【摘要】：克氏綜合征(Klinefelter Syndrome,KS)是由于男性性染色體中存在額外的X染色體而表現(xiàn)出的一組癥候群,是男性最常見的性染色體異常疾病之一,也是導致男性不育的最常見原因。KS的發(fā)病率在新生兒男嬰中為0.1-0.2%,在男性不育患者中為3%,在非梗阻性無精少精癥患者中為10%-12%。越來越多的證據表明,如果在適當?shù)臅r機為KS患者提供治療和干預措施,如睪酮替代療法和睪丸精子提取術等,不僅能有效地提高患者的生活質量,延緩并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展,還能降低KS發(fā)病率及提高人口質量。然而不幸地是,大多數(shù)克氏綜合征患者并沒有得到確診,僅有25%的KS患者得到診斷,且在這些患者中多數(shù)是在成年期發(fā)現(xiàn)有不育癥時才被確診,而此時他們已錯過最佳的生育治療時機,承受著生理上和心理上的雙重負擔。因此,開展KS疾病的人群篩查是提高克氏綜合征診斷率的重要措施。目前用于克氏綜合征的檢測方法主要有核型分析、熒光原位雜交技術(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)、多重連接探針擴增技術(Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification,MLPA)和實時定量 PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)等技術,但這些技術方法在操作簡便性、檢測成本、臨床靈敏度和特異性等方面存在一定的局限性,而不能大規(guī)模應用于臨床篩查。高分辨率熔解曲線(HighResolutionMelting,HRM)分析方法作為一種分子遺傳診斷領域的新技術在疾病篩查方面的應用日漸廣泛。為此,本研究旨在建立一種簡單快速的可用于人群克氏綜合征篩查的HRM檢測方法,通過三個醫(yī)療中心對共計1373例臨床樣本的檢測,評估其臨床靈敏度和特異性。HRM檢測方法是利用同一引物對同時擴增ZFX基因和ZFY基因的特異性片段,正常男性ZFX/ZFY的比值為1,而克氏綜合征病例的ZFX/ZFY的比值會發(fā)生改變,因此正常男性和KS形成的熔解曲線會有所不同,可以在數(shù)據分析過程中加以區(qū)分。我們評估了 HRM檢測方法的檢測限、截斷值(Cut-off值)以及臨床靈敏度和特異性。同時,為了發(fā)掘HRM分析技術在新生兒克氏綜合征篩查的應用潛力,還收集了 60例新生兒干血片樣本進行檢測。實驗結果表明本研究所建立的基于HRM技術的人群克氏綜合征篩查體系DNA模板量的檢測限度范圍大(5-50ng),對KS嵌合體類型具有高分辨率,高臨床靈敏度(100%)和高特異性(99.8%)。此外,該篩查體系檢測重復性好、通量高、高效快速(2h)、成本低、操作簡單易于自動化,并且外周血和干血片樣本均能檢測。因此,HRM分析技術可以作為基于產后KS人群篩查的優(yōu)選方法,可用于不同年齡階段的篩查。
【圖文】：

ＤＮＡ的解鏈過程。高分辨率焰解曲線技術原理是：在常規(guī)的ＰＣＲ反應之后對產逡逑物進行溶解曲線分析，加入的飽和型熒光染料在ＰＣＲ反應后會與其產物相結合，逡逑如圖１，此時的熒光信號值最大，隨后對ＰＣＲ產物進行加熱升溫，在溫度升高逡逑的過程中，雙鏈ＤＮＡ逐漸發(fā)生解鏈行為，當雙鏈ＤＮＡ解成單鏈ＤＮＡ時，熒光逡逑染料分子也會逐漸地從雙鏈ＤＮＡ上釋放出來，熒光信號會隨之逐漸減弱。由于逡逑組成雙鏈ＤＮＡ的核苷酸不同，，Ｔｍ也不同，通過實時監(jiān)測溫度變化過程中焚光逡逑強度信號值的變化，以此形成的熔解曲線就可以對雙鏈ＤＮＡ做出分析。不同位逡逑點、ＧＣ含量、擴增長度等都是影響熔解曲線峰形的因素從而會形成不同形態(tài)的逡逑熔解曲線，因此可以通過恪解曲線將ＤＮＡ原始序列中存在的差異較為直觀地展逡逑示出來。逡逑１０逡逑

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【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R596;R440

【參考文獻】

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1 閆_g;白雪;邢萬金;;人類性染色體擬常染色體區(qū)的研究進展[J];生命的化學;2014年04期

2 劉興章;唐運革;鄭立新;周冰q

本文編號：2602031