發(fā)布時間：2020-05-11 08:13

【摘要】：目的:應(yīng)用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)法與尿液流式細胞儀UF-1000i兩種方法對尿液細菌計數(shù)的基礎(chǔ)性能進行比較研究,為臨床快速診斷和治療尿路感染提供可靠依據(jù)。方法:1.用紫外-可見分光光度法和麥?zhǔn)媳葷岱▽?biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853(銅綠假單胞菌)和ATCC29212(糞腸球菌)進行細菌計數(shù),比較兩種方法的相關(guān)性以及吸光度和細菌濃度的關(guān)系。2.采用煮沸法、堿液煮沸裂解法,氯仿提取法對標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853(銅綠假單胞菌)和ATCC29212(糞腸球菌)進行細菌DNA提取,并應(yīng)用FQ-PCR法進行擴增,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳比較分析。3.將標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853(銅綠假單胞菌)和ATCC29212(糞腸球菌)制成不同濃度菌懸液(活菌和死菌),應(yīng)用FQ-PCR法和細菌培養(yǎng)兩種方法對尿流式細胞儀UF-1000i尿液細菌計數(shù)進行性能評價。結(jié)果:1.在麥?zhǔn)蠞岫?.4-0.8范圍內(nèi),銅綠假單胞菌和糞腸球菌吸光度(625nm波長處)和麥?zhǔn)蠞岫扔辛己玫木€性關(guān)系。銅綠假單胞菌、糞腸球菌濃度為108CFU時,在波長為625nm處的吸光度值分別為0.163和0.155,麥?zhǔn)蠞岫榷叨紴?.5。2.三種方法對銅綠假單胞菌DNA的提取效果相同;對糞腸球菌,煮沸法經(jīng)PCR擴增未見對應(yīng)的擴增產(chǎn)物,氯仿提取法和堿液煮沸裂解法提取DNA的效果相同。3.UF-1000i對兩種菌檢測的線性范圍均在103-107CFU/ml,銅綠假單胞菌重復(fù)精密度CV在12.72%-19.46%之間,培養(yǎng)法為25.1%;糞腸球菌重復(fù)精密度CV在14.49%-15.57%之間,培養(yǎng)法為23.0%。UF-1000i和培養(yǎng)法對細菌計數(shù)測定無顯著差異(p0.05);FQ-PCR法對兩種菌檢測的線性范圍均在106-1011CFU/ml之間,銅綠假單胞菌和糞腸球菌的重復(fù)精密度CV分別在11.38%-19.76%之間、12.86-23.28之間。FQ-PCR法和培養(yǎng)法對細菌計數(shù)測定無顯著差異(p0.05)。對死菌的檢測,UF-1000i法檢測銅綠假單胞菌和糞腸球菌的準(zhǔn)確性分別為78.9%和94.7%;FQ-PCR法檢測銅綠假單胞菌和糞腸球菌的準(zhǔn)確性分別為81.5%和98.4%。培養(yǎng)法對兩種菌檢測的準(zhǔn)確性為0%(不能培養(yǎng)出死菌)。結(jié)論:1.紫外-可見分光光度法可作為銅綠假單胞菌和糞腸球菌快速計數(shù)的方法。2.煮沸法、堿液煮沸裂解法,氯仿提取法三種方法均可提取銅綠假單胞菌的DNA;堿液煮沸裂解法,氯仿提取法可提取糞腸球菌的DNA,且堿液煮沸裂解法可提取更低濃度菌的DNA,煮沸法不能提取糞腸球菌的DNA。3.UF-1000i對銅綠假單胞菌、糞腸球菌計數(shù)的性能穩(wěn)定,精密度高于細菌培養(yǎng)法和FQ-PCR法;準(zhǔn)確性和FQ-PCR法、細菌培養(yǎng)法無顯著差異,且可以準(zhǔn)確的對死菌計數(shù)。
【圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2 結(jié)果2.1 兩種菌不同麥?zhǔn)蠞岫群妥贤饪梢姺止夤舛扔嬙?625nm 處吸光度值的線性關(guān)系分別取麥?zhǔn)蠞岫葹?0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 的菌液，并用紫外可見分光光度計測A625nm值，，統(tǒng)計計算得出不同麥?zhǔn)蠞岫群?A625nm吸光度值得線性關(guān)系如圖 1 所示。

銅綠假單胞菌（菌液濃度×108cfu/ml）
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R446.12

【參考文獻】

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1 翟如波;李云慧;孫躍嶺;梅旭;邱廣斌;;泌尿系感染者病原菌的臨床分布特點及耐藥性檢測[J];中華實驗和臨床感染病雜志(電子版);2015年06期

2 張裕民;;可見分光光度法對3種細菌計數(shù)的研究[J];中國藥事;2015年10期

3 陳銳;于珊;金靜;楊大偉;劉向yN;;UF-1000i全自動尿液分析儀診斷及鑒別不同細菌致尿路感染的臨床應(yīng)用[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年09期

4 董自艷;戴

本文編號：2658161