發(fā)布時(shí)間：2020-05-12 12:02

【摘要】：目的探討沉默信息調(diào)節(jié)因子(Silent mating type information regulation 2homolog1,SIRT1)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用。方法于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院內(nèi)分泌科和瑞金醫(yī)院內(nèi)分泌研究所獲取大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞株(Rat insulinoma cell lines-1,INS-1),將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的INS-1細(xì)胞分成五組,分別是CON組(正常對(duì)照組)、1 mg/L LPS組(LPS作用細(xì)胞24 h),RSV+LPS組(10μmol/L RSV預(yù)處理1 h后,加入1 mg/L LPS作用24 h),EX527+LPS組(20μmol/L EX527預(yù)處理1 h后,加入1 mg/L LPS作用24 h),EX527+RSV+LPS(20μmol/L EX527預(yù)處理1 h后,加入10μmol/L RSV和1 mg/L LPS作用24 h)。用CCK8方法檢測(cè)細(xì)胞活力;檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)SOD活性,MDA、ATP及超氧化物生成;JC-1方法檢測(cè)各組細(xì)胞線粒體膜電位變化;AnnexinⅤ方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;透射電子顯微鏡下觀察線粒體損傷程度;分離提取各處理組INS-1細(xì)胞的總蛋白,質(zhì)蛋白和線粒體蛋白,Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中SIRT1、TLR4、乙�；疐oxO1蛋白表達(dá)以及細(xì)胞色素C(Cytochrome C,CytC)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的釋放,線粒體融合蛋白1(Mitofusion1,Mfn1),線粒體融合蛋白2(Mitofusion2,Mfn2)、線粒體分離蛋白1(Fission1,Fis1)的蛋白表達(dá),Real-time PCR方法檢測(cè)Mfn1、Mfn2、Fis1的基因水平。結(jié)果1.1 mg/L LPS作用于INS-1細(xì)胞24 h后,與CON組相比,INS-1細(xì)胞的細(xì)胞活力降低(P0.01),ATP生成減少(P0.05),SOD活性降低(P0.05),MDA生成增多(P0.01),超氧化物生成增加(P0.05),而RSV預(yù)處理后可以拮抗LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞活力和SOD活性的降低,減少M(fèi)DA和超氧化物的生成以及促進(jìn)ATP生成;2.與LPS組比較,EX527預(yù)處理后降低ATP的生成。RSV卻不能增加EX527預(yù)處理誘導(dǎo)的ATP生成的減少。RSV預(yù)處理能促進(jìn)SIRT1、Mfn1、Mfn2蛋白表達(dá)和基因上調(diào),降低TLR4表達(dá),減少胞質(zhì)中CytC的釋放,分離蛋白Fis1的蛋白表達(dá)減少,Fis1基因水平下調(diào)(P0.01),而FoxO1蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),FoxO1基因水平下調(diào)(P0.01)。3.LPS誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞線粒體膜電位降低,線粒體腫脹,嵴結(jié)構(gòu)紊亂,出現(xiàn)凋亡。RSV預(yù)處理可減輕線粒體功能和結(jié)構(gòu)的損傷,減少細(xì)胞凋亡。結(jié)論1 mg/L的LPS誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激,RSV可能通過(guò)增強(qiáng)SIRT1的活性,調(diào)控下游轉(zhuǎn)錄因子FoxO1的乙�；�,部分參與調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)INS-1細(xì)胞及其線粒體的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷。
【圖文】：

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文RSV 預(yù)處理后可以增強(qiáng) LPS 誘導(dǎo)的降低的 INS-1 細(xì)胞活力，約為1 倍（P <0.01），但是 EX527+LPS 組和 EX527+RSV+LPS 組與 LPS無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），且這兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P >0.0一定濃度白藜蘆醇的預(yù)處理有利于增強(qiáng) LPS 損傷所致 INS-1 細(xì)胞但是 RSV 并不能逆轉(zhuǎn) EX527 預(yù)處理后 LPS 誘導(dǎo)的細(xì)胞活力的降低

cP <0.01圖2-2 不同處理組ATP產(chǎn)生比較Figure 2-2 Comparison of ATP production in different treatment groups4.3 氧化應(yīng)激狀態(tài)下INS-1細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)變化4.3.1 TLR4、FoxO1乙�；赡軈⑴cLPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激過(guò)程10 μmol/L RSV，20 μmol/LEX527分別預(yù)處理1 h后，加入1 mg/L LPS培養(yǎng)INS-1細(xì)胞24 h后檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。圖3所示，與CON組比較，LPS誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞SIRT1表達(dá)降低，TLR4表達(dá)和FoxO1乙�；皆黾樱≒ <0.01），，EX527組和EX527+RSV+LPS組也出現(xiàn)SIRT1表達(dá)降低，TLR4和乙酰化FoxO1表達(dá)增加（P<0.01）
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2660189