【摘要】：目的:研究連續(xù)快速眼動(rapid eye movement,REM)睡眠剝奪3天(day,d)及間斷REM睡眠剝奪7d后小鼠海馬區(qū)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neu rotrophic factor,BDNF)、神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)及其受體酪氨酸激酶-B(tyrosine kinase-B,Trk B)、酪氨酸激酶-A(tyrosine kinase-A,Trk A)、p75神經(jīng)營養(yǎng)素受體(p75 neurotrophin receptor)、β分泌酶(β-site AP P cleaving enzyme,BACE)等的m RNA的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平的變化;以及研究p75受體變化對BACE功能的可能聯(lián)系。從小鼠海馬區(qū)神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體在睡眠剝奪后的動態(tài)變方面進行睡眠剝奪對認知功能的影響的可能機制的初步探討。方法:1.應(yīng)用改良多平臺水環(huán)境法(modified multiple platform method,MMP M)建立REM睡眠剝奪模型。選擇C57BL/6J 6周大雄性小鼠同籠飼養(yǎng)3-4d后隨機分為正常對照組(cage control,CC)、REM睡眠剝奪3d組(REM sleep d eprivation for 3 days,SD3d)和REM睡眠剝奪7d組(REM sleep deprivation fo r 7 days,SD7d),每個組12只小鼠。各個小組的小鼠同籠飼養(yǎng)3-4d后CC組于9:00AM灌注處死;SD3d組開始睡眠剝奪3 d后于9:00AM灌注處死;SD7d組睡眠剝奪7d,每天18:00-21:00放入普通鼠籠中休息,不進行睡眠剝奪,于睡眠剝奪7d后9:00 AM灌注處死。2、應(yīng)用用RT-q PCR的方法觀察小鼠海馬BDNF、NGF及其受體Trk B、Tr k A、p75以及β淀粉樣蛋白生成限速酶BACE的基因水平變化;3、應(yīng)用免疫蛋白印跡(Western Blot)的方法檢測小鼠海馬BDNF、NG F及其受體Trk B、Trk A、p75、β淀粉樣蛋白生成限速酶BACE的蛋白表達水平。結(jié)果:1.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬區(qū)的BDNF和Trk B表達較CC組降低,并且差異有顯著性(P0.05)。REM睡眠剝奪7d后的BDNF和Trk B的表達較CC組及SD3d組均增加,并且差異有顯著性(P0.005)。2.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬NGF和Trk A表達較CC組變化不顯著(P0.05),REM睡眠剝奪7d后NGF、Trk A的表達水平較CC組及SD3d組均增加,且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬p75表達較正常對照組變化不顯著(P0.05),REM睡眠剝奪7d后p75的表達水平較CC組及SD3d組均增加,且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬BACE表達較CC組變化不顯著(P0.05),REM睡眠剝奪7d后BACE的表達水平較CC組及SD3d組均增加,且數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.REM睡眠剝奪3d和7d后小鼠海馬區(qū)BDNF及其高親和力受體Trk B的m RNA及蛋白表達均呈現(xiàn)出先降低后升高的變化趨勢。DS3d組小鼠BDNF和T r KB表達的降低可能是睡眠剝奪后中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能改變的損傷機制之一。RE M睡眠剝奪7d后其表達的增加可能與與神經(jīng)保護機制被激活有關(guān)。2.REM睡眠剝奪3d及7d后小鼠海馬區(qū)NGF和Trk A的m RNA和蛋白表現(xiàn)為先不變后增加的趨勢。連續(xù)REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬區(qū)NGF、Trk A表達尚未出現(xiàn)明顯變化,這有可能與NGF在REM睡眠剝奪后的變化稍延遲有關(guān)。REM睡眠剝奪7d后小鼠海馬區(qū)NGF及Trk A表達增加,表明NGF可能是參與REM睡眠剝奪后的神經(jīng)保護機制的因素之一。3.REM睡眠剝奪3d和7d后小鼠海馬區(qū)p75神經(jīng)營養(yǎng)因子受體m RNA及蛋白表達表現(xiàn)為先不變后增加的趨勢。p75在REM睡眠剝奪3d時表達無明顯變化而REM睡眠剝奪7d后表達增加,REM睡眠剝奪3d后小鼠海馬p75表達無明顯變化可能與REM睡眠剝奪時間短,相應(yīng)的神經(jīng)調(diào)節(jié)基因未激活有關(guān),RE M睡眠剝奪7d組小鼠海馬區(qū)p75表達增加表明睡眠剝奪損傷有可能通過這一受體的激活繼而促進了小鼠海馬Aβ沉積。4.REM睡眠剝奪3d和7d后小鼠海馬區(qū)Aβ生成的限速酶BACE表現(xiàn)為先不變后增加的趨勢,其變化可能與p75表達增加有關(guān),BACE的升高有可能是R EM睡眠剝奪造成認知功能受損的機制之一。
【圖文】：

mRNA相對表達量p 7 5 B AC E024C CS D 3 dS D 7 d** **** **圖2.各組小鼠海馬區(qū)p75、BACE的mRNA相對β-actin 的相對表達量 2-△△Ct注：*:P＜0.05 ; **：P＜0.005
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R740

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 邱紅艷;李崧;樂衛(wèi)東;;慢性睡眠剝奪對小鼠學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)元自噬和凋亡的影響[J];中華神經(jīng)科雜志;2015年07期

2 李煒;李婷婷;齊賽卿;張癸榮;;快速眼球運動睡眠剝奪對記憶和突觸可塑性的影響及其分子機制的研究進展[J];神經(jīng)藥理學(xué)報;2013年04期

3 李桂花;徐江濤;;癲癇與睡眠及睡眠障礙相互影響關(guān)系的進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年11期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 孫慧;慢性不完全性睡眠剝奪后青春期大鼠睡眠特征及對空間性學(xué)習(xí)記憶的影響及分子機制[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

，

本文編號：2632845