【摘要】：目的:通過抑制NLRP3炎癥小體,觀察坐骨神經(jīng)慢性壓榨性損傷(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠機(jī)械痛敏變化,探討NLRP3炎癥小體對神經(jīng)病理性疼痛的影響及機(jī)制。方法:Sprague-Dawley雄性大鼠36只,8周齡,體重250~300 g,隨機(jī)分為4組(n=9):假手術(shù)組(control組)、慢性坐骨神經(jīng)壓榨性損傷組(CCI組)、溶劑對照組(CCI-vehicle組)和抑制劑組(CCI-MCC950組)。分別于建模前1 d、建模后1、4和7 d測定機(jī)械縮足反應(yīng)閾(MWT);CCI-vehicle組和CCI-MCC950組于建模后4d測定MWT后分別鞘內(nèi)注射等容積生理鹽水和MCC950溶液,每天1次,連續(xù)3天;于建模后7 d MWT測量后處死大鼠取L4-6脊髓組織,采用Western blot法測定脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1β蛋白表達(dá),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測定脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1及IL-1βm RNA表達(dá),采用Td T介導(dǎo)d UTP末端標(biāo)記法(Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)檢測脊髓組織凋亡細(xì)胞,采用免疫熒光雙標(biāo)法觀察脊髓組織NLRP3與GFAP共表達(dá)。結(jié)果:與control組比較,CCI組、CCI-vehicle組和CCI-MCC950組MWT顯著降低(P0.05),NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白和m RNA表達(dá)上調(diào)(P0.05),凋亡陽性細(xì)胞數(shù)升高(P0.05);與CCI組、CCI-vehicle組比較,CCI-MCC950組經(jīng)MCC950處理后MWT升高(P0.05),且脊髓組織NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白和m RNA表達(dá)下調(diào)(P0.05),凋亡陽性細(xì)胞數(shù)減少(P0.05)。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示:NLRP3蛋白主要表達(dá)于脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元胞漿。結(jié)論:NLRP3炎癥小體在神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓中活化,抑制該炎癥小體能一定程度改善CCI模型大鼠機(jī)械痛敏;NLRP3炎癥小體參與促進(jìn)大鼠神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)展,其機(jī)制可能與脊髓星型膠質(zhì)細(xì)胞活化導(dǎo)致免疫炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元凋亡有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of NLRP3 inflammatory body on neuropathic pain and its mechanism by observing the changes of mechanical pain sensitivity in rats with chronic sciatic nerve compression injury (chronic constriction injury,CCI) model by inhibiting the inflammatory body of NLRP3. Methods: Thirty-six male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups: sham operation group (control group) and chronic sciatic nerve compression injury group (CCI group). Solvent control group (CCI-vehicle group) and inhibitor group (CCI-MCC950 group). Mechanical foot contraction reaction threshold was measured 1 day before modeling, 1 day and 7 days after modeling. (MWT); CCI-vehicle group and CCI-MCC950 group were injected intrathecal normal saline and MCC950 solution respectively once a day for 3 days after MWT was measured 4 days after modeling. The L4-6 spinal cord tissue was measured by MWT 7 days after modeling. The expression of NLRP3,ASC,caspase-1 and IL-1 尾 protein in spinal cord tissue was measured by Western blot method, and NLRP3,ASC, in spinal cord tissue was measured by real-time fluorescence quantitative PCR method. The expression of caspase-1 and IL-1 尾 m RNA was detected by Td T mediated d UTP terminal labeling (Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL), and the coexpression of NLRP3 and GFAP in spinal cord tissue was observed by immunofluorescence double labeling method. Results: compared with control group, MWT in CCI group, CCI-vehicle group and CCI-MCC950 group were significantly decreased (P0.05), the expression of NLRP3,ASC,caspase-1 and IL-1 尾 protein and m RNA were up-regulated (P0.05), and the number of apoptotic positive cells was increased (P0.05). Compared with CCI group and CCI-vehicle group, MWT in CCI-MCC950 group increased after MCC950 treatment (P0.05), and the expression of NLRP3,ASC,caspase-1 and IL-1 尾 protein and m RNA in spinal cord tissue decreased (P0.05), and the number of apoptotic positive cells decreased (P0.05). Immunofluorescence double labeling results showed that NLRP3 protein was mainly expressed in spinal astrocytes and neuron cytoplasm. Conclusion: NLRP3 inflammatory corpuscles are activated in the spinal cord of rats with neuropathic pain, and the inhibition of the inflammatory bodies can improve the mechanical pain sensitivity of CCI rats to some extent. The inflammatory bodies of NLRP3 are involved in promoting the development of neuropathic pain in rats. The mechanism may be related to the immune inflammation and neuronal apoptosis caused by the activation of astrocytes in spinal cord.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R402

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本文編號：2314618