【摘要】：目的:探討海帶多糖(LJP)通過p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信號通路改善放射誘導(dǎo)的小鼠下頜下腺血管損傷。方法:1、將120只2月齡雌性昆明小鼠,隨機分為對照組、LJP組、放射組、放射+LJP組,每組30只,用~(60)Coγ射線制作放射誘導(dǎo)小鼠下頜下腺損傷模型。LJP腹腔注射于放射前1d進行,連續(xù)給藥7d后,改為每2d一次,放射后14d結(jié)束。2、分別于放射后1d,7d,14d,檢測各組小鼠體重,檢測毛果蕓香堿在30 min內(nèi)誘導(dǎo)的唾液總量,并稱重每只小鼠下頜下腺重量。3、采用HE染色觀察放射后1d,7d,14d小鼠下頜下腺腺泡、導(dǎo)管、血管和組織間質(zhì)的形態(tài)學(xué)變化。4、采用免疫組織化學(xué)法觀察放射后1d,7d,14d小鼠下頜下腺CD31,p-p38MAPK,Bcl-2的表達。5、采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測放射后1d,7d,14d VEGFA,VEGFR-2的表達。6、采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定下頜下腺組織中p-p38MAPK和內(nèi)皮素-1(ET-1)水平。結(jié)果:1、不同時間點各組小鼠體重變化:放射組和放射+LJP組小鼠體重明顯減小(P0.05),與放射組相比,放射+LJP組體重增加(P0.05),LJP組和對照組未見差異(P0.05)。2、放射后1d,7d,14d各組小鼠的唾液量:不同時間點放射組和放射+LJP組小鼠唾液量均明顯減少(P0.05),經(jīng)LJP防治后,與放射組相比,放射+LJP組小鼠唾液量呈增加趨勢(P0.05),LJP組和對照組未見差異(P0.05)。3、各組小鼠下頜下腺重量無明顯差異(P0.05)。4、HE染色顯示:與對照組相比,LJP組小鼠下頜下腺形態(tài)無明顯異常變化。對照組毛細血管豐富,可見大量紅細胞,與對照組相比,放射組和放射+LJP組毛細血管少,低倍鏡下見較小的腺泡細胞,高倍鏡下可見少量紅細胞。放射組和放射+LJP組腺泡呈空泡樣變性,經(jīng)LJP治療后隨著時間的延長,放射+LJP組毛細血管量增多。5、放射后1d,7d,14d放射組和放射+LJP組小鼠p-p38MAPK的表達增強(P0.05),在放射后1d達峰值,隨著時間的延長放射+LJP組P38MAPK的表達有減少趨勢,在放射后14d恢復(fù)到對照組水平。放射組和放射+LJP組小鼠ET-1的表達增加(P0.05),經(jīng)LJP防治后,在不同時間點放射+LJP組ET-1表達量有減少趨勢,LJP組和對照組未見差異(P0.05)。6、放射后1d,7d,14d放射組和放射+LJP組小鼠CD31,Bcl-2表達減弱(P0.05),經(jīng)LJP防治后,在不同時間點放射+LJP組CD31,Bcl-2表達量有增加趨勢,LJP組和對照組未見差異(P0.05)。結(jié)論:1、放射誘導(dǎo)的下頜下腺血管損傷與放射誘導(dǎo)p38MAPK磷酸化有關(guān),下頜下腺血管損傷導(dǎo)致小鼠唾液流速降低。2、LJP可下調(diào)磷酸化p38MAPK從而下調(diào)ET-1保護放射誘導(dǎo)的下頜下腺血管損傷,繼而升高小鼠唾液流速。3、LJP可以上調(diào)VEGFA,VEGFR-2表達,下調(diào)磷酸化p38MAPK表達,改善放射誘導(dǎo)的下頜下腺血管損傷。
【圖文】：

放射+LJP 組每只小鼠均用 15Gy 單劑量照射，，對照組及對照+LJP 組小鼠照射劑量為 0Gy。圖2-2 放射誘導(dǎo)的小鼠頜下腺損傷模型Fig.2-2 The model of radiation-induced submandibular gland injury of mice2.3 稱重不同時間點各組小鼠體重，檢測毛果蕓香堿誘導(dǎo)的唾液流速并稱重頜下腺2.3.1 分別于放射后1d,7d,14d 稱重各組小鼠體重。2.3.2 將無菌脫脂棉制成數(shù)個綠豆大小的小棉球和數(shù)個棉墊（3cm *5cm），為每只測唾小鼠準備兩個棉球和一塊棉墊，稱量記錄棉球和棉墊干重。用3.5%水合氯醛（350 mg/kg）麻醉小鼠，經(jīng)頸部皮下注射毛果蕓香堿（2mg/kg），將小棉球放入小鼠舌下，隨時更換稱重，以便收集到所有唾液，共計 30 min 。（圖2-3）唾液分泌量（mg）= 棉球和棉墊總濕重 - 棉球和棉墊總干重。按照 1mg / μl ，計算唾液體積, 按照收集時間（分鐘）和分泌唾液量（μl）計算唾液流

半下頜下腺組織放入備好的小瓶子，封口、標記，固定時間 8h-24h。固定好后用濾紙吸干唾液腺上多余液體，在電子分析天平上稱重下頜下腺。圖2-3-3 小鼠下頜下腺Fig.2-3-3 submandibular gland of mice
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R782;R730.55

【參考文獻】

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1 孫文忠;海帶多糖抗大鼠頜下腺輻射損傷以及鼻咽癌裸鼠移植瘤的實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號：2590845