【背景】抗菌藥的過度使用引起細(xì)菌耐藥性日益嚴(yán)重,作為重要的食源性致病菌,副溶血性弧菌也表現(xiàn)出一定程度的耐藥性。群體感應(yīng)系統(tǒng)可以調(diào)控細(xì)菌的耐藥性,為研究副溶血性弧菌的耐藥機制和控制技術(shù)提供新的途徑�！灸康摹刻接懭后w感應(yīng)信號分子AI-2 （autoinducer-2）對海產(chǎn)品中分離的副溶血性弧菌四環(huán)素耐藥性的調(diào)控作用。【方法】通過原核表達(dá)制備AI-2合成關(guān)鍵酶——S-核糖同型半胱氨酸酶（S-ribosylhomocysteinase, LuxS）和S-腺苷同型半胱氨酸核苷酶（S-adenosylhomocysteinenucleosidase,Pfs）,體外合成AI-2,通過菌落計數(shù)法分析AI-2對副溶血性弧菌在四環(huán)素亞抑菌濃度下耐受性的影響,采用逆轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR法測定不同濃度AI-2對副溶血性弧菌四環(huán)素耐藥基因轉(zhuǎn)錄水平的影響�！窘Y(jié)果】通過原核表達(dá)獲得LuxS和Pfs,作用于底物S-腺苷同型半胱氨酸能合成具有生物活性的AI-2,其熒光強度約為陽性對照的6倍。在四環(huán)素亞抑菌濃度下,AI-2能顯著促進(jìn)副溶血性弧菌的生長,6、15、30μmol/L濃度AI-2能不同程度地提高副溶血性弧菌... 

【文章來源】：微生物學(xué)通報. 2020,47(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

重組LuxS和Pfs的純化

體外合成AI-2的活性

測定了0、10、20、40、60、80、100μmol/L濃度的同型半胱氨酸分別與Ellman’s試劑反應(yīng)后的吸光值，繪制了用于計算AI-2濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)。純化的LuxS和Pfs蛋白作用于SAH底物的反應(yīng)液經(jīng)超濾后，測得濃度約為330μmol/L，用V.harveyi BB170檢測到反應(yīng)液的活性約為陽性對照的6倍，表明合成了具有生物學(xué)活性的AI-2(圖4)。圖2 重組LuxS和Pfs的純化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3609996