【摘要】：目的:放射治療(radiotherapy,RT)是中晚期腫瘤治療的重要方法之一,也是早期腫瘤切除后的重要補充手段,能夠有效提高患者的生存率和生存時間。然而,放療在殺傷腫瘤細胞的同時,也會對正常組織和細胞產(chǎn)生影響。人體內(nèi)的淋巴細胞對射線具有較高的敏感性,放療可引起部分淋巴細胞的死亡和再分布,進而導(dǎo)致人體免疫系統(tǒng)的改變。隨著放療技術(shù)的發(fā)展,調(diào)強適形放療(intensity-modulated radiotherapy,IMRT)已被廣泛應(yīng)用于頭頸部,前列腺和胸部等惡性腫瘤的治療,具有靶區(qū)放射劑量較高,而正常組織損傷較小的特點。為了解IMRT對腫瘤患者免疫功能的影響,本研究對183例患有臨床常見腫瘤(肺癌,鼻咽癌,食管癌和直腸癌)的病人,在治療前后外周血中淋巴細胞及其亞群的水平變化進行觀察,并且分析了該變化與性別,年齡,分期,病種等因素的相關(guān)性,為今后在IMRT中更為有效地保護免疫系統(tǒng),以及后續(xù)的免疫調(diào)節(jié)治療,提供一定的研究數(shù)據(jù)。方法:選取2015年10月至2017年12月安徽省立醫(yī)院西區(qū)腫瘤放療科收治的食管癌,肺癌,直腸癌,鼻咽癌四種常見腫瘤患者183例,其中117例行調(diào)節(jié)性T(Regulatory T cells,T_(reg))細胞檢測,66例行免疫功能檢測。于IMRT前和治療后1個月抽取晨起空腹靜脈血2ml,乙二胺四乙酸鹽(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝,室溫保存,離體時間不超過4小時。采用鼠抗人CD45,CD3,CD16,CD56,CD19,CD8,CD4,CD25單克隆抗體20μl以及CD127單克隆抗體5μl加入100μl經(jīng)EDTA抗凝的外周血,避光孵育30min,加入紅細胞裂解液,裂解5min,PBS清洗2次,然后行流式細胞術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測,其中118例T細胞及其亞群比例檢測,65例行調(diào)節(jié)性T細胞檢測。分析比較T細胞及其亞群,B細胞,NK細胞及T_(reg)細胞在IMRT前后的差異,及其與性別,年齡,分期,病種等因素之間的相關(guān)性。靜脈血2ml用PBS或生理鹽水等體積稀釋后,加入3ml外周血淋巴細胞分離液,607g(1780rpm)離心,吸出中間層淋巴細胞,經(jīng)磷酸鹽緩沖液(phosphate-bufered saline,PBS)清洗及細胞計數(shù)后,稀釋細胞密度至1×10~6/L,加入不同體積的鼠抗人CD45,Lin(CD3/14/19/20/56),CD117,CD127,CD161及CD294單克隆抗體,4℃避光染色30分鐘,染色緩沖液清洗后加入多聚甲醛固定30分鐘,離心后上機行流式細胞檢測共9例,比較IMRT前后固有淋巴細胞(innate lymphoid cells,ILCs)中ILC1,ILC2,ILC3亞群的變化。結(jié)果:1.IMRT后患者外周血中CD3~+T,CD3~+CD4~+Th,CD4~+CD25~+,CD4~+CD25~+CD127~(low/-)T_(reg),CD4~+/CD8~+,CD3~-CD19~+B細胞的均值較治療前明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P值分別0.05,0.01,0.01,0.05,0.01,0.01。CD3~+CD8~+Ts/Tc,CD3~-CD16~+CD56~+NK細胞的均值較治療前升高,P值分別為0.01,0.01,具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.淋巴細胞及其亞群與患者一般資料中的各種參數(shù)之間統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn),患者的性別,年齡,分期和病種并不影響IMRT前后CD4~+CD25~+CD127~(low/-)T_(reg)細胞的變化,以及CD4~+/CD8~+比值改變,而CD3~-CD16~+CD56~+NK細胞的百分比在IMRT前后,男性患者均高于女性(P0.05)。IMRT后女性患者外周血中CD3~+CD4~+Th細胞的百分比高于男性(P0.05),但IMRT前CD3~+CD4~+Th細胞的百分比卻無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。盡管IMRT前女性患者血液中CD3~-CD19~+B細胞的百分比高于男性(P0.05),但IMRT后兩者外周血中的CD3~-CD19~+B細胞的百分比無顯著差異(P0.05)。IMRT后CD3~+T淋巴細胞,CD3~+CD8~+Ts/Tc細胞和NK細胞在不同病種之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),IMRT前CD3~+T淋巴細胞,CD3~+CD8~+Ts/Tc細胞和NK細胞不同病種之間無顯著差異(P0.05)。盡管IMRT前CD3~-CD19~+B細胞不同年齡組間無明顯差異(P0.05),但IMRT后CD3~-CD19~+B細胞不同年齡組間存在差異(P0.05)。3.IMRT后CD3~+T淋巴細胞比例均值與性別,病種有顯著相關(guān)性,CD3~+CD8~+Ts/Tc細胞比例均值與病種相關(guān),CD3~-CD16~+CD56~+NK細胞的比例均值與性別,病種有顯著相關(guān)性,CD3~-CD19~+B細胞的比例均值與年齡相關(guān)。4.IMRT后患者外周血中ILC2在ILC中所占比例較治療前明顯升高,ILC3較治療前下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而ILC1所占比例盡管出現(xiàn)變化,表現(xiàn)為IMRT后ILC1升高,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:IMRT可導(dǎo)致腫瘤患者外周血中淋巴細胞數(shù)量和亞群的改變,進而對免疫功能產(chǎn)生影響,并且在治療后短期內(nèi)未能完全恢復(fù)。因此,需要在IMRT過程中和結(jié)束的早期給予免疫調(diào)節(jié)治療,以促進機體免疫平衡的恢復(fù),預(yù)防照射導(dǎo)致正常組織的過度炎性反應(yīng)和輻射誘發(fā)的二次致癌效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R730.55

【參考文獻】

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本文編號：2644853