【摘要】：目的:通過內(nèi)毒素休克家兔輸注不同貯存時間紅細(xì)胞觀察其對家兔肺組織病理變化、肺表面活性蛋白A(Surfactant Protein-A,SP-A)、氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白、細(xì)胞因子表達(dá)的影響,探討不同貯存時間紅細(xì)胞對內(nèi)毒素休克家兔肺損傷的影響,綜合評價不同貯存時間紅細(xì)胞在內(nèi)毒素休克模型中的安全性及有效性。方法:選擇清潔級健康雄性新西蘭家兔74只,體重2.0~2.5kg,采用隨機數(shù)字表法將其中10只分為獻(xiàn)血組,另外64只動物分為8組(n=8):C組(空白對照組),S組(失血組),L組(內(nèi)毒素組),SL組(失血+內(nèi)毒素組),R組(失血+內(nèi)毒素+紅細(xì)胞組,以輸注的紅細(xì)胞貯存時間1d、1w、2w、3w,分為R0-R3組,共4個亞組)。S組、SL組、R組實驗開始前一天家兔稱重,各組家兔于耳中央動脈抽15%血容量的血液(血容量按體重的7%計算)。實驗開始后,各組家兔耳緣靜脈靜注3%戊巴比妥鈉1.5ml/kg麻醉,常規(guī)固定,行頸內(nèi)動脈穿刺置管并測壓。隨后L組、SL組、R組經(jīng)耳緣靜脈輸入脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)5mg/kg(溶于1ml生理鹽水),C組、S組輸入等量生理鹽水。靜注LPS 2h后L組、SL組、R組以平均動脈壓(Mean Arterial Pressure,MAP)下降≥25%、氧合指數(shù)(Oxygenation Index,OI)≤300 mmHg為模型制備成功。R組各組輸入5%血容量的貯存懸浮紅細(xì)胞,分別用貯存1d紅細(xì)胞(R0組),貯存1 w紅細(xì)胞(R1組),貯存2 w紅細(xì)胞(R2組),貯存3 w紅細(xì)胞(R3組),以及適量的乳酸鈉林格氏液維持MAP65 mmHg。C組、L組、SL組給予適量的乳酸鈉林格氏液維持MAP65mmHg。另外,分別于動脈穿刺完成靜注LPS前(T1)、靜注LPS 2h(T2)、靜注LPS 6h后(T3)三個時點檢測各組家兔血清白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)、腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor-α,tnf-α)的變化。在t3時點處死家兔,取左肺下葉做病理檢測,取右肺下葉測定濕/干重比(wet/dryratio,w/d),右肺上葉組織勻漿后檢測髓過氧化物酶(myeloperoxidase,mpo)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,sod)、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,nos)的活性以及丙二醛(malondialdehyde,mda)、sp-a含量的變化。結(jié)果:(1)與c組、s組比較,l組、sl組、r0組、r1組、r2組、r3組肺損傷評分增大(p0.05),與l組、sl組比較,r2組、r3組肺損傷評分增大(p0.05),與r0組比較,r2組、r3組肺損傷評分增大(p0.05)。(2)t2、t3時刻與c組、s組比較,l組、r0組、r1組、r2組、r3組map、oi顯著減小(p0.05)。(3)與c組、s組比較,l組、sl組、r0組、r1組、r2組、r3組w/d均顯著增大(p0.05);與l組、sl組比較,r3組w/d顯著增大(p0.05)。(4)與c組、s組比較,l組、sl組、r0組、r1組r2組、r3組mpo活性、mda含量均顯著增大(p0.05)而sod活性顯著下降(p0.05);與l組、sl組比較r1組、r2組、r3組mpo活性顯著增大、sod活性顯著減小(p0.05),r0組、r1組、r2組、r3組mda顯著增加(p0.05);與r0組比較,r2組與r3組mpo活性、mda顯著增高,sod活性顯著減小(p0.05);與r1組比較,r2組、r3組mda含量,r3組mpo活性顯著增高,sod顯著減小(p0.05);與r2組比較,r3組mda顯著增高,sod顯著減小(p0.05)。(5)與c組、s組比較,l組、r0組、r1組、r2組、r3組nos活性均顯著增大(p0.05);與l組、sl組比較,r0組、r1組、r2組、r3組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(6)與c組、s組比較,l組、r0組、r1組、r2組、r3組sp-a均顯著減少(p0.05);與l組、sl組比較,r2組、r3組均顯著減少(p0.05);r2組、r3組比r0組、r1組減少,但各r組組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。(7)t2、t3時間點,與c組、s組比較,l組、sl組、r0組、r1組、r2組、r3組tnf-α、il-1β、il-8顯著增大(p0.05);t3時間點,r3組與l組、r0組、r1組比較,il-8顯著增大(p0.05)。r3組與其他各組相比il-1β增加顯著(p0.05)。結(jié)論:(1)氧化應(yīng)激參與了內(nèi)毒素休克肺損傷的發(fā)生。(2)隨著紅細(xì)胞貯存時間的延長,會引起內(nèi)毒素休克家兔MDA、MPO增加,SOD下降,但沒有影響NOS、SP-A的生成。(3)當(dāng)發(fā)生內(nèi)毒素休克且需要輸入紅細(xì)胞時,選擇輸入貯存時間14天以內(nèi)的紅細(xì)胞為宜。
【圖文】：

圖1.6 R1組肺泡壁上可見中性粒細(xì)胞，局部肺泡壁增粗，肺泡腔受擠壓變狹窄（×400）圖1.7 肺泡間隔增寬，較多出血、滲出（×400）圖1.8 R3組肺泡腔出血幾乎充滿肺泡腔（×400）

圖1.3 L組局部肺泡壁增粗，肺泡壁上可見中性粒細(xì)胞（×400）圖1.4 SL組肺泡壁增粗，血管內(nèi)可見中性粒細(xì)胞（×400）圖1.5 R0組肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，，肺泡壁增粗（×400）圖1.6 R1組肺泡壁上可見中性粒細(xì)胞，局部肺泡壁增粗，肺泡腔受擠壓變狹窄（×400）
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R457.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 雷

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