本文關(guān)鍵詞：靜電紡PBS納米纖維膜及緩釋血小板內(nèi)生長(zhǎng)因子的PBS納米纖維膜的制備及生物活性評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《吉林大學(xué)》 2012年

靜電紡PBS納米纖維膜及緩釋血小板內(nèi)生長(zhǎng)因子的PBS納米纖維膜的制備及生物活性評(píng)價(jià)

孫淑芬  

【摘要】：在口腔臨床工作中，經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)有牙槽骨質(zhì)的缺損，例如，慢性根尖周炎、牙周炎及牙齒拔除所引起的骨缺損，骨缺損不僅影響到牙齒的功能，也影響義齒的修復(fù)及種植。 人們采用許多方法促進(jìn)牙槽骨形成，其中植入具有骨引導(dǎo)作用的生物材料和具有骨誘導(dǎo)作用的生長(zhǎng)因子的方法，因其無(wú)創(chuàng)傷、效果穩(wěn)定已經(jīng)逐漸成為一種發(fā)展趨勢(shì)。富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）和第2代血小板濃縮品富血小板纖維蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)內(nèi)含有大量高濃度的細(xì)胞生長(zhǎng)因子，這些生長(zhǎng)因子參與損傷愈合的過程，尤其是在骨再生中起重要作用。它們?cè)诟髯园l(fā)揮作用的同時(shí)，又相互促進(jìn)、協(xié)作、調(diào)控，構(gòu)成了一個(gè)具有組織修復(fù)功能的調(diào)節(jié)系統(tǒng)，可以促進(jìn)組織愈合，調(diào)節(jié)炎癥和抗感染。 然而，PRP及PRF的臨床效果仍存有爭(zhēng)議，出現(xiàn)許多相反的研究結(jié)果。有許多研究表明PRP及PRF的效果并不理想。研究發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)因子的活性維持時(shí)間較短，不能滿足成骨時(shí)間上的要求。因此，要保持生長(zhǎng)因子的持續(xù)釋放，就需要一種合適的支架材料。 在成骨研究中有機(jī)高分子支架材料是研究熱點(diǎn)之一，理想的支架材料應(yīng)容易負(fù)載生長(zhǎng)因子并具有緩釋效果，既能保護(hù)生長(zhǎng)因子的生物活性，又可以維持生長(zhǎng)因子緩慢釋放，從而持續(xù)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)及組織修復(fù)再生。聚丁二酸丁二醇酯[poly（butylene succinate），PBS]是一種生物可降解脂肪族聚酯，具有良好的細(xì)胞和組織相容性，完全的生物降解性、可被多種微生物或動(dòng)植物體內(nèi)的酶分解、最終代謝分解為二氧化碳和水，PBS作為潛在的生物醫(yī)用高分子材料，其應(yīng)用研究受到廣泛關(guān)注。 納米纖維因具有比表面積高及多孔結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，在藥物控釋、人工皮膚、創(chuàng)傷愈合、牙齒增強(qiáng)等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都有應(yīng)用。近年來(lái)，采用靜電紡絲制備聚合物的納米纖維已經(jīng)被應(yīng)用到骨組織工程領(lǐng)域。 靜電紡絲法制備PBS納米纖維已有報(bào)道，但研究多集中在紡絲條件、紡絲參數(shù)、力學(xué)性能、熱性能及改性等方面。對(duì)其作為骨替代材料的基礎(chǔ)性研究卻鮮見報(bào)道。用靜電紡絲法將加入PRP的PBS制備成納米纖維及其對(duì)成骨細(xì)胞的影響還未見報(bào)道。 本文采用靜電紡絲法制備了PBS納米纖維膜、PBS和PRP的混合納米纖維膜(PBS/Platelet)。探討兩種支架材料的表面性質(zhì)、親水性、拉伸強(qiáng)度及對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞系MG63細(xì)胞增殖、分化的影響，用real-time PCR法檢測(cè)了成骨相關(guān)基因并用Western Blot檢測(cè)了成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)。 1PBS和PBS/Platelet納米纖維膜的制備及表征 目的：探討PBS紡絲最佳濃度及工藝參數(shù)，，PRP加入PBS溶液進(jìn)行靜電紡絲的可行性。探討兩種支架材料的表征、親水性、拉伸強(qiáng)度。 方法：以氯仿為溶劑溶解PBS進(jìn)行靜電紡絲。PRP加入PBS氯仿溶液中，超聲振蕩制備成乳液紡絲。通過掃描電鏡觀察材料表面，進(jìn)行親水性及拉伸強(qiáng)度的力學(xué)測(cè)試。 結(jié)果：所得纖維膜肉眼觀察：質(zhì)地均勻，彈性良好。在電子顯微鏡下，PBS納米纖維的直徑約在200~900nm之間，孔隙多，彼此交通；PBS/Platelet納米纖維膜與PBS納米纖維膜紡絲效果相似，PBS/Platelet納米纖維的直徑約在100~1000nm。PBS的的親水角是68.81°±0.3°。說(shuō)明材料親水性尚可。