【摘要】：第一部分以整合素αv亞基為靶點(diǎn)干預(yù)放射性肺纖維化的動(dòng)物水平研究目的放射性肺纖維化是胸部放射治療的常見并發(fā)癥,目前仍缺乏有效的預(yù)防和治療手段。因此,針對(duì)放射性肺纖維化的研究具有重要臨床意義。TGF-β1是調(diào)節(jié)肺纖維化的關(guān)鍵因子,肌成纖維細(xì)胞是調(diào)控肺纖維化的關(guān)鍵細(xì)胞。研究表明肌成纖維細(xì)胞表達(dá)的整合素αv介導(dǎo)的TGF-β1活化在肝纖維化和腎纖維化中具有重要作用,而整合素αv在放射性肺纖維化中的作用尚無報(bào)道。本研究將探討以整合素αv亞基為靶點(diǎn)干預(yù)放射性肺纖維化的可行性。方法利用Pdgfrb-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠靶向肌成纖維細(xì)胞,構(gòu)建Itgav~(loxP/loxP);Pdgfrb-Cre肌成纖維細(xì)胞整合素αv條件性敲除小鼠。給予上述轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠胸部單次16Gy照射,照射后第24周通過肺組織HE染色、Masson染色、Ashcroft纖維化評(píng)分、小動(dòng)物活體CT成像、羥脯氨酸測(cè)定、組織蛋白免疫印跡分析等方法比較基因敲除型和野生型小鼠肺纖維化程度。結(jié)果野生型小鼠相比,基因敲除小鼠放射性肺纖維化程度顯著減輕。具體表現(xiàn)為與野生型小鼠相比,Itgav~(loxP/loxP);Pdgfrb-Cre基因型小鼠保有較為完整的肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、Ashcroft纖維化評(píng)分較低(p0.01)、膠原沉積較少、羥脯氨酸含量較低(p0.05)、α-SMA表達(dá)水平較低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論敲除肌成纖維細(xì)胞整合素αv基因可顯著減輕小鼠放射性肺纖維化,為臨床上以整合素αv亞基為靶點(diǎn)干預(yù)放射性肺纖維化提供了理論依據(jù)。第二部分整合素αv亞基通過激活TGF-β1及其下游通路促進(jìn)放射性肺纖維化目的我們通過建立ItgavloxP/loxP;Pdgfrb-Cre條件性基因敲除小鼠放射性肺纖維化模型,發(fā)現(xiàn)肌成纖維細(xì)胞表達(dá)的整合素αv是放射性肺纖維化病理過程中的關(guān)鍵蛋白。研究表明,整合素αv在TGF-β1的活化中起關(guān)鍵作用。然而,整合素αv是否通過激活TGF-β1促進(jìn)放射性肺纖維化的發(fā)生尚不清楚。本研究將進(jìn)一步探討整合素αv在放射性肺纖維化中的作用機(jī)制。方法應(yīng)用ELISA方法測(cè)定整合素αv敲除型和野生型小鼠血漿TGF-β1水平,比較照射前后血漿TGF-β1水平變化。以8Gy照射MRC-5細(xì)胞,比較照射前后整合素αv、TGF-β1下游Smad通路蛋白和纖維化指標(biāo)的表達(dá)變化。應(yīng)用外源性RGD多肽、TGF-β1和基因敲低技術(shù),明確整合素αv對(duì)TGF-β1的激活作用及其作用機(jī)制。結(jié)果照射組小鼠血漿總TGF-β1水平均較對(duì)照組升高,且整合素αv敲除型與野生型小鼠兩組間無明顯差異。而照射組中敲除型小鼠血漿活化型TGF-β1水平較受照射的野生型小鼠明顯降低。MRC-5受照射后整合素αv、磷酸化Smad2/3、α-SMA和膠原的表達(dá)均上調(diào)。利用外源性RGD多肽或整合素αv基因敲低處理MRC-5可逆轉(zhuǎn)上述現(xiàn)象,導(dǎo)致蛋白表達(dá)的下調(diào)。進(jìn)一步使用外源性活化型TGF-β1處理細(xì)胞,可逆轉(zhuǎn)外源性RGD多肽或整合素αv基因敲低所導(dǎo)致的蛋白表達(dá)下調(diào),而使用外源性潛在型TGF-β1處理細(xì)胞無此作用。結(jié)論整合素αv通過與RGD序列作用激活潛在型TGF-β1,從而促進(jìn)放射性肺纖維化的發(fā)生。第三部分整合素基因單核苷酸多態(tài)性與放射性肺損傷的相關(guān)性研究目的放射治療在肺癌治療中具有重要地位。作為輻射誘導(dǎo)的正常組織并發(fā)癥,放射性肺損傷是胸部照射劑量的主要限制性因素。然而,即使放射治療的劑量學(xué)參數(shù)相同,患者發(fā)生放射性肺損傷的幾率和程度存在較大個(gè)體差異,這意味著遺傳因素可能在放射性肺損傷的發(fā)病中具有重要作用。基于前兩部分的研究,本部分將進(jìn)一步在人體水平研究整合素基因單核苷酸多態(tài)性與放射性肺損傷的相關(guān)性,并建立放射性肺損傷預(yù)測(cè)模型。方法在接受放射治療的肺癌患者人群中,應(yīng)用質(zhì)譜和一代測(cè)序技術(shù)對(duì)患者整合素基因單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行分型。應(yīng)用Cox回歸生存分析研究整合素基因型與放射性肺損傷的相關(guān)性,應(yīng)用Kaplan-Meier曲線描述聯(lián)合劑量學(xué)參數(shù)不同rs4665162基因型患者的放射性肺損傷發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和時(shí)間的函數(shù)關(guān)系。應(yīng)用免疫組織化學(xué)分析技術(shù)比較不同基因型患者整合素蛋白表達(dá)水平的差異。根據(jù)整合素基因型、劑量學(xué)參數(shù)等因素與放射性肺損傷的相關(guān)性,建立放射性肺損傷預(yù)測(cè)模型,應(yīng)用ROC曲線比較各模型的敏感度和特異性。結(jié)果Cox回歸生存分析發(fā)現(xiàn)患者年齡、照射方式、V20、MLD以及整合素rs4665162基因型與放射性肺損傷發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在相關(guān)性。rs4665162 AG/GG基因型聯(lián)合劑量學(xué)參數(shù)MLD≥13.5Gy或V20≥24.1%以及未接受IMRT的患者具有最高的放射性肺損傷發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)AG/GG基因型患者肺組織中整合素表達(dá)水平更高(p0.05)。與單純劑量學(xué)參數(shù)預(yù)測(cè)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相比,聯(lián)合患者年齡、MLD、IMRT、rs4665162基因型等因素建立的放射肺損傷預(yù)測(cè)模型ROC曲線下面積最大,即具有最好的敏感度和特異性。結(jié)論整合素rs4665162基因型與放射性肺損傷發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在相關(guān)性,聯(lián)合患者年齡、MLD、IMRT、rs4665162基因型等因素建立的放射性肺損傷預(yù)測(cè)模型具有較好的敏感度和特異性。
【圖文】：

