【摘要】：神經(jīng)性疼痛(Neuropathic Pain,NP)由外周神經(jīng)損傷病變所導(dǎo)致,在臨床患者除痛覺癥狀外,常伴有焦慮或抑郁等一些不良情緒發(fā)生。海馬和前額葉皮層與學(xué)習(xí)和記憶等腦高級(jí)認(rèn)知功能密切相關(guān),也參與痛覺感受和焦慮、抑郁等負(fù)面情緒的產(chǎn)生。以往研究報(bào)道,在慢性應(yīng)激或腹腔注射LPS所導(dǎo)致的抑郁大鼠,海馬小膠質(zhì)細(xì)胞激活,NLRP3(nucleotide-binding oligomerization domain,leucine rich repeat and pyrin domain containing,核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3)、炎癥因子IL-1β(interleukin-1β,白介素-1β)和IL-18(interleukin-18,白介素-18)表達(dá)上調(diào)。然而,海馬CA1區(qū)注射米諾環(huán)素是否影響CCI(chronic constriction injury of the sciatic nerve,慢性坐骨神經(jīng)縮窄性損傷)大鼠的疼痛、焦慮、抑郁樣行為以及海馬/前額葉NLRP3信號(hào)通路尚不清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)觀察:1)海馬CA1區(qū)給予小膠質(zhì)細(xì)胞活性抑制劑米諾環(huán)素對(duì)CCI大鼠熱痛閾、焦慮、抑郁樣行為的影響;2)海馬CA1區(qū)給予米諾環(huán)素對(duì)CCI大鼠海馬以及前額葉皮層Iba-1表達(dá)的影響;3)海馬CA1區(qū)給予米諾環(huán)素對(duì)CCI大鼠海馬以及前額葉皮層NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18表達(dá)的影響。目的:明確海馬CA1區(qū)注射米諾環(huán)素是否可以通過影響海馬及前額葉皮層小膠質(zhì)細(xì)胞激活和NLRP3信號(hào)通路緩解CCI大鼠的疼痛及焦慮、抑郁樣行為?方法:選用5-6周齡的SD大鼠,均進(jìn)行海馬CA1區(qū)置管。1.實(shí)驗(yàn)分組:SD大鼠,體質(zhì)量240-280g,隨機(jī)分3組(n=8):(1)假手術(shù)組(海馬CA1區(qū)注射0.01M PBS);(2)CCI組(CCI+海馬CA1區(qū)注射0.01M PBS);(3)米諾環(huán)素處理組(CCI+海馬CA1區(qū)注射1、2、5、10和15μg/μL米諾環(huán)素)。假手術(shù)組僅暴露坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎;CCI組和米諾環(huán)素處理組大鼠CA1區(qū)置管后休息7 d,進(jìn)行坐骨神經(jīng)結(jié)扎。海馬CA1區(qū)注射0.01M PBS或不同濃度的米諾環(huán)素(0.5μL,2次/日)。2.行為學(xué)檢測(cè):(1)在CCI術(shù)前1 d,術(shù)后第1、3、5、7、10、14d分別測(cè)定各組大鼠給藥1 h后的TWL(thermal withdrawal latency,熱縮足潛伏期值);(2)在CCI術(shù)前1 d、術(shù)后3、7、10和14 d分別進(jìn)行大鼠SPT(Sucrose Preference Test,糖水偏好實(shí)驗(yàn))、OFT(open field test,曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))和EMP(elevated plus-maze test,高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)),觀察大鼠的焦慮或抑郁樣行為變化。3.RTFQ-PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,實(shí)時(shí)熒光定量PCR)檢測(cè)大鼠第7、14 d海馬以及前額葉皮層NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 m RNA表達(dá);ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))檢測(cè)大鼠第7、14 d海馬以及前額葉皮層IL-1β和IL-18含量;在第7 d處死大鼠,免疫組化觀察大鼠海馬及前額葉皮層Iba-1表達(dá);WB(western blot,免疫印跡)檢測(cè)CCI大鼠第7、14 d海馬以及前額葉皮層NLRP3和Iba-1蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.痛行為學(xué)檢測(cè):大鼠CCI術(shù)后第1 d檢測(cè)到TWL下調(diào)。海馬CA1區(qū)注射米諾環(huán)素(1、2、5、10和15μg/μL)1 h后明顯抑制CCI大鼠TWL降低(P0.05)。與假手術(shù)組相比,CCI組術(shù)后第1 d,TWL下調(diào)明顯(P0.05),可持續(xù)14 d(P0.05);與CCI模型組相比,海馬給予不同濃度米諾環(huán)素組在3、5、7、10、14 d大鼠TWL明顯延長(zhǎng)(P0.05)。2.焦慮及抑郁樣行為檢測(cè):CCI組術(shù)后7、10和14 d觀察到糖水偏好下降,與假手術(shù)組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與CCI組相比,海馬注射米諾環(huán)素后第7 d和14 d后糖水偏好顯著增加(P0.05)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,CCI術(shù)后7 d曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間和移動(dòng)距離明顯下降(P0.05),在CCI術(shù)后10 d(P0.05)和14 d進(jìn)一步下降(P0.05),于第14 d下降最為明顯(P0.05);與CCI組相比,米諾環(huán)素處理組大鼠在中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間和移動(dòng)距離明顯延長(zhǎng)(P0.05)。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,CCI術(shù)后7 d進(jìn)入開放臂次數(shù)和開放臂停留時(shí)間明顯下降(P0.05),在CCI術(shù)后10 d(P0.05)和14 d進(jìn)一步下降(P0.05),第14 d下降最為明顯。與CCI組相比,米諾環(huán)素處理組進(jìn)入開放臂次數(shù)以及在開放臂停留時(shí)間明顯增加(P0.05),差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.PCR結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,CCI術(shù)后7 d,大鼠海馬及前額葉皮層NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 m RNA表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);在CCI術(shù)后第14 d,NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 m RNA表達(dá)上升更為明顯(P0.05)。與CCI組相比,海馬注射米諾環(huán)素后明顯抑制坐骨神經(jīng)損傷7 d和14 d時(shí)海馬及前額葉皮層NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 m RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)。4.ELISA結(jié)果顯示,假手術(shù)組大鼠海馬及前額葉皮層,IL-1β和IL-18含量較低水平。與假手術(shù)組相比,CCI術(shù)后7 d及14 d,海馬及前額葉皮層IL-1β和IL-18的表達(dá)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與CCI組相比,注射米諾環(huán)素明顯抑制CCI大鼠7 d及14 d海馬及前額葉皮層IL-1β和IL-18含量上升(P0.05)。5.IHC結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,CCI組大鼠海馬CA1、CA3及齒狀回以及前額葉皮層的Iba-1積分光密度明顯增強(qiáng)(P0.05);與CCI組相比,海馬注射米諾環(huán)素后CA1、CA3及齒狀回以及前額葉皮層Iba-1積分光密度明顯下降(P0.05)。6.WB結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,CCI組中大鼠海馬以及前額葉皮層Iba-1及NLRP3表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05);與CCI組相比,海馬注射米諾環(huán)素能夠明顯抑制海馬以及前額葉皮層Iba-1以及NLRP3表達(dá)上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:1.海馬注射米諾環(huán)素可以明顯抑制CCI大鼠疼痛及焦慮、抑郁樣行為。2.海馬注射米諾環(huán)素抑制海馬和前額葉皮層小膠質(zhì)細(xì)胞激活,下調(diào)NLRP3和Caspase-1表達(dá),導(dǎo)致IL-1β和IL-18產(chǎn)生減少,從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛及緩解焦慮、抑郁樣行為的效應(yīng)。
【圖文】：