纖維膜的拉伸強(qiáng)度分布在2.04±0.65~2.25±0.72(MPa)，斷裂伸長(zhǎng)率在284.5±17.41~297.53±25.13(%)。加入PRP納米纖維的彈性模量降低，斷裂伸長(zhǎng)率稍有增加。 2納米纖維膜體外降解及PBS/Platelet納米纖維膜的體外釋放 目的：了解材料的體外降解能力及材料內(nèi)生長(zhǎng)因子的釋放特點(diǎn)。 方法：體外將材料放置于緩沖液PBS中，連續(xù)12周觀察材料體外降解能力；血小板中含有大量的生長(zhǎng)因子，PDGF是重要的生長(zhǎng)因子之一。通過ELISA檢測(cè)了PDGF體外釋放量及持續(xù)時(shí)間，反映材料體外釋放情況。 結(jié)果：PBS/Platelet納米纖維膜前3周代謝稍快，以后達(dá)到線性代謝模式，在12周末失重達(dá)到23.80%；單純PBS納米纖維降解緩慢，到12周末的失重率為5.20%。 在釋放實(shí)驗(yàn)中，第1天PDGF釋放最為明顯，釋放濃度達(dá)58.8%，有明顯突釋現(xiàn)象。第2周達(dá)66.1%；到第7周達(dá)72.4%。這說(shuō)明負(fù)載血小板的PBS支架材料在最初的突釋之后能維持局部的細(xì)胞因子濃度，具有一定的緩釋作用。如何達(dá)到理想的控釋，還需進(jìn)一步研究。 3PBS納米纖維膜和PBS/Platelet纖維膜對(duì)MG63增殖和分化的影響 目的：以人成骨樣細(xì)胞MG63細(xì)胞為成骨細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)支架材料對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，了解材料在成骨方面的作用。 方法：MG63常規(guī)培養(yǎng)，接種于細(xì)胞培養(yǎng)板，通過材料溶血行為，支架材料表面細(xì)胞熒光染色，MTT、ALP活性等檢測(cè)手段綜合評(píng)價(jià)納米纖維支架材料的溶血性及生物活性。 結(jié)果：支架材料溶血率為0.1475％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的5％，說(shuō)明支架材料是安全的，無(wú)急性溶血活性。支架材料對(duì)成骨細(xì)胞增殖有一定的促進(jìn)作用。 4PBS和PBS/Platelet納米纖維膜對(duì)MG63成骨相關(guān)基因及蛋白的影響 目的：以人成骨樣細(xì)胞MG63細(xì)胞為成骨細(xì)胞模型，探討支架材料對(duì)成骨相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響。 方法：MG63常規(guī)培養(yǎng)，接種于材料表面，分別于1、3、5天終止培養(yǎng)，消化細(xì)胞，提取RNA和蛋白。用Real-time PCR方法檢測(cè)了Runx2，COL1α1，OPN基因的表達(dá)及并用Western Blot的方法檢測(cè)OPN、SP7蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：Real-time PCR結(jié)果顯示，MG63細(xì)胞內(nèi)Runx2基因的表達(dá)：第1天空白組明顯高于PBS支架材料和PBS/Platelet支架組；第5天空白組的表達(dá)很低，PBS組和PBS/Platelet組的表達(dá)明顯高于空白組，從第1天到第5天空白組的基因表達(dá)持續(xù)降低；MG63細(xì)胞內(nèi)COL1α1基因的表達(dá)：第1、第3天表達(dá)量不高，組間無(wú)顯著性差異，第5天空白組的表達(dá)明顯高于第1、3天，PBS組和PBS/Platelet組的表達(dá)又明顯高于空白支架組；MG63細(xì)胞內(nèi)OPN基因的表達(dá)：在第1天空白組顯著高于PBS組和PBS/Platelet支架組，第5天，PBS組和PBS/Platelet組的表達(dá)明顯高于空白組。 Western Blot的檢測(cè)結(jié)果顯示：SP7的蛋白表達(dá)量，第1天組間無(wú)顯著性差異；第3天及第5天PBS組及PBS/Platelet組顯著高于空白組。第5天PBS/Platelet組顯著高于PBS組。第1、3、5天空白組的表達(dá)呈下降趨勢(shì)。 OPN的蛋白表達(dá)量，第1、3、5天，空白組的表達(dá)呈逐漸下降趨勢(shì)。而PBS/Platelet組呈逐漸增高趨勢(shì)。第1天PBS組表達(dá)最低，而PBS/Platelet組與其有顯著性差異。第3天PBS組和PBS/Platelet組與空白組有顯著性差異。第5天PBS組和PBS/Platelet組與空白組有顯著性差異，PBS/Platelet組與PBS組有顯著性差異。 綜上所述，PBS在適當(dāng)濃度和條件可制備成納米纖維，并成功載入血小板血漿。PBS納米纖維本身及PBS/Platelet納米纖維對(duì)成骨細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用�？纱龠M(jìn)成骨相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)。本研究為PBS作為骨支架材料進(jìn)行初步探討；為PRP及PRF的臨床應(yīng)用尋找更有效的方法。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R78
【目錄】：

