【摘要】：目的:研究連續(xù)快速眼動(dòng)(rapid eye movement,REM)睡眠剝奪3天(day,d)及間斷REM睡眠剝奪7d后小鼠海馬區(qū)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neu rotrophic factor,BDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)及其受體酪氨酸激酶-B(tyrosine kinase-B,Trk B)、酪氨酸激酶-A(tyrosine kinase-A,Trk A)、p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素受體(p75 neurotrophin receptor)、β分泌酶(β-site AP P cleaving enzyme,BACE)等的m RNA的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平的變化;以及研究p75受體變化對(duì)BACE功能的可能聯(lián)系。從小鼠海馬區(qū)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體在睡眠剝奪后的動(dòng)態(tài)變方面進(jìn)行睡眠剝奪對(duì)認(rèn)知功能的影響的可能機(jī)制的初步探討。方法:1.應(yīng)用改良多平臺(tái)水環(huán)境法(modified multiple platform method,MMP M)建立REM睡眠剝奪模型。選擇C57BL/6J 6周大雄性小鼠同籠飼養(yǎng)3-4d后隨機(jī)分為正常對(duì)照組(cage control,CC)、REM睡眠剝奪3d組(REM sleep d eprivation for 3 days,SD3d)和REM睡眠剝奪7d組(REM sleep deprivation fo r 7 days,SD7d),每個(gè)組12只小鼠。各個(gè)小組的小鼠同籠飼養(yǎng)3-4d后CC組于9:00AM灌注處死;SD3d組開始睡眠剝奪3 d后于9:00AM灌注處死;SD7d組睡眠剝奪7d,每天18:00-21:00放入普通鼠籠中休息,不進(jìn)行睡眠剝奪,于睡眠剝奪7d后9:00 AM灌注處死。2、應(yīng)用用RT-q PCR的方法觀察小鼠海馬BDNF、NGF及其受體Trk B、Tr k A、p75以及β淀粉樣蛋白生成限速酶BACE的基因水平變化;3、應(yīng)用免疫蛋白印跡(Western Blot)的方法檢測(cè)小鼠海馬BDNF、NG F及其受體Trk B、Trk A、p75、β淀粉樣蛋白生成限速酶BACE的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬區(qū)的BDNF和Trk B表達(dá)較CC組降低,并且差異有顯著性(P0.05)。REM睡眠剝奪7d后的BDNF和Trk B的表達(dá)較CC組及SD3d組均增加,并且差異有顯著性(P0.005)。2.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬NGF和Trk A表達(dá)較CC組變化不顯著(P0.05),REM睡眠剝奪7d后NGF、Trk A的表達(dá)水平較CC組及SD3d組均增加,且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬p75表達(dá)較正常對(duì)照組變化不顯著(P0.05),REM睡眠剝奪7d后p75的表達(dá)水平較CC組及SD3d組均增加,且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬BACE表達(dá)較CC組變化不顯著(P0.05),REM睡眠剝奪7d后BACE的表達(dá)水平較CC組及SD3d組均增加,且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.REM睡眠剝奪3d和7d后小鼠海馬區(qū)BDNF及其高親和力受體Trk B的m RNA及蛋白表達(dá)均呈現(xiàn)出先降低后升高的變化趨勢(shì)。DS3d組小鼠BDNF和T r KB表達(dá)的降低可能是睡眠剝奪后中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能改變的損傷機(jī)制之一。RE M睡眠剝奪7d后其表達(dá)的增加可能與與神經(jīng)保護(hù)機(jī)制被激活有關(guān)。2.REM睡眠剝奪3d及7d后小鼠海馬區(qū)NGF和Trk A的m RNA和蛋白表現(xiàn)為先不變后增加的趨勢(shì)。連續(xù)REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬區(qū)NGF、Trk A表達(dá)尚未出現(xiàn)明顯變化,這有可能與NGF在REM睡眠剝奪后的變化稍延遲有關(guān)。REM睡眠剝奪7d后小鼠海馬區(qū)NGF及Trk A表達(dá)增加,表明NGF可能是參與REM睡眠剝奪后的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的因素之一。3.REM睡眠剝奪3d和7d后小鼠海馬區(qū)p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體m RNA及蛋白表達(dá)表現(xiàn)為先不變后增加的趨勢(shì)。p75在REM睡眠剝奪3d時(shí)表達(dá)無明顯變化而REM睡眠剝奪7d后表達(dá)增加,REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬p75表達(dá)無明顯變化可能與REM睡眠剝奪時(shí)間短,相應(yīng)的神經(jīng)調(diào)節(jié)基因未激活有關(guān),RE M睡眠剝奪7d組小鼠海馬區(qū)p75表達(dá)增加表明睡眠剝奪損傷有可能通過這一受體的激活繼而促進(jìn)了小鼠海馬Aβ沉積。4.REM睡眠剝奪3d和7d后小鼠海馬區(qū)Aβ生成的限速酶BACE表現(xiàn)為先不變后增加的趨勢(shì),其變化可能與p75表達(dá)增加有關(guān),BACE的升高有可能是R EM睡眠剝奪造成認(rèn)知功能受損的機(jī)制之一。
【圖文】：

mRNA相對(duì)表達(dá)量p 7 5 B AC E024C CS D 3 dS D 7 d** **** **圖2.各組小鼠海馬區(qū)p75、BACE的mRNA相對(duì)β-actin 的相對(duì)表達(dá)量 2-△△Ct注：*:P＜0.05 ; **：P＜0.005
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R740

【參考文獻(xiàn)】

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2 李煒;李婷婷;齊賽卿;張癸榮;;快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠剝奪對(duì)記憶和突觸可塑性的影響及其分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)藥理學(xué)報(bào);2013年04期

3 李桂花;徐江濤;;癲癇與睡眠及睡眠障礙相互影響關(guān)系的進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年11期

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本文編號(hào)：2632845