【摘要】：【研究背景】甲卡西酮(Methcathinone,CAT)是卡西酮類的合成藥,也叫“喪尸藥”,是苯丙胺類β酮基的精神興奮劑,與甲基苯丙胺具有相似的結(jié)構(gòu),能夠產(chǎn)生欣快,運(yùn)動(dòng)增加,致幻等作用,也能引起高熱,記憶力降低,偏執(zhí),焦慮,癲癇等毒性癥狀,嚴(yán)重者可導(dǎo)致殘疾和死亡。早期是作為抗抑郁藥得到使用,后因其副作用而被臨床禁用。近年來,隨著傳統(tǒng)毒品的嚴(yán)厲管制和打擊,而CAT因具有與苯丙胺類相似的刺激性作用,正逐步成為傳統(tǒng)毒品的替代物在人群中廣泛濫用,故關(guān)于CAT濫用、成癮及死亡案例也相繼在各國(guó)出現(xiàn),因此對(duì)CAT的毒性機(jī)制的研究顯得尤為重要。然而國(guó)內(nèi)外對(duì)CAT毒性機(jī)制的研究甚少,大都停留在化學(xué)結(jié)構(gòu),藥理作用和檢測(cè)分析上,故本課題組通過建立CAT中毒模型,對(duì)CAT的神經(jīng)毒性機(jī)制進(jìn)行初步探索。CAT與苯丙胺類藥物在化學(xué)結(jié)構(gòu)與藥理學(xué)方面相似,兩者均通過增加細(xì)胞外單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如多巴胺(Dopane,DA)、5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)等的濃度發(fā)揮毒性作用,且實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)苯丙胺類抑制劑能對(duì)CAT濫用患者產(chǎn)生保護(hù)性效果。此外,研究發(fā)現(xiàn)CAT的前體物質(zhì)能導(dǎo)致氧化應(yīng)激相關(guān)酶如過氧化氫酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)等活性及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量改變,并產(chǎn)生神經(jīng)元凋亡。早期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)曾表明CAT導(dǎo)致行為學(xué)改變與ROS產(chǎn)生相關(guān)。已有大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)氧化應(yīng)激是甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)的主要神經(jīng)毒性機(jī)制�；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)及CAT與METH在化學(xué)結(jié)構(gòu)與毒理學(xué)上的相似性,大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為CAT的神經(jīng)毒性機(jī)制可能涉及氧化應(yīng)激。一般情況下,體內(nèi)氧化與抗氧化處于動(dòng)態(tài)平衡。在化學(xué)性、物理學(xué)及生物學(xué)等因素刺激下,產(chǎn)生氧化應(yīng)激,即氧化活性物質(zhì)產(chǎn)生過多,體內(nèi)抗氧化劑無法將其完全清除。過多的活性氧物質(zhì)(氧自由基)與細(xì)胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)(如DNA)結(jié)合,致機(jī)體損傷。N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)作為一強(qiáng)有效的小分子抗氧化物質(zhì),脂溶性高,易通過血腦屏障,常被用于氧化應(yīng)激的研究。故本實(shí)驗(yàn)通過利用抗氧化劑NAC對(duì)CAT染毒大鼠進(jìn)行預(yù)處理,檢測(cè)不同組氧化應(yīng)激相關(guān)酶的活性,觀察各組大腦自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,及神經(jīng)元凋亡情況,對(duì)CAT的氧化應(yīng)激毒性機(jī)制進(jìn)行研究�！狙芯磕康摹�1、CAT對(duì)成年大鼠基本毒性觀察2、CAT神經(jīng)毒性中氧化應(yīng)激機(jī)制作用3、CAT神經(jīng)毒性中自噬相關(guān)蛋白表達(dá)情況4、CAT神經(jīng)毒性中神經(jīng)元凋亡情況5、抗氧化劑對(duì)CAT染毒大鼠的保護(hù)價(jià)值【研究方法】1、建立CAT中毒模型及基本毒性觀察SD(Sprague-Dawley)成年雄性大鼠,共24只(160g-200g),12h光暗循環(huán)交替,自由進(jìn)食與飲水。隨機(jī)分為對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組,抑制+實(shí)驗(yàn)組及抑制組四組,各組大鼠給藥方式均為腹腔注射(i.p.),對(duì)照組每日給以0.9%Nacl處理,每次1ml,連續(xù)15日;實(shí)驗(yàn)組前三日為0.9%Nacl,第4-15日為CAT(0.5mg/kg);抑制組+實(shí)驗(yàn)組,前三日只給以抑制劑NAC(150mg/kg),第4-15日,在CAT給藥前30min注射NAC;抑制組給以抑制劑NAC(150mg/kg),連續(xù)15日。最后一次用藥24h后,斷頭處理,取出腦組織。實(shí)驗(yàn)過程觀察大鼠體重、體溫及行為學(xué)改變;各組大鼠腦組織HE染色,觀察病理改變。2、CAT染毒后神經(jīng)毒性中氧化應(yīng)激機(jī)制的研究用超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathinone peroxidase,GSH-PX)、谷胱甘肽(Glutathinone,GSH)及丙二醛檢測(cè)試劑盒對(duì)各組大鼠腦組織中SOD、CAT、GSH-PX、GSH及MDA進(jìn)行活性檢測(cè);利用Western blot技術(shù)對(duì)各組腦組織Atg-7、beclin-1及LC3蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè);用TUNEL技術(shù)對(duì)大鼠腦組織各部位進(jìn)行染色,觀察凋亡情況。3、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,行單因素方差分析(one-way ANOVA),用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間分析,設(shè)P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)和圖表均采用GraphPad Prism5及SPSS19分析�！狙芯拷Y(jié)果】1、腹腔注射CAT后,各組間體重?zé)o顯著性差異;CAT藥物注射前后體溫較其他三組具有明顯改變(P0.05),刻板行為評(píng)分結(jié)果較其他三組具有顯著改變(P0.05),表現(xiàn)為活動(dòng)增多,重復(fù)性探索樣抬頭,轉(zhuǎn)圈行為等。而經(jīng)NAC預(yù)處理后的CAT+NAC組,與NS組相比,大鼠的刻板行為評(píng)分和體溫變化無明顯改變。HE染色顯示神經(jīng)元水腫,神經(jīng)元變性,并見噬神經(jīng)現(xiàn)象。2、與其他三組比較,實(shí)驗(yàn)組抗氧化相關(guān)酶SOD、GSH-PX、CAT及GSH活性出現(xiàn)明顯下降(P0.05);MDA含量出現(xiàn)顯著性升高(P0.05);而經(jīng)NAC預(yù)處理后的CAT+NAC組,與NS組比較抗氧化相關(guān)酶SOD、GSH-PX、CAT及GSH活性無明顯差異,MDA含量無明顯改變。3、Western blot檢測(cè)結(jié)果:與其他三組比較,CAT組beclin-1,Atg-7的表達(dá)量出現(xiàn)明顯升高(P0.05),LCⅡ/LCⅠ的比值出現(xiàn)明顯升高(P0.05);而經(jīng)NAC處理后的CAT+NAC組與對(duì)照組相比,beclin-1,Atg-7的表達(dá)量無明顯差異,LCⅡ/LCⅠ的比值無明顯改變。4、TUNEL染色結(jié)果顯示,CAT組陽性細(xì)胞增多,即神經(jīng)元凋亡增加,陽性指數(shù)呈上升趨勢(shì),與其他三組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);而經(jīng)NAC預(yù)處理后的CAT+NAC組,與對(duì)照組相比無明顯差異�！狙芯拷Y(jié)論】1、甲卡西酮染毒后體溫升高、存在刻板行為、腦組織出現(xiàn)相應(yīng)病理學(xué)改變。2、氧化應(yīng)激是甲卡西酮神經(jīng)毒性作用的重要機(jī)制之一。3、甲卡西酮會(huì)引起自噬、凋亡增加。4、抗氧化劑可有效拮抗甲卡西酮所致的氧化應(yīng)激損傷及自噬和凋亡效應(yīng)。
【圖文】：

