【摘要】：目的:隱球菌病作為一種嚴重的侵襲性真菌感染性疾病,目前臨床上缺乏靈敏度高、特異性強且快速準確的診斷方法使患者能得到早期精準治療,改善預后。本研究擬建立一種核酸序列依賴擴增(Nucleic acid sequence-based amplification NASBA)技術來檢測隱球菌,通過對比NASBA、PCR方法、莢膜多糖抗原膠體金法檢測同批次臨床標本的性能參數,以此驗證NASBA方法的臨床應用價值。方法:首先設計一對具有隱球菌屬特異性的引物,構建NASBA擴增隱球菌RNA的方法并評價該方法的靈敏度和特異性。根據EORTC/MSG所定義的診斷標準收集隱球菌病陽性病例和非隱球菌病陰性病例,運用隱球菌莢膜多糖抗原檢測(膠體金法)、普通PCR及本研究建立的NASBA方法分別對所收集病例標本進行檢測,比較三種診斷方法的性能指標以評估出最佳診斷策略。結果:本研究建立的NASBA方法檢測隱球菌,其靈敏度高,達到10cfu/ml,特異性也非常良好。NASBA、莢膜多糖抗原膠體金法及PCR靈敏度分別是87.5%(95%CI,66.53-96.71%)、100%(95%CI,82.83-100%)、66.67%((95%CI,44.69-83.57%),特異性分別是94.59%(95%CI,80.47-99.06%)、81.08%(95%CI,64.29-91.44%)、78.37%(95%CI,61.34-81.58%)。結論:NASBA方法具有高效、準確、簡便等優(yōu)勢,能夠滿足臨床診斷隱球菌感染的需求。整個實驗過程無需特殊儀器,適合在普通的臨床實驗室開展,有望成為新的隱球菌感染的常規(guī)診斷方法。
【圖文】：

圖 1.1 NASBA 擴增產物電泳結果Results of electrophoresis of NASBA amplificationL1000bp Marker; 1:新型隱球菌（FY 226）；2：陰曲霉、串珠鐮刀菌、金黃色葡萄球、銅綠假近平滑念珠菌）和新型隱球菌同時進行 N的 RNA 擴增產物在 229bp 處出現了目的條帶（圖 1.2），證明本研究建立的方法特異性理

圖 1.2 不同菌種 NASBA 擴增后電泳結果ectrophoresis results after amplification of different strain marker；1-2：新型隱球菌（FY 226）；3：煙曲霉 (CMCC-3629）；5：白色念珠菌 (ATCC 64548)；6：近平滑念珠菌 (ATCC 29213)； 8：銅綠假單胞菌 (ATCC 27853) ；9：析增 106cfu/ml、 105cfu/ml 、104cfu/ml 濃度隱球菌其倍比稀釋后的相當于孢子濃度分別為 103cfu/ml、u/ml 的 RNA，經電泳方法檢測結果發(fā)現 RNA 對應條帶，推斷該方法靈敏度可達 10 cfu/ml（圖 1.3）。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R519;R440

【參考文獻】

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本文編號：2603889