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文結(jié)果1. ItgavloxP/-轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建如圖 1 所示，構(gòu)建得到 ItgavloxP/-轉(zhuǎn)基因小鼠。PCR 驗(yàn)證目的小鼠的基因分型：使用 mItgav_F1 和 mItgav_F1 引物的 PCR 得到的條帶中 199bp 基因型為野生型，260bp基因型為 loxP site，，可見序號(hào) 25、26、27 含有 loxP 基因片段（圖 2A）；使用 mItgav_F2和mItgav_F2引物的PCR得到的條帶中203bp基因型為野生型，343bp基因型為Frt site和 loxP site，進(jìn)一步驗(yàn)證序號(hào) 25、26、27 含有 loxP 基因片段（圖 2B）；使用 mItgav_F3和 mItgav_F3 引物的 PCR 得到的條帶中 3.3kb 基因型為 loxP site 和 Exon of Gm13684，進(jìn)一步驗(yàn)證序號(hào) 25、26、27 含有 loxP 基因片段（圖 2C）。

ftgav0"P}一轉(zhuǎn)基因小鼠PCR鑒定結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R730.55

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭玉娟;顏天華;;Non-coding RNAs在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用的研究進(jìn)展[J];藥學(xué)與臨床研究;2019年02期

2 朱丹;蒙艷麗;孫強(qiáng);王璐;王偉明;;中藥治療肺纖維化的研究進(jìn)展[J];黑龍江中醫(yī)藥;2017年05期

3 閆雷雷;閆強(qiáng)強(qiáng);曾學(xué)波;李麗麗;黃小方;;中醫(yī)藥防治肺纖維化的研究進(jìn)展及思考[J];湖北中醫(yī)雜志;2018年11期

