不確定艾滋病的診斷;PCR、流式及病毒培養(yǎng)方法,不僅受限于實驗室及人員的高要求而且還受限于昂貴的儀器設(shè)備。為了盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病病人,及早提供咨詢、治療,同時為適應(yīng)基層艾滋病檢測工作需求,在新的形勢下,開發(fā)既能滿足目前艾滋病檢測工作的實際需求,又能體現(xiàn)檢測技術(shù)發(fā)展的HIV檢測新方法學(xué)的構(gòu)建至關(guān)重要。目的為了滿足目前艾滋病檢測工作的實際需求,利用三維DNA步行傳感器構(gòu)建HIV檢測新方法學(xué),以期達到對艾滋病的診斷。方法將帶有羧基熒光基團標(biāo)記的單鏈寡核苷酸(內(nèi)層軌道)和核酸復(fù)合物(外層軌道)組裝在一個微球上構(gòu)建雙層三維DNA步行傳感器。在目標(biāo)物存在的情況下,外部和內(nèi)部軌道依次被激活,釋放大量的熒光信號報告分子進行信號讀取從而對目標(biāo)物進行定量檢測。結(jié)果我們的雙層三維DNA步行傳感器可以在一小時內(nèi)實現(xiàn)從2pM到5 nM目標(biāo)物的檢測。此外,特異性的雙層三維DNA步行傳感器甚至可以清楚地分辨出一個堿基錯配的目標(biāo)類似物。更重要的是,我們的雙層三維DNA步行傳感器還可以檢測人血清樣品中濃度低至0.1 nM的目標(biāo)物,這為實際樣品檢測和臨床應(yīng)用架起了橋梁。結(jié)論我們首次提出了一種新穎的高度整合熵驅(qū)動和酶驅(qū)動反應(yīng)的雙層三維DNA步行傳感器并且成功應(yīng)用于HIV相關(guān)核酸的檢測。這種巧妙的方法也可以通過適當(dāng)?shù)脑O(shè)計拓展應(yīng)用到任何感興趣目標(biāo)物的研究。
【圖文】：

圖 1 雙層三維 DNA 生物傳感器擴增分析 HIV DNA 的原理圖。Fig 1. The principle of amplified analysis of HIV DNA through two-layer 3-D DNA walkerSensor.

圖 2 實驗可行性分析。（A）微球的掃描電鏡圖像。（B）聚丙烯酰胺凝膠電泳（12%非變性凝膠）驗證熵驅(qū)動催化反應(yīng)途徑。所有反應(yīng)在25℃下進行53分鐘。Line M，20 bp的DNAmarkerLine 1，反應(yīng)底物 JA + JC。Line 2，DW + JB + JA 的反應(yīng)組分。Line 3，， HIV DNA 和 JC存在時與 DW/JB/JA 的反應(yīng)產(chǎn)物。Line 4，DW。Line 5，HIV。Line 6，JA。Line 7，JB。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R512.91;R440

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本文編號：2670431