發(fā)布時(shí)間：2018-01-25 16:45

  本文關(guān)鍵詞： 膿毒癥 線粒體細(xì)胞病 膿毒癥心肌抑制 線粒體分裂融合失衡 mdivi-1 氧化呼吸鏈　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的第一部分:對感染性休克患者宏觀循環(huán)復(fù)蘇后的能量代謝障礙進(jìn)行分類,并與包括心臟在內(nèi)的器官功能障礙關(guān)系進(jìn)行研究。第二部分:研究膿毒癥時(shí)大鼠心肌線粒體分裂融合的變化情況,并探討相關(guān)分子機(jī)制。第三部分:研究調(diào)節(jié)心肌線粒體分裂融合失衡后心肌能量代謝以及功能變化。研究方法第一部分:前瞻性收集2016年10月—2017年1月重癥醫(yī)學(xué)科連續(xù)收治的完成宏觀循環(huán)復(fù)蘇并行機(jī)械通氣的感染性休克患者,行10 min-OCT檢查,抽取動(dòng)靜脈血?dú)庥?jì)算Ratio。根據(jù)10 min-OCT與Ratio水平將患者分為三組:A組(10 min-OCT66mmHg,并且 Ratio≤1.23);B 組(10min-OCT≤66mmHg);C 組(10min-OCT66mmHg,并且Ratio1.23)。記錄三組患者一般資料,完成宏觀循環(huán)復(fù)蘇時(shí)、宏觀循環(huán)復(fù)蘇24h、48h后MAP、Lac、ScvO2、累計(jì)液體平衡等血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)資料以及強(qiáng)心藥物使用情況、KIDGO評分、SOFA評分等器官功能障礙評價(jià)指標(biāo)。采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。第二部分:32只SD大鼠隨機(jī)分為4組(每組8只大鼠)包括:假手術(shù)組(SAM組)、膿毒癥2h組(CLP2h組)、膿毒癥10h組(CLP10h組)、膿毒癥18h組(CLP18h組)。SAM組于術(shù)后18h,CLP2h組、CLP10h組、CLP18h組分別于2h、10h、18h進(jìn)行開胸取心臟標(biāo)本,RT-PCR檢測Drp1、Mfn2、Opa1 mRNA水平,Western Blot檢測Drp1蛋白水平,電鏡觀察線粒體形態(tài),評估心肌線粒體分裂融合狀態(tài)。第三部分,32只SD大鼠隨機(jī)分為4組(每組8只大鼠)包括:假手術(shù)組(SAM組)、假手術(shù)加Mdivi-1組(SAM+Mdi組)、膿毒癥組(CLP組)、膿毒癥加Mdivi-1組(CLP+Mdi組)。四組大鼠手術(shù)18h后再次麻醉行心臟超聲評估心臟功能后,開胸取心臟標(biāo)本。電鏡觀察心臟線粒體形態(tài),評估心肌線粒體分裂融合狀態(tài)。檢測心肌線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ活性以及ATP水平。研究結(jié)果第一部分:共49例患者入選研究,A、B、C組分別為19、21、9例。強(qiáng)心藥物使用率B組與C組在各時(shí)點(diǎn)均高于A組(P0.05),C組強(qiáng)心藥物使用率高于B組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AKI發(fā)生率在T0時(shí)點(diǎn)三組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.114),T24h、T48h時(shí)點(diǎn) C 組 AKI 發(fā)生率高于 A 組(P=0.038),AKI 加重率C組高于A組與B組(P0.05)。SOFA評分C組各時(shí)點(diǎn)均高于A組(P0.05),C組ΔSOFA評分在T24h時(shí)點(diǎn)高于A組與B組(P0.05)。在Kaplan-Meier生存分析中,C組死亡率高于A組與B組(P0.05)。Ratio預(yù)測復(fù)蘇后24h SOFA評分增加≥1的ROC曲線AUC面積為0.766。第二部分:CLP2h組心肌線粒體形態(tài)與SAM組比較無明顯變化,CLP10h組、CLP18h組長管狀線粒體明顯減少,圓球狀線粒體明顯增加,出現(xiàn)分裂融合失衡,形態(tài)構(gòu)成比與SAM組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CLP10h組、CLP18h組分裂蛋白 Drp1mRNA 水平高于 SAM 組(P0.05);CLP2h組、CLP10h組、CLP18h組融合蛋白Mfn2與OPA1 mRNA水平高于SAM組(P0.05)。CLP2h組Drp1蛋白水平與SAM組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.543);CLP10h組、CLP18h組高于SAM組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第三部分:CLP組線粒體形態(tài)構(gòu)成比與SAM組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CLP+Mdi組線粒體形態(tài)構(gòu)成比與CLP組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CLP組復(fù)合體Ⅳ活性與ATP水平低于SAM組(P0.05),CLP+Mdi組復(fù)合體Ⅳ活性與ATP水平高于CLP組(P0.05)。心臟超聲結(jié)果顯示,CLP組LVEF、SV 低 SAM 組(P0.05),CLP+Mdi 組 LVEF、SV 高于 CLP 組(P0.05)。