4 秦豐;封紅;;老年特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化與肺纖維化和肺氣腫綜合征的臨床特征比較[J];中外醫(yī)療;2016年33期

5 金露;劉桂桃;;吡非尼酮抗肺纖維化作用機(jī)制的研究新進(jìn)展[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2016年A3期

6 董廣通;祁鑫;李錚;周舟;伍曉慧;侯煒;;中醫(yī)藥防治放射性肺纖維化的臨床及實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志;2017年05期

7 李夢(mèng);何振華;;硫化氫抗肺纖維化作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2016年01期

8 程序;陳小會(huì);劉橋齡;陳明良;;養(yǎng)陰通絡(luò)法與柚皮素治療肺纖維化的作用及相互關(guān)系的研究[J];健康之路;2017年02期

9 燕海霞;;走路喘促、上樓氣短,需警惕肺纖維化[J];祝您健康;2017年03期

10 魏燕華;劉桂桃;;肺纖維化的治療進(jìn)展[J];臨床肺科雜志;2014年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 朱時(shí)鈺;馬嵐;駱社丹;;肺纖維化的致病機(jī)理[A];第五屆全國(guó)解剖學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2015年

2 王星;李世彬;王詠梅;吳琦;;酒精與大鼠肺纖維化關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

3 楊乃女;嚴(yán)賴莎;陳少賢;;氟伐他汀對(duì)大鼠肺纖維化干預(yù)作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

4 張紓難;孫瑞華;;建立肺纖維化生存質(zhì)量評(píng)價(jià)體系方法初探[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編[C];2000年

5 黃山英;宋良文;;CTGF在放射性肺纖維化中的表達(dá)[A];第七屆全軍防原醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)第五屆中國(guó)毒理學(xué)會(huì)放射毒理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

6 馬永強(qiáng);姬文婕;張譯丹;胡道川;陳雪芬;周欣;魏路清;;循環(huán)單核細(xì)胞亞群在實(shí)驗(yàn)性肺纖維化小鼠中的動(dòng)態(tài)變化及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

7 劉晶晶;孟婕;肖奇明;宋成;胡成平;;小窩蛋白-1——氟非尼酮抗肺纖維化治療新靶點(diǎn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 許小毛;蒲純;孫鐵英;;老年肺纖維化和肺氣腫綜合征臨床特點(diǎn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

9 張紓難;段軍;張志遠(yuǎn);金明;崔惠娟;仝小林;;中西醫(yī)結(jié)合治療SARS所致肺纖維化療效總結(jié)及其臨床特點(diǎn)的分析[A];中醫(yī)藥防治SARS學(xué)術(shù)交流專輯[C];2003年

10 黃山英;宋良文;張勇;孫麗;尹紀(jì)業(yè);;Ⅳ型膠原和基質(zhì)金屬蛋白酶在大鼠早期肺纖維化啟動(dòng)中的作用機(jī)制[A];第六屆全國(guó)生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第九屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第五屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 劉文忠;中藥創(chuàng)新有望挽救肺纖維化患者[N];濟(jì)南日?qǐng)?bào);2019年

2 本報(bào)見習(xí)記者 韓揚(yáng)眉;肺纖維化：都是“搗蛋分子”惹的禍[N];中國(guó)科學(xué)報(bào);2019年

3 武漢協(xié)和醫(yī)院 主治醫(yī)師 黃琪;肺纖維化與肺纖維灶[N];家庭醫(yī)生報(bào);2017年

4 北京同仁醫(yī)院呼吸科主任醫(yī)師 孫永昌;治療肺纖維化 要看病因[N];健康報(bào);2012年

5 北京同仁醫(yī)院呼吸科主任醫(yī)師 孫永昌;肺纖維化:明確病因是關(guān)鍵[N];保健時(shí)報(bào);2009年

6 本報(bào)記者 王萍;董瑞讓中醫(yī)走向世界“肺纖維化”防治領(lǐng)域的前沿[N];健康報(bào);2011年

7 張紓難;中西醫(yī)結(jié)合治療SARS所致肺纖維化療效總結(jié)及其臨床特點(diǎn)分析[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

8 河北省職工醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)科 劉涓;肺纖維化尤需防感染[N];健康報(bào);2009年

9 河北 劉涓;解讀肺纖維化[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

10 彭建平;肺纖維化的防治[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李洪波;中藥肺復(fù)康抗肺纖維化作用機(jī)制及其活性成分分析[D];山東大學(xué);2019年

2 易e

本文編號(hào)：2589684