【摘要】：目的:研究中晚期宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本中MiR-19a在放療敏感組和放療抵抗組中的表達(dá)水平與宮頸癌放療敏感性的關(guān)系,探討MiR-19a的表達(dá)改變對(duì)宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性的影響,并對(duì)其調(diào)節(jié)放療敏感性的機(jī)制進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其與宮頸癌放射敏感性的關(guān)系及其臨床指導(dǎo)意義,為臨床預(yù)測宮頸癌放療敏感性、改善預(yù)后,提高生存率提供新的思路和依據(jù)。材料和方法:收集2014年6月-2015年9月在新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院治療診斷明確的中晚期宮頸鱗癌病例91例,用于芯片篩選的入組患者12例,放療抵抗組和敏感組各6例,通過芯片篩選出不同放療敏感性的宮頸癌組織標(biāo)本的差異miRNA。放療抵抗組分為復(fù)發(fā)未控組及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組各3例,結(jié)果顯示miR-19a在兩組的表達(dá)水平上調(diào)明顯。進(jìn)一步選取放療抵抗組38例及放療敏感組41例標(biāo)本用于后續(xù)驗(yàn)證篩選結(jié)果的入組患者,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測miR-19a在兩組間的表達(dá)情況,分析其與宮頸癌放療敏感性的相關(guān)性。采用ROC曲線分析用miR-19a預(yù)測宮頸癌放療敏感性的價(jià)值。應(yīng)用Kaplan-Meier曲線分析miR-19a低表達(dá)組和高表達(dá)組宮頸癌患者的生存情況,進(jìn)一步選擇實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株宮頸鱗癌細(xì)胞株SiHa(放療抵抗)和Me180細(xì)胞株(放療敏感),一方面用miR-19a-mimic與miR-19a-inhibitor轉(zhuǎn)染至Siha和Me180細(xì)胞,通過克隆形成實(shí)驗(yàn)來檢驗(yàn)宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性。另一方面,采用慢病毒載體構(gòu)建miR-19a穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株,通過體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞放療敏感性進(jìn)行檢驗(yàn),通過增殖實(shí)驗(yàn)及凋亡實(shí)驗(yàn)等對(duì)miR-19a可能調(diào)節(jié)放療敏感性機(jī)制做初步探討,最后利用生物信息軟件及網(wǎng)絡(luò)對(duì)miR-19a可能的靶基因進(jìn)行初步篩選及驗(yàn)證。結(jié)果:芯片篩選結(jié)果顯示miRNA-19a在復(fù)發(fā)未控組及遠(yuǎn)轉(zhuǎn)組當(dāng)中表達(dá)均上調(diào)。因此我們推斷miRNA-19a可能在導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞發(fā)生放療抵抗、侵襲遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面起到一定的作用,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測檢測MiR-19a在放療敏感組及抵抗組間的表達(dá)情況,結(jié)果顯示兩組患者比較年齡、臨床分期、組織分化程度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤大小、治療時(shí)間和SCC水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值0.05),抵抗組miRNA-19a的表達(dá)水平為4.01±1.16,敏感組為1.39±0.85,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03),miR-19a的ROC曲線下面積0.963。至隨訪截止日,79例患者存活63例,死亡16例。生存時(shí)間達(dá)1年者74例、生存時(shí)間達(dá)3年者63例。隨訪結(jié)果,1年生存率為93.6%,3年生存率為79.7%,根據(jù)miR-19a平均表達(dá)水平把患者分為兩組,低表達(dá)組和高表達(dá)組。采用K-M曲線分析兩組宮頸癌患者的生存情況,結(jié)果顯示和miR-19a高表達(dá)組相比miR-19a低表達(dá)組放療后生存時(shí)間明顯延長,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。體外試驗(yàn)顯示,兩株細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-19a-mimic后放療敏感性降低,轉(zhuǎn)染miR-19a-inhibitor后放療敏感性升高,裸鼠移植瘤模型結(jié)果顯示和對(duì)照載體組相比轉(zhuǎn)染pWPXL-19a組腫瘤組對(duì)放療不敏感,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,增殖實(shí)驗(yàn)顯示宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-19a后的增殖無明顯變化,凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明miR-19a可以通過抑制射線引起的凋亡導(dǎo)致放療抵抗。綜上推斷microRNA-19a可能通過抑制放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡抑制宮頸癌細(xì)胞的放療敏感性。通過生物學(xué)靶基因預(yù)測分析,初步結(jié)果顯示PTEN、IGF2R、CUL5、Bcl-2、BAX等靶基因可能受到miR-19a的調(diào)控。進(jìn)一步行Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)抑制MiR-19a導(dǎo)致了抗凋亡蛋白BAX的上調(diào)和促凋亡蛋白Bcl-2的下調(diào)。結(jié)論:宮頸鱗癌放療抵抗患者癌組織中miR-19a高表達(dá),細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上調(diào)或下調(diào)miR-19a能夠降低或升高宮頸癌細(xì)胞放療敏感性,裸鼠模型試驗(yàn)結(jié)果顯示已轉(zhuǎn)染miR-19a腫瘤組和對(duì)照組相比對(duì)放療不敏感,即miR-19a抑制宮頸鱗癌放療敏感性,抑制miR-19a顯著提高了SiHa細(xì)胞對(duì)放療的敏感性,增加了凋亡,上調(diào)了BAX,下調(diào)了Bcl-2。miR-19a可能是調(diào)節(jié)宮頸癌放療敏感性的重要因子,有望作為預(yù)測宮頸腫瘤內(nèi)在放療敏感性的標(biāo)志,可為宮頸癌的治療提供新途徑。
【圖文】：

19圖1-1 放療抵抗組和敏感組miRNA-19a的表達(dá)水平比較Figure 1-1 comparison of Expression Levels of miRNA-19a between Radioresistant andSensitive Groups2.5 ROC曲線分析miRNA-19a預(yù)測宮頸癌放療敏感性的價(jià)值以靈敏度為縱坐標(biāo)，誤診率（100-特異度）為橫坐標(biāo)在SPSS24.0軟件上做ROC 曲線圖，，然后計(jì)算曲線下面積（AUC0.963），可以看出用miRNA-19a預(yù)測宮頸癌放療敏感性有較好的準(zhǔn)確性（圖1-2）。圖1-2 ROC 曲線分析用miR-19a 預(yù)測宮頸癌放療敏感性的價(jià)值Figure 1-2 The value of ROC curve analysis for the prediction of radiosensitivity of cervicalcancer by miR-19a新?

圖1-1 放療抵抗組和敏感組miRNA-19a的表達(dá)水平比較 1-1 comparison of Expression Levels of miRNA-19a between RadioresisSensitive GroupsOC曲線分析miRNA-19a預(yù)測宮頸癌放療敏感性的價(jià)敏度為縱坐標(biāo)，誤診率（100-特異度）為橫坐標(biāo)在SPSS24.0軟件上后計(jì)算曲線下面積（AUC0.963），可以看出用miRNA-19a預(yù)測宮較好的準(zhǔn)確性（圖1-2）。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33;R730.55

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本文編號(hào)：2632731