圖 2-4a1 對(duì)照組皮質(zhì)（HE 染色,NS-1×100；NS-2×200）圖 2-4a2 實(shí)驗(yàn)組皮質(zhì)（HE 染色,CAT-1×100；CAT-2×200）

a2實(shí)驗(yàn)組皮質(zhì)（HE染色,CAT-1×100；CAT-2×200）
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R749.64

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐鵬;許鵬飛;劉圓;邱毅;沈昊偉;;新型合成毒品4-甲基乙卡西酮對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力的遠(yuǎn)期影響[J];中國(guó)藥物依賴性雜志;2015年06期

2 代勇;周曉英;皮建華;吳永富;孫琴;;SPME-GC-MS檢測(cè)尿液中甲卡西酮類毒品[J];化學(xué)研究與應(yīng)用;2015年09期

3 錢振華;賈薇;花鎮(zhèn)東;;高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定三種卡西酮類精神活性物質(zhì)[J];中國(guó)司法鑒定;2015年01期

4 張紅波;趙璐;;甲卡西酮的GC/MS定量分析方法[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

5 錢振華;徐鵬;劉克林;;新型毒品卡西酮類策劃藥“浴鹽”[J];中國(guó)藥物濫用防治雜志;2013年01期

6 常穎;徐鵬;高利生;;甲卡西酮的液相色譜法測(cè)定[J];化學(xué)分析計(jì)量;2012年01期

7 曲直;劉志民;;甲卡西酮及其管制[J];中國(guó)藥物濫用防治雜志;2012年01期

8 常穎;高利生;;甲卡西酮概述及其分析方法[J];刑事技術(shù);2011年05期

9 廖永暉;湯雨;千年松;竇科峰;;氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年01期

10 劉偉,李慶軍,盧綺萍;Caspase與細(xì)胞凋亡[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

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本文編號(hào)：2602571