【摘要】：研究背景:急性髓細胞白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)是一種惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病,成人中最常見的急性白血病類型之一。目前常用于AML的治療方法為聯(lián)合化療和造血干細胞移植,但傳統(tǒng)方法不僅具有明顯的副作用,而且不能有效改善患者的5年以上生存率和完全緩解率,因此開發(fā)新的治療方法迫在眉睫。過去20多年里,大量文獻報道,白血病干細胞(Leukemia Stem Cells,LSCs)是AML發(fā)病和耐藥的根源。由于LSCs是由正常造血干細胞(Hematopoietic Stem Cells,HSCs)衍變而來,所以和HSCs有著許多相似的生物學特性和表型。LSCs在體內(nèi)具有維持自我更新和處于靜止期的特點,是其能夠躲避化療藥物的殺傷,發(fā)生耐藥性的重要起因。從AML患者樣本分離出原代CD34~+CD38~-細胞群,進行異種移植實驗,該群細胞在小鼠體內(nèi)有很強的定植能力,證明LSCs和正常HSCs具有相似的免疫表型,但也為白血病的靶向治療研究提供了難題。因此,有必要尋找出LSCs表面特異性標記,探索出能靶向殺傷LSCs而不損害HSCs的治療方法。我們從大量臨床樣本中篩選出免疫球蛋白CD96在AML患者樣本中高表達但在正常骨髓HSCs中低表達,根據(jù)CD96表達特點可進一步探究其能否成為AML靶向治療的有效靶點。研究目的:研究CD96在AML發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制。研究方法:利用TCGA、GSE24395數(shù)據(jù)庫分析CD96表達與AML患者生存率之間的關(guān)系。設(shè)計shRNAs(shScramble、shCD96)構(gòu)建慢病毒載體,轉(zhuǎn)染至包裝細胞293T使其產(chǎn)生慢病毒;慢病毒轉(zhuǎn)染至U937和THP-1等AML細胞系,敲降CD96表達。轉(zhuǎn)染后利用流式細胞儀分選出GFP陽性(GFP~+)的細胞。利用細胞計數(shù)方法計算GFP~+shScramble組和GFP~+shCD96組不同時間點的細胞數(shù)目,繪制細胞生長曲線;細胞克隆實驗檢測細胞克隆形成能力;細胞表面分化抗原抗體免疫染色法檢測GFP~+shScramble組和GFP~+shCD96組細胞分化水平;瑞式-吉母薩染色檢測GFP~+shScramble組和GFP~+shCD96組細胞向粒系-單核細胞的分化。分別將分選得到的GFP~+shScramble組和GFP~+shCD96組細胞通過小鼠眼窩靜脈叢移植,15天后解剖小鼠,稱量肝臟和脾臟質(zhì)量,提取外周血、骨髓、肝臟和脾臟細胞,檢測GFP~+細胞在小鼠外周血、骨髓、肝臟、脾臟等組織的定植情況。研究結(jié)果:通過數(shù)據(jù)庫分析,與正常HSCs相比,CD96在AML患者LSCs中表達高出10倍左右。同時,CD96在AML各亞型中均有所表達,尤其在AML-M4和AML-M5亞型中表達量較高。利用shRNA敲降CD96,與GFP~+shScramble組細胞相比,GFP~+shCD96組細胞增殖率明顯下降,細胞克隆數(shù)目減少,THP-1細胞CD11b抗原表達量升高,U937細胞CD19表達量上升。瑞式-吉母薩染色結(jié)果顯示,GFP~+shCD96組細胞有向單核細胞-粒細胞形態(tài)學的轉(zhuǎn)變。小鼠異種移植實驗結(jié)果顯示,GFP~+shScramble組小鼠肝臟、脾臟質(zhì)量明顯大于GFP~+shCD96組,且肝臟中GFP~+細胞百分率shCD96組比對照組shScramble明顯降低。結(jié)論:CD96在AML患者中高表達,并在AML各亞型患者中表達具有普遍性,并且影響AML細胞增殖速率。CD96參與維持AML細胞的不完全分化狀態(tài),調(diào)控AML細胞在小鼠體內(nèi)的定植。CD96可以作為AML靶向治療的一個潛在靶標。
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R733.71

【參考文獻】

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1 滕曰;任毅;孫璐璐;;庫存物資倉儲管理系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[J];價值工程;2015年26期

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3 鄭均輝;甘泉;;基于RFID的智能倉儲管理系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[J];電子設(shè)計工程;2014年13期

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9 孫丹,宋瀚濤;無線實時倉儲管理系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[J];計算機工程與應用;2002年12期

10 周南,馬云龍;基于B/S模式的倉儲管理信息系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[J];中國農(nóng)業(yè)大學學報;2002年02期

本文編號：2762023