結(jié)論第一部分:1.10 min-OCT聯(lián)合Ratio應(yīng)用可以對感染性休克患者復(fù)蘇后組織細(xì)胞能量代謝障礙進(jìn)行分類。2.感染性休克患者宏觀與微循環(huán)灌注恢復(fù)后部分患者仍存在無氧代謝,并且提示器官功能障礙進(jìn)行性加重,預(yù)后不良。3.感染性休克患者合并細(xì)胞氧利用障礙,心、腎較呼吸功能障礙表現(xiàn)更重,提示等線粒體含量豐富器官功能障礙與組織細(xì)胞氧利用異常相關(guān)。4.Ratio對于感染性休克患者復(fù)蘇后器官功能障礙進(jìn)展具有較好預(yù)測價(jià)值。第二部分:1.持續(xù)存在的過度分裂是CLP膿毒癥大鼠心肌線粒體分裂融合失衡的特征性改變。2.Drp1蛋白表達(dá)增加與膿毒癥心肌線粒體持續(xù)過度分裂相關(guān)。第三部分:1.持續(xù)存在的線粒體過度分裂是與氧化呼吸功能異常相關(guān),是膿毒癥心肌抑制發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制。2.避免線粒體過度分裂是膿毒癥心肌抑制干預(yù)治療的新靶點(diǎn)。3.Mdivi-1可以糾正CLP膿毒癥大鼠心肌線粒體過度分裂,保護(hù)心臟功能。
[Abstract]:Objective to study the first part: the classification of energy metabolism in patients with septic shock after resuscitation and macro cycle, and research including the heart organ dysfunction relationship. The second part: To investigate the changes of sepsis in rat myocardial mitochondria fission and fusion, and to explore the related molecular mechanism. The third part: the research on the regulation of myocardial mitochondria fission and fusion of myocardial energy metabolism and function changes after imbalance. The method of the first part: Prospectively collected from October 2016 to January 2017 in ICU from macro cycle recovery parallel mechanical ventilation in patients with septic shock, 10 underwent min-OCT examination, extraction of venous blood gas were calculated according to Ratio. 10 min-OCT and Ratio levels in the patients were divided into three groups group A (10 min-OCT66mmHg, Ratio and less than or equal to 1.23); group B (10min-OCT = 66mmHg); group C (10min-OCT66mmHg and Ratio1.23) . record the general data of the three groups of patients, to complete the macro cycle recovery, macro cycle recovery after 48h 24h, MAP, Lac, ScvO2, cumulative fluid balance and other hemodynamic parameters and cardiac drugs using KIDGO score, SOFA score and organ dysfunction index. Statistical analysis was performed using SPSS 19 software. The second part: 32 SD rats were randomly divided into 4 groups (8 rats in each group): sham operation group (group SAM), sepsis group (2H group CLP2h), sepsis group (10h group CLP10h), sepsis group (18h group CLP18h).SAM group after 18h, CLP2h group, CLP10h group, CLP18h group were 2H, 10h, 18h of thoracic heart samples were collected, RT-PCR Mfn2, Opa1 mRNA detection of Drp1, Western, Blot to detect the protein level of Drp1, to observe the morphology of mitochondria electron microscope, assessment of myocardial mitochondrial fission and fusion. The third part, 32 SD rats were randomly divided into 4 groups (8 rats in each group) including: 鍋囨墜鏈粍(SAM緇，

本文編號：1463223