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分子印跡技術在血型鑒定和血型轉化中的應用研究

發(fā)布時間:2020-05-06 21:09
【摘要】:輸血反應是由于血型不匹配導致的機體產生的一種免疫反應,嚴重的輸血反應會導致死亡。準確的血型鑒定是血型匹配的前提,而對于難以保證血型匹配的情況,如緊急輸血時某種血型血源尤其是稀有血型血源短缺的情況下,為了防止輸血反應的發(fā)生,需要將血細胞表面的血型抗原除去或者“屏蔽”以提供所需血型細胞的替代品,即通過血型轉化消除紅細胞血型抗原的免疫原性。所以血型鑒定和血型抗原免疫性的消除是避免輸血反應的現(xiàn)有手段。常規(guī)的血型鑒定方法是觀察紅細胞是否與相應抗體發(fā)生凝集反應判斷血型,但血型抗體尤其是稀有血型抗體的獲取十分困難,而且蛋白質的保存運輸成本較高,易受溫度、pH等條件影響其活性;另一方面,采用聚乙二醇和聚多巴胺對紅細胞進行包裹修飾的方法來消除紅細胞的免疫原性取得了成功,這種包裹能消除所有血型抗原的免疫原性,但是包裹的“嚴密性”可能會影響紅細胞行使除攜氧外的其它生理功能,如物質轉運、信號接收等。目的:通過引入分子印跡技術突破上述血型鑒定和血型化學轉化法中的限制,實現(xiàn)血型鑒定的非蛋白鑒定和紅細胞由B型向O型的特異性轉化。方法:本論文根據(jù)B型抗原與A及O型抗原決定簇結構僅一個糖基分子的差異,設計并成功合成了能特異性識別B抗原末端特有糖基的分子印跡微球和分子印跡水凝膠,將兩種材料分別應用于血型鑒定和血型轉化中。結果:將分子印跡微球吸附在玻璃纖維試紙上后,它表現(xiàn)出對B型紅細胞較強的特異性吸附作用而對A及O型紅細胞的吸附較小,吸附后的試紙還能通過聯(lián)用智能手機進行三原色光譜分析實現(xiàn)B型紅細胞的鑒定;分子印跡水凝膠修飾的B型紅細胞則與B抗體發(fā)生較弱的凝集反應,但A型紅細胞仍與A抗體發(fā)生較強凝集反應,表明利用分子印跡水凝膠在血型轉化應用中的潛力。結論:上述實驗說明分子印跡方法的引入成功地實現(xiàn)了B型紅細胞的非蛋白鑒定和紅細胞由B型向O型的特異性轉化,并且由于分子印跡方法具有通用性,因此有望將該方法應用于其它血型的鑒定和轉化,分子印跡技術在臨床輸血治療中展現(xiàn)出巨大的應用前景。
【圖文】:

半乳糖,模板分子,結構式,血型抗原


成本和精密的實驗室儀器成本,而將分于分子印跡的血型鑒定中的合成方法的同時實現(xiàn)對血型的不依賴于實驗室性地屏蔽血型抗原在眾多化學修飾法到血型轉化中,,以期對特定血型抗原的飾法在血型轉化中的應用限制。系統(tǒng)中,A、B、O 抗原結構僅表現(xiàn)為糖 血型的抗原決定簇(糖蛋白中具有免疫半乳糖(B 型),而 H 抗原(O 型抗原)末據(jù)這一差別可以設計分子印跡材料識的半乳糖分子的 1 號碳原子上的羥基基脫水形成 1,3 糖苷鍵,所以本論文采糖分子(苯基-D-吡喃半乳糖苷, P-Ga示)。

標準曲線,紫外可見光吸收,模板分子,標準曲線


圖 2-1 模板分子的紫外可見光吸收標準曲線。0、50、100、200、300、400、500ppm 的模板分子的吸光度值分6、0.342、0.608、1.074、1.353,標準曲線的線性回歸方程為 Y=0.000.9979,說明在濃度范圍為 0-500ppm 時,模板分子的吸光度值與呈良好的線性相關,因此可以根據(jù)模板分子在 267 nm 左右的吸分子的濃度,后續(xù)的關于吸附實驗中計算吸附量的公式為:Q= 0 0× 0× Q 為吸附量(mg/g),A0為吸附前吸光度值,A 為吸附后上清液度值,C0為吸附前模板分子的濃度(μg/mL),V 為溶液體積(mL料的質量(mg)。2 分子印跡功能單體的選擇各 MIP 的分散性及平衡時的吸附量如表 2-1 所示:表 2-1 各 MIP 在 PBS 中的分散性及平衡吸附量
【學位授予單位】:華中科技大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:R446.6

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本文編號:2651860

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