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4 李洪鵬,許建中;動(dòng)力性三維培養(yǎng)大尺寸組織工程骨的方法學(xué)研究[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年35期

5 耿燕麗;阮孜煒;李東旭;;骨組織工程支架材料的研究進(jìn)展[J];材料導(dǎo)報(bào);2004年11期

6 鄧春富,譚學(xué)新,周青,黃紹輝,王玉新;兩種支架材料與頜下腺細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)的比較研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年05期

7 何創(chuàng)龍,黃爭(zhēng)鳴,張彥中,劉玲,韓曉建,魯亞南;靜電紡絲法制備組織工程納/微米纖維支架[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2005年10期

8 蘭學(xué)文;楊志;;組織工程化神經(jīng)研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年06期

9 王瑞;趙建寧;吳蘇稼;;關(guān)節(jié)軟骨組織工程修復(fù)的支架材料[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2006年06期

10 徐忠華;吳清玉;;血管組織工程的研究進(jìn)展[J];國(guó)際外科學(xué)雜志;2006年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 魏迪;孫彬;邢彬;高潔;王連永;孔德領(lǐng);俞耀庭;;PLGA、明膠共紡支架促進(jìn)細(xì)胞向材料內(nèi)部生長(zhǎng)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2008年年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程與臨床論壇論文集[C];2008年

2 匡世軍;張志光;何一青;蘇凱;;兔顳下頜關(guān)節(jié)盤纖維軟骨細(xì)胞與聚乳酸支架材料復(fù)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[A];第七次全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)研討會(huì)暨《顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病及口頜面疼痛的基礎(chǔ)與臨床進(jìn)展》國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2008年

3 張亞;王曉東;;細(xì)胞復(fù)合型絲素支架材料修復(fù)兔橈骨骨缺損[A];蘇州市自然科學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文匯編(2008-2009)[C];2010年

4 黃慶聰;;碗扣腳手架在現(xiàn)澆混凝土連續(xù)箱梁施工中的應(yīng)用[A];中國(guó)公路學(xué)會(huì)橋梁和結(jié)構(gòu)工程學(xué)會(huì)2002年全國(guó)橋梁學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2002年

5 秦勝男;陳鴻輝;楊小紅;葉春婷;康寧;譚見容;戴麗冰;梁偉國(guó);;組織工程膠原海綿支架材料的制備及孔徑結(jié)構(gòu)分析[A];第七屆全國(guó)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

