【摘要】：目的:萬古霉素對于異質(zhì)性萬古霉素中介金黃色葡萄球菌(h VISA)生物膜形成的影響尚未明確。本研究旨在探討萬古霉素對臨床h VISA生物膜總量以及主要成分的影響,及其與萬古霉素治療h VISA失敗率高的關(guān)系。方法:(1)從臨床收集的S.aureus中,通過菌群譜型分析-曲線下面積法(PAP/AUC)鑒定h VISA菌株;(2)將臨床菌株h VISA(05307)和Mu3菌株(ATCC 700698,h VISA參考菌株)暴露于不同濃度(1/4×MIC,1/2×MIC,1×MIC)的萬古霉素,單獨的肉湯和不含抗生素的細菌懸浮液分別作為陰性和陽性對照;(3)使用結(jié)晶紫(CV)染色測量h VISA的生物膜總量;(4)并在共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)下顯現(xiàn);(5)提取生物膜中的細胞外基質(zhì)(ECM);(7)通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析從生物膜中提取的蛋白質(zhì)組分并用Bradford蛋白質(zhì)檢測試劑盒對蛋白質(zhì)總量進行定量;(8)ECM中的細胞外多糖粘附素(PIA)采用免疫斑點印跡法并通過灰度值分析進行半定量;(9)細胞外DNA(e DNA)采用酶敏感實驗進行間接的半定量。結(jié)果:(1)與陽性對照相比,1×MIC萬古霉素處理組h VISA的生物膜明顯增強,但是當細菌暴露于亞抑菌濃度的萬古霉素中,兩株菌株中的生物膜形成都沒有明顯改變。(2)不同濃度的萬古霉素處理,與陽性對照組相比,兩株菌株形成的生物膜中,其ECM里的PIA和蛋白質(zhì)組分的表達量均沒有明顯差異。加入DNase I處理后,1×MIC萬古霉素處理的菌株形成的生物膜被顯著抑制到與其他處理組相似的水平。結(jié)論:1×MIC的萬古霉素誘導的e DNA釋放是萬古霉素增強h VISA生物膜形成的必要因素,這可能有助于解釋萬古霉素治療h VISA感染失敗率高的原因。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R446.5

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