【摘要】：研究背景膿毒癥是指宿主對(duì)感染產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)失調(diào)而導(dǎo)致的危及生命的器官功能障礙。因其高發(fā)病率、高病死率和高經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的特征,已成為一個(gè)醫(yī)學(xué)界的研究熱點(diǎn)。腎臟是膿毒癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中最易受累的器官之一,急性腎損傷(AKI)是膿毒癥最常見的并發(fā)癥之一,且其被認(rèn)為是膿毒癥死亡風(fēng)險(xiǎn)增加的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腎臟富含線粒體,近來(lái)研究表明,線粒體功能障礙是膿毒癥致AKI的重要發(fā)病機(jī)制之一。UCP2是UCPs家族成員之一,存在于多種生物,定位于線粒體內(nèi)膜,廣泛分布于多個(gè)器官和組織,參與多種代謝過(guò)程(ROS產(chǎn)生、ATP合成、調(diào)節(jié)線粒體膜電位等)和病理過(guò)程(膿毒癥、糖尿病、癌癥等)。我們前期研究發(fā)現(xiàn),UCP2在膿毒癥心肌、肝和腦損損傷中起保護(hù)作用。然而,UCP2的功能具有組織和疾病特異性,其在膿毒癥致AKI發(fā)生發(fā)展中的作用如何,目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。研究目的1.檢測(cè)膿毒癥致AKI小鼠模型中UCP2的表達(dá),探討其與膿毒癥致AKI發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。2.探討膿毒癥致AKI小鼠模型中,藥物抑制UCP2對(duì)膿毒癥致AKI發(fā)生發(fā)展的影響及其機(jī)制。3.探討膿毒癥致AKI細(xì)胞模型中,UCP2過(guò)表達(dá)或沉默對(duì)膿毒癥致AKI發(fā)生發(fā)展的影響及其機(jī)制。方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn):通過(guò)LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立膿毒癥致AKI小鼠模型,將小鼠隨機(jī)分為:Control 組、LPS 組(6h、12h、24h)、LPS(24h)+京尼平組(京尼平組)。第一部分:比較Control組與LPS組(6h、12h、24h)小鼠的腎損傷、UCP2表達(dá)水平。第二部分:采用UCP2藥物抑制劑京尼平預(yù)處理模型小鼠,比較Control組、LPS(24h)組和LPS(24h)+京尼平組小鼠的UCP2表達(dá)水平、腎損傷、炎癥反應(yīng)、線粒體結(jié)構(gòu)和功能、氧化應(yīng)激、組織中細(xì)胞的凋亡水平。體外實(shí)驗(yàn):通過(guò)LPS刺激HK-2細(xì)胞建立膿毒癥致AKI細(xì)胞模型,將HK-2細(xì)胞隨機(jī)分為:Control組、LPS 組、LV5-NC+LPS 組、LV5-UCP2+LPS 組、si-NC+LPS組、si-UCP2+LPS組。第三部分:比較各組細(xì)胞的存活率、UCP2表達(dá)水平、炎癥反應(yīng)、線粒體結(jié)構(gòu)和功能、氧化應(yīng)激、凋亡水平。結(jié)果第一部分:1.與Conitrol組相比,LPS組各時(shí)間點(diǎn)血清Cr、BUN、NGAL、KIM-1水平均顯著升高。2.與Control組相比,LPS組各時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)顯著的腎組織病理?yè)p傷。3.與Control組相比,LPS組各時(shí)間點(diǎn)UCP2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高。第二部分:1.與LPS組相比,京尼平組腎組織mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低。2.與LPS組相比,京尼平組血清Cr、BUN、NGAL、KIM-1水平均顯著升高,腎組織病理?yè)p傷進(jìn)一步加重,腎組織TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA水平顯著升高,巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增加,NF-κB活性顯著增強(qiáng),線粒體超微結(jié)構(gòu)破壞加重,線粒體膜電位(MMP)、AIP合成和mtDNA相對(duì)含量顯著降低,MDA含量顯著增加,SOD活性顯著降低,組織細(xì)胞凋亡水平顯著提高。第三部分:1.與Control組,LPS組UCP2 mRNA和蛋白表達(dá)量顯著升高,細(xì)胞存活率顯著降低,炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙和細(xì)胞凋亡顯著增強(qiáng)。2.與LPS組相比,LV5-UCP2+LPS組細(xì)胞存活率顯著上升,炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙和細(xì)胞凋亡顯著減弱。3.與LPS組相比,si-UCP2+LPS組細(xì)胞存活率顯著下降,炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙和細(xì)胞凋亡顯著增強(qiáng)。結(jié)論1.LPS干預(yù)成功構(gòu)建膿毒癥致AKI小鼠和細(xì)胞模型。2.UCP2可能通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)、緩解線粒體功能障礙和氧化應(yīng)激、減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡,對(duì)膿毒癥致AKI的發(fā)生發(fā)展起到重要的保護(hù)作用;靶向提高UCP2的表達(dá)水平將是膿毒癥致AKI的一種新的潛在治療方法。
【圖文】：

Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ＬＰＳ邋Ｇｅｎｉｐｉｎ＋ＬＰＳ邐Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ＬＰＳ邋Ｇｅｎｉｐｉｎ＋ＬＰＳ逡逑圖２－１各組小鼠腎功能的比較逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｓｅｒｕｍ邋ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ邋ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｒｅｎａｌ邋ｆｕｎｃｔｉｏｎ邋ａｍｏｎｇ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ逡逑ｇｒｏｕｐｓ逡逑注：與對(duì)照組相比，＞＜０．０５；與ＬＰＳ組相比，，＃Ｐ＜０．０５。逡逑Ｎｏｔｅ：邋Ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ，邋＊Ｐ＜０．０５；邋Ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＬＰＳ邋ｇｒｏｕｐ，邋＾Ｐ＜０．０５．逡逑２．３各組小鼠腎損傷標(biāo)志物變化逡逑與Ｃｏｎｔｒｏｌ相比，ＬＰＳ組小鼠血清ＮＧＡＬ、ＫＩＭ－１水平均明顯高于ＣｏｎｔｒｏｌＭ，逡逑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜0．0５）邋；邋ＬＰＳ＋Ｇｅｎｉｐｉｎ組小鼠ＮＧＡＬ、ＫＩＭ－１水平明顯高于逡逑ＬＰＳ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。逡逑組別邐例數(shù)邐ＫＩＭ－１邋（ｎｇ／ｍｌ）邐ＮＧＡＬ邋（ｎ＾ｍｌ）逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邐８邐０．４４±０．０１邐１１３．０９±１３．７０逡逑ＬＰＳ邐８邐７．９２±１．２４＊邐１７７．２６±１４．６５＊逡逑Ｇｅｎｉｐｉｎ＋ＬＰＳ邐８邐１５．３１±２．２２＊＃邐３４５．６１±３５．７４＊＃逡逑Ｆ邐７７．２６３邐７９．４６１逡逑Ｐ邐０．０００邐０．０００逡逑表２－２各組小鼠腎損傷生

邐Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ＬＰＳ邋Ｇｅｎｉｐｉｎ＋ＬＰＳ逡逑圖２－５各組小鼠腎組織ＵＣＰ２ｍＲＮＡ和蛋白表達(dá)比較逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－５邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｉｎｔｒａｒｅｎａｌ邋ＵＣＰ２邋ｍＲＮＡａｎｄ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ａｍｏｎｇ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ逡逑ｇｒｏｕｐｓ逡逑注：與對(duì)照組相比，＞＜０．０５；與ＬＰＳ組相比，＃Ｐ＜０．０５。圖ａ、ｂ代表ＵＣＰ２蛋白表達(dá)水平，圖逡逑ｃ代表ＵＣＰ２邋ｍＲＮＡ表達(dá)水平。逡逑Ｎｏｔｅ：邋Ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ，邋Ｐ＜０．０５；邋Ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＬＰＳ邋ｇｒｏｕｐ，邋＃Ｐ＜０．０５．邋ａ、邋ｂ逡逑ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ｉｎｔｒａｒｅｎａｌ邋ＵＣＰ２邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｌｅｖｅｌ，邋Ｐａｎｅｌ邋ｃ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ邋ｉｎｔｒａｒｅｎａｌ邋ＵＣＰ２邋ｍＲＮＡ邋ｌｅｖｅｌ．逡逑＇柳：備如Ｐ：、乻、零辱■逡逑Ｓ＃．＿．邋ｖｓ逡逑圖２－６各組小鼠腎組織ＵＣＰ２免疫組化結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－６邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｏｆ邋ｉｎｔｒａｒｅｎａｌ邋ＵＣＰ２邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｗｉｔｈ邋ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ逡逑ａｎａｌｙｓｉｓ邋ａｍｏｎｇ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐｓ逡逑４６逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R459.7;R692.5

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本文編號(hào)：2629556