6 吳彬杉;韓冬霏;秦斌;田天;張倩;;三維多孔支架材料及致孔相關(guān)性[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第六次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

7 任杰;;組織工程用支架材料研究進(jìn)展[A];2005年上海市醫(yī)用生物材料研討會(huì)論文匯編[C];2005年

8 朱曉海;江華;袁湘斌;趙耀忠;章建林;孫美慶;張盈帆;張文俊;林子豪;;1993～2006年間277例耳廓再造手術(shù)體會(huì)[A];第四屆華東六省一市整形外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2007年浙江省整形、美容學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

9 閆福華;劉崇武;周廣東;崔磊;劉偉;曹誼林;;骨髓基質(zhì)細(xì)胞在三種可吸收生物膜上附著及增殖的比較研究[A];第一屆《組織工程在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用》研習(xí)班講義[C];2002年

10 張其清;劉玲蓉;王萌;;膠原組織工程支架材料的生物改性研究[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第六次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王世煥 韓富明;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者　白毅;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 鄒爭(zhēng)春　劉蘋;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

4 吳一福;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

5 馬艷紅;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

6 韓富明 蘇玉軍 楊月清;[N];陜西日?qǐng)?bào);2004年

7 記者　蔣升陽(yáng);[N];人民日?qǐng)?bào);2006年

8 本報(bào)記者 馬凌霜;[N];廣東科技報(bào);2011年

9 本報(bào)記者 唐聞佳;[N];文匯報(bào);2011年

10 謝秉源 周去非 王瑛慧;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王奎重;低孔率血流導(dǎo)向支架治療兔囊狀寬頸動(dòng)脈瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 黃博;Ⅱ型膠原/透明質(zhì)酸/6-硫酸軟骨素組織工程髓核支架材料的體內(nèi)外生物學(xué)性能研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 陶凱;烏賊骨轉(zhuǎn)化羥基磷灰石材料（CBHA）的制備及其作為骨組織工程支架材料的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 賀慧霞;牙髓干細(xì)胞分離鑒定及其制備組織工程化牙本質(zhì)牙髓復(fù)合體的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 徐佳;纖維組織工程支架的制備及性能研究[D];吉林大學(xué);2009年

6 王敏;人脂肪干細(xì)胞在PLGA支架上向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

7 張勇;生長(zhǎng)分化因子-5誘導(dǎo)人脂肪基質(zhì)細(xì)胞成骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

8 吳超;可降解鐵支架可行性的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

9 張凌漢;多孔羥基磷灰石支架材料的制備及其材料學(xué)特性和生物學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 周圣華;早期支架內(nèi)血栓的危險(xiǎn)因素分析及相關(guān)預(yù)防措施評(píng)價(jià)[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張琦輝;顱骨缺損生物性修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];汕頭大學(xué);2005年

2 丑修建;組織工程復(fù)相（羥基磷灰石+β-磷酸三鈣）多孔陶瓷支架材料的制備研究[D];昆明理工大學(xué);2005年

3 常秀梅;組織工程方法構(gòu)建牙周組織的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 田奇;膀胱移行上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其支架復(fù)合物的制備[D];吉林大學(xué);2007年

5 李瀟;DSCT對(duì)冠狀動(dòng)脈支架植入術(shù)后的評(píng)價(jià)[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

6 胡順鵬;新型膠原真皮支架材料的制備與性能表征[D];山東大學(xué);2010年

7 張善濤;兔皮質(zhì)骨來(lái)源成骨細(xì)胞與三種支架材料的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2010年

8 劉揚(yáng);組織工程化構(gòu)建骨支架材料—無(wú)機(jī)活性元素支架材料的機(jī)械強(qiáng)度的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

9 劉靖祎;無(wú)機(jī)活性元素支架材料對(duì)表皮細(xì)胞的生物誘導(dǎo)作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

10 李程;仿生多層骨軟骨支架材料的制備[D];中國(guó)地質(zhì)大學(xué)(北京);2012年

  本文關(guān)鍵詞：靜電紡PBS納米纖維膜及緩釋血小板內(nèi)生長(zhǎng)因子的PBS納米纖維膜的制備及生物活性評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：119772