【摘要】：背景:乳腺癌位居女性癌癥發(fā)病之首,且我國(guó)居民的乳腺癌發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì),其早期診斷、早期治療是提高患者生存率的關(guān)鍵,因而針對(duì)乳腺癌的早期診斷與治療已成為研究熱點(diǎn)。光聲成像技術(shù)具有光學(xué)成像的高對(duì)比度和超聲成像的良好組織穿透力,能實(shí)時(shí)收集包括結(jié)構(gòu)、功能、代謝和分子信息在內(nèi)的多種生理病理數(shù)據(jù),理論上,有利于乳腺癌的早期診斷。同時(shí),隨著分子影像技術(shù)的迅猛發(fā)展,利用各種具有多種功能的光聲造影劑,將光聲成像與治療方法相結(jié)合起來(lái)的技術(shù)日益增多,為實(shí)現(xiàn)乳腺癌診療一體化研究提供可能。目前常用的光聲造影劑有金納米棒和吲哚菁綠,金納米棒價(jià)格昂貴,吲哚菁綠雖是目前唯一被FDA批準(zhǔn)用于臨床的染料分子,但其穩(wěn)定性較差、體內(nèi)清除快。因此,研究新型光聲成像劑對(duì)疾病的診療一體化具有重要意義。酞菁鋅(ZnPc)作為第二代光敏劑,具有光穩(wěn)定性好、光熱轉(zhuǎn)化效應(yīng)優(yōu)等優(yōu)勢(shì),多用于光動(dòng)力學(xué)治療,但應(yīng)用于光聲成像的研究鮮見(jiàn)。因此,本研究以PLGA為基材,通過(guò)雙乳化法及碳二亞胺法制備RGD靶向的載光敏劑ZnPc及化療藥物多烯紫杉醇的多功能納米探針,旨在探討其光聲介導(dǎo)下誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的能力,為乳腺癌的診療一體化擴(kuò)寬思路。目的:制備載多烯紫杉醇及酞菁鋅同時(shí)靶向乳腺癌的多功能分子探針,并研究其體外光聲顯像的特性、體外尋靶及光聲介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的能力。方法:采用雙乳化法(O/W/O)及碳二亞胺法制備載多烯紫杉醇及酞菁鋅并連接RGD靶向肽的多功能分子探針。采用透射電鏡觀察探針形態(tài),馬爾文激光電位及粒徑測(cè)量?jī)x檢測(cè)其粒徑及表面電位;紫外分光光度法及高效液相色譜法分別檢測(cè)其多烯紫杉醇及酞菁鋅包封率及載藥量;高效液相色譜法及透析法研究激光輻照下PLGA@ZnPc@DTX納米粒體外釋放DTX的特性;體外光聲顯像觀察不同ZnPc含量的納米粒體外顯影情況;流式細(xì)胞儀及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)其與RGD連接情況;體外尋靶實(shí)驗(yàn)中,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)靶向納米粒組、非靶向納米粒(PLGA@ZnPc@DTX)組對(duì)乳腺癌細(xì)胞的體外尋靶能力;體外誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中,流式細(xì)胞儀檢測(cè)空白納米粒組、單純載藥(PLGA@DTX)納米粒組、非靶向納米粒組、靶向納米粒組、非靶向納米粒+激光輻照組、靶向納米粒+激光輻照組各組的細(xì)胞凋亡率,評(píng)價(jià)納米探針體外光聲下誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的能力。結(jié)果:成功制備靶向乳腺癌的載多烯紫杉醇及酞菁鋅的多功能分子探針,其平均粒徑為(266.00±65.85)nm,表面電位為(-29.20±6.27)mV;多烯紫杉醇的包封率及載藥量分別為(88.00±0.32)%、(34.92±0.02)μg/mg,酞菁鋅的包封率及載藥量分別為(97.25±0.22)%、(30.87±0.11)μg/mg。HPLC 法測(cè)定 PLGA@ZnPc@DTX 納米粒在釋放介質(zhì)中24.0 h后,DTX釋放率約50%,48.0 h后釋放率約68%,72.0 h后釋放率約77%,與無(wú)激光輻照的對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組采用激光輻照后,同樣呈緩慢釋放趨勢(shì),激光輻照并未對(duì)藥物的釋放產(chǎn)生明顯影響。體外光聲成像實(shí)驗(yàn)表明,PLGA@ZnPc@DTX納米粒的光聲值波峰出現(xiàn)于700nm時(shí);不同ZnPc含量納米粒光聲信號(hào)隨ZnPc含量增加而增強(qiáng),相對(duì)于不含ZnPc納米粒的對(duì)照組,表現(xiàn)出明顯的光聲信號(hào)。激光共聚焦顯微鏡下觀察到FITC標(biāo)記的呈綠色熒光的RGD靶向肽與呈紅色熒光的DiI標(biāo)記的PLGA@ZnPc@DTX納米粒融合后,呈現(xiàn)黃色熒光,表明RGD靶向肽已成功與其相連。流式細(xì)胞儀測(cè)得PLGA@ZnPc@DTX納米粒與RGD靶向肽結(jié)合率為89.19%。體外尋靶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示靶向納米粒組細(xì)胞周?chē)始t色熒光的納米粒明顯多于非靶向納米粒組。體外誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中,流式細(xì)胞儀測(cè)定空白納米粒組、單純載藥納米粒組、非靶向納米粒組、靶向納米粒組、非靶向納米粒+激光輻照組、靶向納米粒+激光輻照組的MBA-MD-231細(xì)胞凋亡率分別為(7.06±2.64)%、(19.31±4.83)%、(17.41±1.78)%、(26.99±5.53)%、(41.54±3.27)%、(62.87±5.95)%,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中靶向納米粒組凋亡率高于非靶向納米粒組,更易誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(P0.05);激光輻照條件下,靶向納米粒組細(xì)胞凋亡率均高于其他五組(P0.05)。結(jié)論:成功制備了新型納米探針,其多烯紫杉醇及酞菁鋅包封率高,RGD連接率高,具有理想的粒徑和穩(wěn)定的體外緩釋行為,體外光聲顯像見(jiàn)明顯的光聲信號(hào),具備較好的主動(dòng)靶向乳腺癌細(xì)胞的能力,可實(shí)現(xiàn)光聲成像介導(dǎo)下抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。
【圖文】：

９６０邋ｒｎｎ波長(zhǎng)范圍的激光輻照ＰＬＧＡ＠ＺｎＰｃ＠ＤＴＸ時(shí)，可見(jiàn)光聲值波峰出現(xiàn)于７００ｎｍ逡逑時(shí)，由此選定７００ｎｍ波長(zhǎng)作為激光的激發(fā)波長(zhǎng)采集二維圖像。不同ＺｎＰｃ含量納米逡逑粒光聲信號(hào)隨ＺｎＰｃ含量增加呈明顯梯度增強(qiáng)（圖３），以不含ＺｎＰｃ的納米粒作逡逑為對(duì)照組。逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9;R445.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張君;彭喬立;張小明;劉剛;;腫瘤光聲成像研究進(jìn)展[J];中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志;2017年06期

2 駱三;查正寶;李妍妍;張書(shū)海;高艷光;;光聲成像造影劑的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年25期

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本文編號(hào)：2616974