【摘要】：目的:本實驗旨在研究異基因造血干細胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)術(shù)后腸道微生物的變化及其與腸道(gastrointestinal,GI)移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)的關(guān)系。同時也研究再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)患者腸道微生物的變化情況。方法:選取65例血液病患者,其中AA 48例(12例為初診AA患者,36例為非初診AA患者),其它血液病17例。收集全部患者移植前2周,移植后1個月及急性GI GVHD發(fā)生時的糞便樣品;同時收集26例供者及10例健康人的糞便樣品,作為對照組。提取糞便微生物中的16S rRNA并擴增其V4可變區(qū),擴增產(chǎn)物在Illumina HiSeq 2500平臺測序,測序結(jié)果進行對比分析,研究移植前后以及急性GI GVHD發(fā)生前后腸道微生物的變化。另外,將其中48例AA患者單獨進行對比分析,研究其移植前后,即AA的免疫紊亂和造血功能衰竭被糾正前后其腸道微生物的差異。結(jié)果:1.移植前微生物多樣性中位數(shù)為5.70,對照組為7.30,兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);移植后多樣性為3.88,低于對照組(P0.001)及移植前(P0.001)。移植后多樣性在不發(fā)生GI GVHD的患者中為4.24,即將發(fā)生GI GVHD的患者中為2.90,兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);GI GVHD發(fā)生時的患者中為2.13,低于不發(fā)生GI GVHD的患者(P0.05)。2.移植后腸道微生物發(fā)生一系列的變化,如擬桿菌門、擬桿菌綱、擬桿菌目等相對豐度降低;變形菌門、丙型變形菌綱、腸桿菌目等相對豐度增高,其中擬桿菌門相對豐度的降低與GI GVHD相關(guān)。移植后擬桿菌門中位數(shù)在即將發(fā)生GI GVHD的患者中為0.80%,比不發(fā)生GI GVHD的患者中為18.00%降低(P0.05)。3.初診組毛螺菌科中位數(shù)為6.91%,比對照組毛螺菌科為11.27%降低(P0.05)。非初診組毛螺菌科為7.31%,也比對照組降低(P0.05);但與初診組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。移植前組毛螺菌科為7.20%,也比對照組降低(P0.05)。移植后組毛螺菌科為9.39%,與移植前組相比,有明顯上升趨勢,但差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與對照組相比,差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.共觀察6例AA患者移植術(shù)后血象與毛螺菌科的動態(tài)變化過程,其中4例患者血象恢復(fù)正常,毛螺菌科水平整體呈上升趨勢;2例患者移植術(shù)后1個月血象恢復(fù)正常,毛螺菌科水平較移植前升高,但之后血象全面下降,毛螺菌科水平也明顯降低。結(jié)論:1.Allo-HSCT術(shù)后腸道微生物多樣性降低,并與GI GVHD相關(guān),在急性GI GVHD發(fā)生時微生物多樣性降低更加明顯。2.Allo-HSCT術(shù)后腸道微生物發(fā)生一系列的變化,如擬桿菌門、擬桿菌綱、擬桿菌目等相對豐度降低;變形菌門、丙型變形菌綱、腸桿菌目等相對豐度增高,其中擬桿菌門相對豐度降低,并與即將發(fā)生的GI GVHD相關(guān)。3.毛螺菌科相對豐度的降低可能與AA相關(guān),allo-HSCT術(shù)后AA的免疫紊亂和骨髓衰竭基本被糾正時,毛螺菌科水平整體呈上升趨勢,并且毛螺菌科的變化與移植后血象的動態(tài)變化情況相一致。
【圖文】：

腸道微生物的免疫功能[9]

圖 2. 工作流程圖1.2.2.5 DNA 測序分析方法1.2.2.5.1 數(shù)據(jù)統(tǒng)計在進行數(shù)據(jù)處理過濾時，，使用內(nèi)部撰寫的程序?qū)υ嫉臏y序數(shù)據(jù)進行如下處理，獲得Clean Data，具體步驟如下：1）采取按窗口去除低質(zhì)量的方法，具體操作如下：設(shè)置30 bp為窗口長度，如果窗口平均質(zhì)量值低于20 bp，從窗口開始截除read末端序列，移除最終read長度低于原始read長度75%的reads;2）去除接頭污染reads（默認adapter序列與read序列有15 bp的overlap，設(shè)置為15 bp，允許錯配數(shù)為3 bp）；
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R457.7;R556.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2590878