【摘要】：目的:人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)在腫瘤中高度表達(dá),且與惡性程度及不良預(yù)后差相關(guān)。HER2是腫瘤診治重要的生物標(biāo)志物。目前,臨床HER2表達(dá)檢測(cè)缺乏特異性、時(shí)效性和全面性。無(wú)創(chuàng)靶向HER2 PET成像技術(shù)為實(shí)時(shí)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)HER2表達(dá)程度提供了新方法。與抗體相比,親和體具有合成方便、高受體親和性、組織滲透力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì),是HER2分子探針的理想載體。但是,制備工藝繁瑣,肝腸攝取過(guò)高等多種因素制約了親和體類分子探針在臨床上的廣泛應(yīng)用。本研究擬對(duì)親和體ZHER2:342進(jìn)行修飾,引入親水性連接劑GGGRDN以期改善探針?biāo)幋鷦?dòng)力學(xué)性能,同時(shí),為便于定位標(biāo)記,在氨基酸序列末端引入半胱氨酸。所得衍生物為 Cys-GGGRDN-ZHER2:342(簡(jiǎn)寫為 Cys-MZHER2)。Cys-MZHER2 經(jīng)雙功能螯合劑偶聯(lián)后,便捷地與18F、68Ga及89Zr等正電子核素標(biāo)記反應(yīng),制得系列新型HER2 PET探針。本研究擬通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)模型鼠顯像等考察探針的靶向性和顯像性能。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步通過(guò)臨床實(shí)驗(yàn)探索其應(yīng)用價(jià)值。方法:親和體Cys-MZHER2與螯合劑NOTA/DFO-MAL偶聯(lián)制得NOTA/DFO-MAL-Cys-MZHER2,經(jīng)一步法標(biāo)記策略制備靶向探針18FAl/68Ga-NOTA-MAL-Cys-MZHER2 及 89Zr-DFO-MAL-Cys-MZHER2。標(biāo)記產(chǎn)物行質(zhì)量控制和體外穩(wěn)定性分析。體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)合活體PET顯像對(duì)系列HER2探針顯像性能進(jìn)行全面考察。此外,對(duì)探針也實(shí)施了輻照劑量估算及毒性實(shí)驗(yàn),并協(xié)助國(guó)內(nèi)三甲醫(yī)院開展探針臨床顯像研究。結(jié)果:前體NOTA/DFO-MAL-Cys-MZHER2收率達(dá)50%。在最優(yōu)條件下,18FAl/68Ga NOTA-MAL-Cys-MZHER2 及 89Zr-DFO-MAL-Cys-MZHER2 標(biāo)記產(chǎn)率分別為18±2.1%、81±5%和90.2±1.9%,放化純度均大于95%�？傊苽鋾r(shí)間僅需30分鐘。探針在血漿及PBS中穩(wěn)定性良好。孵育1小時(shí)后,三種探針在HER2高表達(dá)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞中高度攝取(～10%AD/106細(xì)胞)。預(yù)先加入阻斷劑后,探針在SKOV-3細(xì)胞中的攝取值顯著降低(～2%AD/106細(xì)胞)。荷瘤鼠體內(nèi)研究表明,正電子核素標(biāo)記的系列HER2親和體探針在SKOV-3移植瘤中高度滯留,最長(zhǎng)可達(dá)48小時(shí),腫瘤與周圍正常組織區(qū)別明顯。定量分析示腫瘤平均攝取值維持在5%ID/g以上。與之相比,MCF-7移植瘤平均攝取值維持在1%ID/g低水平。體內(nèi)顯像結(jié)果與離體免疫組化分析高度一致。研究證實(shí)親和體探針18FA1/68Ga-NOTA-MAL-Cys-MZHER2 及 89Zr-DFO-MAL-Cys-MZHER2 與 HER2特異性結(jié)合,且靈敏度高。腫瘤對(duì)探針的攝取值與腫瘤HER2表達(dá)程度顯著正相關(guān)。臨床前研究表明,探針從血液和正常組織中快速消除,腹部放射性本底低。腎中放射性高度濃聚,提示其為主要代謝器官。輻照劑量估算和毒性實(shí)驗(yàn)證實(shí)探針使用安全。臨床志愿者PET/CT顯像初步證實(shí),68Ga-NOTA-MAL-Cys-MZHER2可顯著鑒別HER2表達(dá)迥異的腫瘤原發(fā)灶,并成功檢測(cè)到轉(zhuǎn)移灶。受試者耐受且無(wú)毒副作用發(fā)生。結(jié)論:新型HER2親和體PET探針合成簡(jiǎn)便,標(biāo)記產(chǎn)率和放化純度滿意,適于臨床推廣應(yīng)用。探針體內(nèi)顯像性能佳,靶組織顯影清晰。此探針可能在腫瘤診斷、治療方案選擇及療效監(jiān)測(cè)等方面發(fā)揮獨(dú)特作用。
【圖文】：