圖 1：海馬注射米諾環(huán)素對(duì) CCI 大鼠不同時(shí)期疼痛行為學(xué)影響Fig. 1 Effects of intra-hippocampal injection of minocycline on thermal withdrawal latency evoked bychronic constriction injury (CCI) in rats. Pain sensitivity was determined by measuring TWL on the daybefore CCI and on days 1, 3, 5, 7, 10, and 14 after nerve injury. All values represent mean ±SD (n=8).(A) Intra-hippocampal injection of minocycline exerted anti-hyperalgesic effect as early as 1 day afternerve injury. Statistically signifcant differences were observed at 0.5, 1, and 2 h after the administrationof minocycline (1, 2 and 5μg/μL:++P<0.01; 10 and 15μg/μL:+P<0.05). (B) Comparison of TWL in hindpaw of rats. After minocycline injection, the TWL in minocycline-treated CCI rats were significantlyhigher than in the vehicle-treated CCI rats. **P<0.01, compared with sham group.+P<0.05,++P<0.01,compared with CCI rats.3.3 米諾環(huán)素減輕 CCI 神經(jīng)痛大鼠模型的焦慮以及抑郁樣行為3.3.1 海馬注射米諾環(huán)素（5μg/μL）對(duì) CCI 大鼠糖水偏好的影響在 CCI 術(shù)前 1 d、CCI 術(shù)后 3、7、10 和 14 d 測(cè)定糖水偏好的變化。如 Fig.2 所

圖 2：海馬注射米諾環(huán)素對(duì) CCI 大鼠不同時(shí)期糖水偏好的影響he effect of Minocycline on the sucrose consumption test after the CCI surgery. The sue decreased in the CCI depression group. Treatment with Minocycline （5μg/μL）) incrse preference on days 7, 10 and 14 after surgery. *P<0.05 means comparison with the P<0.05 means comparison with the CCI group (n= 8 per group) Sucrose consume (%) = sucrose consumption/ (sucrose + plain water consumption) ×100%.馬注射米諾環(huán)素（5μg/μL）對(duì) CCI 大鼠模型曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)行為學(xué)的影響果如 Fig.3 所示，，與假手術(shù)組相比，CCI 術(shù)后 3 d 曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間沒有明顯變化；但 CCI 術(shù)后 7 d 曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間和移動(dòng)距離明顯5），在 CCI 術(shù)后 10 d（P<0.05）和 14 d 進(jìn) 步下降（P<0.05），于第 14 明顯。與 CCI 組相比，米諾環(huán)素處理組大鼠在中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間和移動(dòng)長(zhǎng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R402

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7 韓朝宏 梁月冬;抗菌強(qiáng)者的弱點(diǎn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 EJ Lane 編譯 儲(chǔ)e

本文編號(hào)：2666001