【摘要】：研究背景膿毒癥(sepsis)被定義為因宿主對(duì)感染的反應(yīng)失調(diào)引起的危及生命的器官功能障礙,其特征是全身炎癥反應(yīng)綜合征。膿毒癥心肌損傷是其常見(jiàn)且嚴(yán)重影響預(yù)后的并發(fā)癥,目前認(rèn)為線粒體氧化應(yīng)激反應(yīng)和線粒體功能障礙在膿毒癥心肌損傷的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。Sesn2屬于Sestrins(Sesns)蛋白家族的重要成員,具有多效的生物學(xué)功能。研究發(fā)現(xiàn),Sesn2在膿毒癥時(shí)可能起保護(hù)作用。然而,Sesn2與膿毒癥心肌損傷之間的關(guān)系尚不明確,因此本研究的著重點(diǎn)是Sesn2在膿毒癥時(shí)心肌組織中表達(dá)變化及機(jī)制研究。研究目的探索Sesn2與膿毒癥心肌損傷的關(guān)系,以及Sesn2在膿毒癥心肌損傷中的作用及機(jī)制。研究方法第一部分:實(shí)驗(yàn)大鼠分為正常對(duì)照組和膿毒癥組(12h、24 h和48 h),留取心臟組織及血清標(biāo)本,接著檢測(cè)血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH),組織活性氧(ROS)和線粒體膜電位(MMP)水平,采用RT-PCR、Western blot及免疫組化檢測(cè)心肌組織的Sesn2mRNA及蛋白的表達(dá),HE切片和電鏡觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化。第二部分:分離和培養(yǎng)新生SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞用25μg/ml LPS刺激心肌細(xì)胞Oh、6h、12h和24h,然后檢測(cè)Sesn2的表達(dá);接著采用干擾慢病毒(siRNA)沉默心肌細(xì)胞Sesn2基因的表達(dá),將心肌細(xì)胞隨機(jī)分成四組,分別為空載組、Sesn2干擾組、LPS組和Sesn2干擾+LPS組,LPS處理時(shí)間均為12h,繼之檢測(cè)心肌損傷指標(biāo)(LDH、TNF-α和IL-1β)、氧化應(yīng)激指標(biāo)(ROS、MDA和SOD)、線粒體功能相關(guān)指標(biāo)(mtDNA、MMP和ATP)、線粒體生物發(fā)生相關(guān)的基因(PGC-1α、NRF-1和TFAM)表達(dá)等變化,同時(shí)電鏡觀察心肌細(xì)胞線粒體形態(tài)學(xué)變化。研究結(jié)果第一部分:1.膿毒癥組出現(xiàn)心肌損傷(CK、CK-MB和LDH水平增加),特別是心肌線粒體結(jié)構(gòu)及功能損傷(ROS水平升高,MMP水平下降)。2.膿毒癥組大鼠心肌組織Sesn2mRNA和蛋白表達(dá)均增加。3.膿毒癥組大鼠心肌線粒體ROS與Sesn2表達(dá)量呈正相關(guān),而MMP與Sesn2表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。第二部分:1.LPS刺激心肌細(xì)胞后,Sesn2mRNA和蛋白表達(dá)均增加。2.LPS可引起心肌細(xì)胞損傷(LDH、TNF-α和IL-1β水平升高)、氧化應(yīng)激反應(yīng)(ROS和MDA水平升高、SOD水平下降)、線粒體結(jié)構(gòu)和功能損傷(MMP、ATP和mtDNA水平下降),以及線粒體生物發(fā)生增強(qiáng)(PGC-1α、NRF-1和TFAM基因表達(dá)升高),而干擾Sesn2表達(dá)可抑制線粒體生物發(fā)生,加重氧化應(yīng)激反應(yīng)和線粒體功能障礙,導(dǎo)致心肌細(xì)胞更嚴(yán)重的損傷。結(jié)論1.Sesn2表達(dá)與膿毒癥心肌損傷密切相關(guān),特別是心肌線粒體的損傷;2.Sesn2在膿毒癥心肌細(xì)胞損傷中具有保護(hù)作用,可能是通過(guò)增強(qiáng)線粒體生物發(fā)生,減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)和線粒體功能障礙,從而保護(hù)細(xì)胞。
【圖文】：

（ｃ）逡逑圖１各組血清ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ和ＬＤＨ水平逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｈｅ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｏｆ邋ＣＫ，邋ＣＫ－ＭＢ邋ａｎｄ邋ＬＤＨ邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邋ｉｎ邋ｅａｃｈ邋ｇｒｏｕｐ逡逑３．心肌組織活性氧（ＲＯＳ）水平變化逡逑與對(duì)照組比較，ＬＰＳ－１２ｈ組、ＬＰＳ－２４ｈ組和ＬＰＳ－４８ｈ組大鼠心肌組織ＲＯＳ逡逑水平明顯升高，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），而ＬＰＳ－２４ｈ組ＲＯＳ水平最高。與逡逑ＬＰＳ－２４ｈ組比較，ＬＰＳ－４８ｈ組ＲＯＳ水平有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。逡逑見(jiàn)表２和圖２邋（ａ）。逡逑２８逡逑

水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），而ＬＰＳ－２４ｈ組ＲＯＳ水平最高。與逡逑ＬＰＳ－２４ｈ組比較，ＬＰＳ－４８ｈ組ＲＯＳ水平有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。逡逑見(jiàn)表２和圖２邋（ａ）。逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R459.7;R542.2

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本文編號(hào)：2598899