混合物半制備液相色譜圖如圖２所示。其中過(guò)量ＭＡＬ－ＮＯＴＡ與ＮＯＴＡ－ＭＡＬ－逡逑Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２均以單峰形式出現(xiàn)，兩者的保留時(shí)間分別為８分鐘和１６分鐘。逡逑２２０逡逑２００逡逑１８０逡逑１６０逡逑１４０逡逑１２０逡逑３，００逡逑０８０逡逑０（０逡逑０４０逡逑０２０逡逑０００逡逑■０２０逡逑０００邐１邋００邐２邋００邐１邋００邐４邋００邐Ｓ００邐ａ邋００邐ｔｏｏ邋ｔｏｏ邋Ｂ００邐＜０．００邐Ｕ００邐Ｕ００邐１３００邐１４邋００邐１５００邐１６００邐１７００邋１ＳＯＯ邋１９．００逡逑？？？逡逑圖２邋ＮＯＴＡ－ＭＡＬ與Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２混合后半制備色譜圖逡逑收集１６分鐘的流出物，凍干得到ＮＯＴＡ－ＭＡＬ－Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２。質(zhì)譜圖如圖逡逑３所示。合成產(chǎn)物分子量測(cè)量值為７７９１．０，與理論計(jì)算值（ＣｗＨ５３４ＮＩＧ２0ｍ７Ｓ２，逡逑７７９０．１）相吻合。此外，質(zhì)荷比為１９４８．３、１５５９．４、１２９９．７的離子峰分別為多肽逡逑＋４＋、Ｍ＋５＋、Ｍ＋Ｈ６＋，１４．、逡逑

邐ＮＯＴＡ－ＭＡＬ－Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２逡逑圖邋１邋ＮＯＴＡ－ＭＡＬ－Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２邋的合成路線逡逑混合物半制備液相色譜圖如圖２所示。其中過(guò)量ＭＡＬ－ＮＯＴＡ與ＮＯＴＡ－ＭＡＬ－逡逑Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２均以單峰形式出現(xiàn)，兩者的保留時(shí)間分別為８分鐘和１６分鐘。逡逑２２０逡逑２００逡逑１８０逡逑１６０逡逑１４０逡逑１２０逡逑３，００逡逑０８０逡逑０（０逡逑０４０逡逑０２０逡逑０００逡逑■０２０逡逑０００邐１邋００邐２邋００邐１邋００邐４邋００邐Ｓ００邐ａ邋００邐ｔｏｏ邋ｔｏｏ邋Ｂ００邐＜０．００邐Ｕ００邐Ｕ００邐１３００邐１４邋００邐１５００邐１６００邐１７００邋１ＳＯＯ邋１９．００逡逑？？？逡逑圖２邋ＮＯＴＡ－ＭＡＬ與Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２混合后半制備色譜圖逡逑收集１６分鐘的流出物，凍干得到ＮＯＴＡ－ＭＡＬ－Ｃｙｓ－ＭＺＨＥＲ２。質(zhì)譜圖如圖逡逑３所示。合成產(chǎn)物分子量測(cè)量值為７７９１．０，與理論計(jì)算值（ＣｗＨ５３４ＮＩＧ２0ｍ７Ｓ２，逡逑７７９０．１）相吻合。此外，，質(zhì)荷比為１９４８．３、１５５９．４、１２９９．７的離子峰分別為多肽逡逑的多電荷峰（［Ｍ＋４Ｈ］４＋、［Ｍ＋５Ｈ］５＋、［Ｍ＋６Ｈ］６＋）
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.44;R817


本文編號(hào)：2650575