本文關(guān)鍵詞：高齲無齲兒童牙菌斑生物膜微生物的DNA微陣列分析和發(fā)育樹構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《遵義醫(yī)學(xué)院》 2010年

高齲無齲兒童牙菌斑生物膜微生物的DNA微陣列分析和發(fā)育樹構(gòu)建

辛秉昌  

【摘要】： 齲病是危害人類口腔健康最常見的疾病之一。在我國該病患病率較高,且呈上升趨勢,因此如何有效地預(yù)測和預(yù)防該病的發(fā)生是我國齲病防治工作的重要課題之一。然而,目前對(duì)齲病病因的認(rèn)識(shí)還很局限,安全高效的生物防齲措施進(jìn)展緩慢。齲病發(fā)生在牙體硬組織表面的菌斑微生態(tài)環(huán)境中,最新的菌斑生態(tài)學(xué)說認(rèn)為,牙菌斑中的微生物是人類口腔正常菌群,正常情況下菌叢間的組成處于動(dòng)態(tài)平衡,當(dāng)這一平衡受到環(huán)境變化的擾亂時(shí),口腔微生態(tài)失調(diào),具有產(chǎn)酸耐酸特性的潛在致齲菌數(shù)量增多或(和)毒力增強(qiáng),非致齲性菌斑轉(zhuǎn)變?yōu)橹慢x性菌斑,產(chǎn)生大量致病物質(zhì),導(dǎo)致齲病的發(fā)生。人類口腔中已檢出700多種細(xì)菌,一半以上尚未能培養(yǎng),而對(duì)于口腔微生物群落組成多樣性的研究,多局限于幾種已知致齲菌,尚缺乏對(duì)牙菌斑生物膜致齲機(jī)理的全面性認(rèn)識(shí)。 目的：本研究使用人類口腔微生物芯片(The Human Oral Microbe Identification Microarray, HOMIM)從種、系、型水平對(duì)高齲和無齲兒童牙菌斑中微生物細(xì)菌群類進(jìn)行檢測,比較高齲和無齲兒童牙菌斑微生物的定植情況及數(shù)量的多樣性改變；并構(gòu)建口腔細(xì)菌系統(tǒng)發(fā)育樹,了解細(xì)菌之間的進(jìn)化關(guān)系,以全面認(rèn)識(shí)菌斑微生物與齲病發(fā)生的關(guān)系。 方法：牙菌斑樣本分別取自20名高齲兒童和20名無齲兒童的第一恒磨牙,提取混合菌斑總DNA,進(jìn)行16S rRNA特異性序列片段PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物經(jīng)熒光素Cy3-dCTP標(biāo)記后與基于16SrRNA寡核苷酸探針?biāo)苽涞腍OMIM雜交,專用軟件處理數(shù)據(jù),使用聚類分析、兩獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)及卡方檢驗(yàn)等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。利用ClustalX和MEGA軟件程序分析所有檢出細(xì)菌的16S rRNA基因序列,構(gòu)建口腔細(xì)菌系統(tǒng)發(fā)育樹。 結(jié)果：(1)高齲組和無齲組各20名受試者第一恒磨牙菌斑樣本中共檢測到123個(gè)微生物種型或類群,分別歸屬于9個(gè)門類,43個(gè)屬類。高齲組每一個(gè)體菌斑樣本中微生物種型或類群的數(shù)量范圍較高：45至79種(中位數(shù)為53.5)；無齲組較低：37至69種(中位數(shù)為51),但在本實(shí)驗(yàn)樣本范圍內(nèi)兩組細(xì)菌群類多樣性無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)一些細(xì)菌在高齲組中的檢出率或數(shù)量高于無齲組,如鏈球菌屬(Streptococcus australis_ot073、Streptococcus oralis/sp clones C5MLM037/EK048_ot064_707)、月形單胞菌屬(Selenomonas sp clones DS071_ot138)、顆粒鏈菌屬(Granulicatella elegans_ot596)、奈瑟菌屬(Neisseria gonorrhoeae/polysaccharea_ot621_737)、嗜血菌屬(Haemophilus sp clone BJ095_ot036、Haemophilus parainfluenzae ot718)(P0.05);另有一些細(xì)菌在無齲組中的檢出率或數(shù)量高于高齲組,如Solobacterium菌屬(Solobacterium moorei_ot678)、二氧化碳嗜纖維菌屬(Capnocytophaga sp clone DS022_ot332、Capnocytophaga sp. oral strain S3_ot337、Capnocytophaga granulose_ot325)(P0.05)。(3)變異鏈球菌僅在無齲組中檢出1例,乳桿菌僅在高齲組中檢出1例,遠(yuǎn)緣鏈球菌和唾液鏈球菌在高齲和無齲組中均無檢出。(4)在國內(nèi)首次基于DNA微陣列實(shí)驗(yàn)中檢出細(xì)菌的16S rRNA基因序列構(gòu)建較大規(guī)模的系統(tǒng)發(fā)育樹。 結(jié)論：從生物膜微生態(tài)整體結(jié)構(gòu)上認(rèn)識(shí)菌斑微生物與齲病發(fā)生的關(guān)系,可能人類口腔中存在“核心微生物組”,生物膜中的多種細(xì)菌參與了齲病的發(fā)生(如月形單胞菌、苛氧顆粒鏈菌、奈瑟菌、嗜血菌),可不需要大量變異鏈球菌、乳桿菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌等公認(rèn)致齲菌定植,齲病的發(fā)生是生物膜中多種細(xì)菌共同作用的結(jié)果,支持菌斑微生態(tài)學(xué)說。系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建可作為研究口腔微生物多樣性及其親緣關(guān)系的有利工具。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R788.1
【目錄】：

英漢縮略詞對(duì)照表5-6

中文摘要6-8

英文摘要8-11

前言11-17

材料與方法17-30

結(jié)果30-50

討論50-67

全文總結(jié)67-68

參考文獻(xiàn)68-77

綜述77-99

致謝99

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【引證文獻(xiàn)】

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【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)引證文獻(xiàn)】

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