【摘要】：目的本研究探討重樓單體PP-22誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞凋亡與自噬發(fā)生的分子機(jī)制及不同溫度聯(lián)合藥物作用CNE-2細(xì)胞的凋亡、克隆形成能力情況,旨在為臨床工作中對(duì)鼻咽癌放療后患者的用藥護(hù)理工作明確其更深層次的機(jī)理,同時(shí)為指導(dǎo)臨床上運(yùn)用護(hù)理措施來(lái)緩解放療后出現(xiàn)口腔黏膜腫痛等并發(fā)癥的護(hù)理工作進(jìn)行深層次的分子機(jī)制研究提供思路和理論支撐。方法用不同濃度的PP-22按時(shí)間梯度作用于鼻咽癌CNE-2細(xì)胞株,MTT方法和EDU摻入法檢測(cè)PP-22對(duì)CNE-2細(xì)胞增殖的影響;Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)PP-22對(duì)CNE-2細(xì)胞的凋亡水平;Hoechst 33258染色法檢測(cè)PP-22對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;激光共聚焦顯微鏡術(shù)免疫熒光方法觀察LC3點(diǎn)狀聚集;Western blot檢測(cè)PP-22作用于CNE-2細(xì)胞狀態(tài)下的凋亡與自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化;p38 MAPK激酶及其下游蛋白的表達(dá)水平變化;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ER-stress的相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化和Stat3轉(zhuǎn)錄因子及其下游相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化。運(yùn)用冷熱療法的原理,設(shè)置不同溫度狀態(tài)下,檢測(cè)PP-22對(duì)CNE-2細(xì)胞的凋亡影響與克隆形成能力的影響。結(jié)果MTT結(jié)果顯示,隨著藥物濃度時(shí)間梯度的增加,PP-22對(duì)CNE-2細(xì)胞增殖抑制作用呈明顯的劑量依賴性及時(shí)間依賴性。EDU檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明PP-22抑制CNE-2細(xì)胞的增殖。Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著PP-22濃度的增加,CNE-2細(xì)胞的凋亡比例也逐漸增加,在0μM到4μM的時(shí)候,凋亡率從6.67%增加到23.18%。Hoechst 33258染色顯示在PP-22的作用下,細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、裂解、部分形成凋亡小體。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PP-22作用下,CNE-2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平發(fā)生變化,凋亡抑制蛋白Bcl-2,Bcl-xL表達(dá)減少,促凋亡蛋白Bax,Bak表達(dá)基本不變;caspase 3,caspase 9,PARP表達(dá)減少,cleaved-caspase 3,cleaved-caspase 9,cleaved-PARP表達(dá)增加;Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨著PP-22濃度的增加,PERK,BIP,PDI,EROL-LA,IRE-LA,CHOP,Beclin-1和LC3-Ⅱ表達(dá)水平逐漸增加,p62水平逐漸下降,CNE-2細(xì)胞自噬增加。激光共聚焦顯微鏡術(shù)觀察LC3出現(xiàn)點(diǎn)狀聚集。p-ERK1/2表達(dá)減少,p-p38表達(dá)水平增加,ERK,JNK,p-JNK和p38表達(dá)水平不變。p-Stat3(Tyr705)、c-Myc、Mcl-1、Bcl-2和CyclinD1表達(dá)減少。不同溫度孵育實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在相同藥物濃度作用下39℃和34℃孵育CNE-2細(xì)胞的凋亡率比37℃孵育的凋亡率都要高;34℃細(xì)胞克隆形成能力明顯比37℃的克隆形成能力要低,而39℃與37℃相比,克隆形成能力則沒有區(qū)別。結(jié)論P(yáng)P-22對(duì)CNE-2細(xì)胞有抑制增殖的作用,通過抑制Jak/Stat3通路和ERK MAPK激酶;激活p38,ER-stress,這三個(gè)信號(hào)通路共同調(diào)節(jié)誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞發(fā)生凋亡與自噬。不同溫度孵育能影響CNE-2細(xì)胞的凋亡率與克隆形成能力,研究結(jié)果可為進(jìn)一步的臨床護(hù)理研究提供參考和依據(jù)。
【圖文】：

PP-22抑制CNE-2細(xì)胞增殖（與空白對(duì)照組相比，**P＜0.01，***P＜0.001）

PP-22抑制CNE-2細(xì)胞的DNA復(fù)制比例尺=100μmFigure3.2PP-22inhibitstheDNAreplicationofCNE-2cells.Scalebar=100μm.
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R473.73

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔡鵠;劉潔;;重樓皂苷藥理作用及其作用機(jī)制研究進(jìn)展[J];云南中醫(yī)中藥雜志;2015年12期

2 徐杰;劉洋;李玉璞;;軟組織損傷患者采用冷熱療法治療的護(hù)理分析[J];吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);2015年05期

3 肖曉慧;宮瑞松;張相強(qiáng);李振華;代立婷;蔣建偉;;重樓活性單體PP-22對(duì)人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2015年10期

4 王娟娟;張鵬;黃志宏;陳家勁;李強(qiáng);王國(guó)才;李藥蘭;蔣建偉;;重樓活性單體pp-10通過抑制PI3K/Akt通路誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞BGC-823凋亡和自噬[J];中國(guó)生物工程雜志;2015年02期

5 羅羽;王仙園;;冷熱護(hù)理刺激對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞克隆形成能力的影響及機(jī)制的初步研究[J];護(hù)理研究;2015年01期

6 朱蓉;唐世芳;陳義偉;宋瑰琦;;氦氖激光口腔內(nèi)照射對(duì)鼻咽癌患者放射性張口困難的影響[J];中華護(hù)理雜志;2014年12期

7 吳美華;彭風(fēng)云;陳安華;;綜合護(hù)理干預(yù)胸腺蛋白口服液聯(lián)合冰敷治療60例鼻咽癌急性放射性口腔黏膜反應(yīng)的效果觀察[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年17期

8 桂詩(shī)敏;;冷熱療法預(yù)防化學(xué)性靜脈炎的效果探討[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2010年33期

9 謝小雪;高福平;張瑩瑩;周菊梅;杜樂輝;歐陽(yáng)偉煒;王曉文;趙凌云;張曉冬;廖遇平;申良方;唐勁天;;磁流體熱療治療小鼠惡性黑色素移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華腫瘤防治雜志;2010年04期

10 儲(chǔ)水鑫;;鼻咽癌放療并發(fā)癥及后遺癥的中藥治療[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2009年06期

，

本文編號(hào)：2648478