目的構(gòu)建用于轉(zhuǎn)化變形鏈球菌的 luxS 基因缺失的同源重組克隆載體。方法利用哈氏弧菌（Vibrio harveyi）BB170作為報告菌株,對變形鏈球菌在不同生長時期誘導(dǎo)生物發(fā)光的能力進行測定,然后分別 PCR 擴增變鏈菌 luxS 基因上下游片段及質(zhì)粒 PJT10的紅霉素抗性基因片段,采用分子克隆技術(shù)將基因片段依次雙酶切后連接入載體 pUC19,構(gòu)建 luxS 基因缺失的重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 DH5α感受態(tài)細胞經(jīng)篩選后,抽提重組質(zhì)粒,進行酶切鑒定。結(jié)果變鏈菌國際標準株可誘導(dǎo)哈氏弧菌 BB170的生物發(fā)光現(xiàn)象,提示變鏈菌中存在 AI-2數(shù)量感應(yīng)通路。構(gòu)建的重組質(zhì)粒pUCluxKO 經(jīng) PstI-BamHI 雙酶切,產(chǎn)物電泳在大約1000 bp 和5000 bp 處各見一條特異條帶;經(jīng)BamHI-KpnI 雙酶切,產(chǎn)物電泳在大約1500 bp 和4500 bp 處各見一條特異條帶;經(jīng) KpnI-EcoRI 雙酶切后,產(chǎn)物電泳在大約1000 bp 和5000 bp 處各見一條特異條帶。結(jié)論變鏈菌 luxS 基因同源重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,為進一步通過同源重組法構(gòu)建變鏈菌 luxS 基因缺陷株... 

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