【摘要】：【目的】輕度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是細(xì)胞對各種應(yīng)激因子刺激的一種保護(hù)性反應(yīng),但持續(xù)或嚴(yán)重的應(yīng)激可摧毀內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能,進(jìn)而影響線粒體的功能,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,加重缺血再灌注損傷。研究證實(shí):4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)是一種具有分子伴侶活性的短鏈脂肪酸,能通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來降低缺血再灌注損傷的程度,但在心臟驟停/心肺復(fù)蘇(cardiac arrest/cardiopul monary resuscitation,CA/CPR)條件下,4-苯基丁酸是否還有類似的保護(hù)作用尚不清楚。本研究應(yīng)用經(jīng)食道電刺激方法建立大鼠CA模型,在CPR前經(jīng)外周血管注入不同濃度的4-苯基丁酸,觀察其對復(fù)蘇后全腦缺血再灌注損傷是否有保護(hù)作用,通過檢測復(fù)蘇后大鼠腦組織的細(xì)胞凋亡情況,腦組織的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)和Ca~(2+)含量的變化,腦組織線粒體鈣離子攝入蛋白1(Mitochondrial calcium uptake1,MICU1)的蛋白表達(dá)量等,闡述其可能的作用機(jī)制�！痉椒ā坑媒�(jīng)食道電刺激法建立6min的大鼠心臟驟停模型,隨機(jī)抽簽法將心臟驟停大鼠分為3組:每組分別注射1ml/Kg的2.5%的4-苯基丁酸(LG組,n=40),1ml/Kg的5%的4-苯基丁酸(HG組,n=40)以及1ml/Kg的生理鹽水(NS組,n=40)后立即予CPR。如大鼠CPR至恢復(fù)自主循環(huán)(restoration of spontaneous circulation,ROSC)時間超過10分鐘界定為復(fù)蘇失敗,不納入實(shí)驗(yàn)組。再隨機(jī)抽取大鼠做為假手術(shù)組(SH組,n=40),假手術(shù)組的大鼠只進(jìn)行簡單的麻醉、分離動靜脈及插管,不進(jìn)行電刺激。以上各組大鼠在復(fù)蘇后24h(假手術(shù)組大鼠從手術(shù)開始24h)依然存活者被進(jìn)一步分為4個亞組,每亞組10只大鼠(如果某一組大鼠存活至24h不足40只,可用同樣的實(shí)驗(yàn)方法和步驟補(bǔ)足40只),分別檢測以下指標(biāo):1、HE、TUNNEL:4組大鼠每組隨機(jī)抽取1個亞組,斷頭取腦,做成蠟塊,切片,進(jìn)行HE染色,觀察并比較4組大鼠腦組織HE染色的結(jié)果;進(jìn)行TUNNEL染色,比較各組腦組織細(xì)胞凋亡的比例。2、GRP78蛋白,CHOP蛋白;4組大鼠每組隨機(jī)抽取1個亞組,各組10只,取腦,勻漿,用western blot辦法檢測勻漿液中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白。如葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78),轉(zhuǎn)錄因子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)。3、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)和Ca~(2+)含量;同上4組大鼠每組隨機(jī)抽取1個亞組。取腦,勻漿備用,然后將勻漿液用于測定腦組織內(nèi)ATP和Ca~(2+)含量。4、線粒體鈣離子攝入蛋白1(Mitochondrial calcium uptake1,MICU1)蛋白表達(dá)量測定;剩余所有亞組,取腦勻漿后用蛋白印跡法檢測MICU1的蛋白表達(dá)量�！窘Y(jié)果】統(tǒng)計(jì)每組總共接受手術(shù)的大鼠分別為:假手術(shù)組40只,NS組56只,LG組52只,HG組48只,且最后每組成功入組40只。1、HE染色結(jié)果與SH組對比NS組的HE染色顯示腦損傷較重,與NS組對比,HG與LG的腦損傷減輕。且HG組的腦損傷較LG組的腦損傷輕。2、TUNNEL凋亡結(jié)果與SH組對比,凋亡細(xì)胞在NS組的凋亡細(xì)胞百分比明顯增高(P0.01);與NS組相比,LG組的凋亡細(xì)胞百分比明顯下降(P0.01),HG組的凋亡細(xì)胞百分比也明顯下降(P0.01);HG組與LG組比較,HG組的凋亡細(xì)胞百分比較LG組減少(P0.05)。3、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白含量表達(dá)結(jié)果與SH組相比,GRP78蛋白在NS組的表達(dá)上調(diào)(P0.01);與NS組相比,GRP78蛋白在LG組的表達(dá)下調(diào)(P0.05),GRP78蛋白在HG組的表達(dá)也下調(diào)(P0.01);HG組與LG組對比,HG與LG組的GRP78蛋白表達(dá)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與SH組相比,CHOP蛋白在NS組的表達(dá)增高(P0.01);與NS組相比,CHOP蛋白在LG組表達(dá)降低(P0.05),CHOP蛋白在HG組的表達(dá)降低(P0.01);HG與LG組的CHOP蛋白表達(dá)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、ATP及Ca~(2+)含量檢測結(jié)果與SH組相比,NS組的ATP含量下降(P0.01);與NS組相比,LG組的ATP含量增高(P0.05),HG組的ATP含量也增高(P0.01);HG組與LG組ATP含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與SH組相比,NS組的Ca~(2+)含量增加(P0.01);與NS組相比,HG組的Ca~(2+)含量降低(P0.05),LG組的鈣含量與NS的對比沒有差異;LG組與HG組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、MICU1蛋白含量表達(dá)結(jié)果與SH組相比,MICU1蛋白在NS組表達(dá)減低(P0.01);與NS組相比,MICU1蛋白在LG組表達(dá)增高(P0.05),MICU1蛋白在HG組表達(dá)增高(P0.05);HG組與LG組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�！窘Y(jié)論】心肺復(fù)蘇前給予4-苯基丁酸可以通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡途徑,減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放,拮抗鈣超載,改善線粒體的能量代謝,減輕心臟驟停/心肺復(fù)蘇誘導(dǎo)大鼠的全腦缺血再灌注損傷。
【圖文】：

SH 組大鼠的 HE 染色可見腦神經(jīng)元的細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，染色均勻。間質(zhì)致密，核大而圓。而 NS 組的神經(jīng)元體積變小，核固縮或不規(guī)則，間質(zhì)排列紊亂，組織水腫明顯。在低倍鏡下，與 SH 組相比，NS 組的 HE 染色結(jié)果可見明顯的低密度區(qū)；與 NS 組相比，LG 組與 HG 組的低密度區(qū)面積明顯減少，且 HG 組的低密度壞死區(qū)少于 LG 組。高倍鏡下，與 SH 組相比，NS 組的 HE 染色可見核固縮，碎裂增多，核質(zhì)分布不清晰，部分細(xì)胞水腫、壞死；與 NS 組相比，LG 和 HG 組的細(xì)胞核固縮、碎裂，細(xì)胞水腫、空泡的狀態(tài)較少，，且 HG 組的細(xì)胞水腫、壞死的狀態(tài)少于 LG 組。1、 HE 染色結(jié)果

TUNNEL染色圖Fig1-2:ThestainingofTUNNEL圖示：A：SH組B：NS組C：LG組D：HG組
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7

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