本研究以雞新城疫、禽流感（H9亞型）二聯(lián)滅活疫苗（LaSota株+HP株）生產(chǎn)過程中的關鍵環(huán)節(jié),如病毒繁殖、抗原濃縮、滅活、乳化等為研究對象,探討上述生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制要點,為完善該二聯(lián)苗生產(chǎn)提供數(shù)據(jù)借鑒和科學依據(jù)。1、病毒繁殖:新城疫病毒（La Sota株）及禽流感病毒（H9亞型HP株）分別接毒雞胚后,檢測不同培養(yǎng)時間段病毒的的效價。結(jié)果表明新城疫的最佳培養(yǎng)時間為96h,-15℃保存不宜超過3個月,流感的最佳培養(yǎng)時間為96h,-15℃保存不宜超過2個月。2、超濾濃縮:新城疫、禽流感兩種抗原濃縮不同倍數(shù)后,對比病毒含量、血凝價以及免疫效果,根據(jù)試驗數(shù)據(jù)并結(jié)合生產(chǎn)實際,篩選出了新城疫、禽流感最適的濃縮倍數(shù)均為2倍3、滅活劑濃度與滅活時間:對比了不同濃度甲醛、不同滅活時間對新城疫和禽流感病毒滅活效果,結(jié)果表明上述兩種抗原用甲醛溶液最適滅活濃度均為0.1%,最佳滅活時間分別為16h和18h。4、乳化試驗:通過乳化時間、乳化速度進行對比,篩選出穩(wěn)定性最好的條件是3000r/min乳化45～75min。對新城疫抗原、禽流感抗原以及油相不同比例乳化的樣品進行免疫效果對比試驗,篩選出水相油相最佳比... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學福建省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１新城疫抗體水平??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ?ｄｉｓｅａｓｅ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｅｖｅｌ??

第三章超濾濃縮效果評價??９??Ｓ??■＂■ｉｌｌ?Ｉ??Ｄｄ?７ｄ?１４ｄ?２１ｄ?２８ｃ３?３５ａ??＿?Ａ組（未苯締遙奇感抗體邰分〉＿?Ｂ絕＜?２掐濃縮遙宏感抗體邰分＞??■翔（４倍濃締盒流感抗體？部分）＿以百（６街衣縮墓流感抗體部分〉??＿Ｅ組（對照衾流慼抗忭部分〉??圖３－２禽流感抗體水平??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ａｖｉａｎ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｅｖｅｌｓ??３討論??病毒性滅活疫苗中，單苗病毒含量充足，免疫效果確實，但是只能預防與之??對應的一種病毒性疾病，要同時預防多種疾病，就必須同時使用多種單苗分幾次??注射接種，這樣做不緊對雞群造成應激也會影響生產(chǎn)性能和抗病能力？７］，而且也??浪費人力物力。所以聯(lián)苗的生產(chǎn)中非常重要的工藝是如何提高抗原中的病毒含量，??即抗原濃縮純化技術得到了廣泛的研究和應用。目前通常使用的抗原濃縮技術主??要有濃縮膠濃縮法、沉淀濃縮法、離心濃縮法、透析濃縮法、冷凍干燥法和過濾??濃縮法膜分離技術是超濾濃縮的主要原理，本技術是指使用半透膜，在常溫??下通過膜的滲透作用，在化學位差或外界能量的推動下，對兩組分或多組分混合氣??體或液體進行分級、分離、富集和提純的技術［１１９］。??本研究使用密理博的超濾膜濃縮系統(tǒng)，對新城疫和禽流感兩種抗原進行了不??同倍數(shù)的濃縮試驗，病毒含量和血凝價都隨著濃縮倍數(shù)呈升高趨勢，但并不完全??呈線性增長。新城疫濃縮前效價是ｌ〇ｉ６３ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ，濃縮２倍效價是１０９＋８３ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ，??濃縮４倍和６倍都是１０１Ｑ３８ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ差異不明顯。禽流感濃縮前效價１０９＋５ＥＩＤ５Ｑ／ｍｌ，??濃縮２倍和４倍效價

第五章乳化試驗??口?６，倒置黏度計，將管口?１插入供試品（或供試溶液，下同）中，自橡皮管的另一??端抽氣，使供試品充滿球２與３并達到測定線ｂ處，提出黏度計并迅速倒轉(zhuǎn)，抹去黏??附于管外的供試品，取下橡皮管使連接于管口?１上，將黏度計垂直固定于恒溫水浴中，??并使水浴的液面高于球２的中部，放置１５ｍｉｎ后，自橡皮管的另一端抽氣，使供試品??充滿球３并超過測定線ａ，開放橡皮管口，使供試品在管內(nèi)自然下落，用秒表準確記??錄液面自測定線ａ下降至測定線ｂ處的流出時間。依法重復測定３次以上，每次測定??值與平均值的差值不得超過平均值的±５％。另取一份供試品同樣操作，并重復測定３??次以上。以先后兩次取樣測得的總平均值按下式計算，即為供試品的運動黏度或供試??溶液的動力黏度。??｜Ｊ??ｒｉ?一??Ｉ?！卜、上??！??■?ｊ??Ｉ??圖４－１為平氏黏度計??ＦＩＧ．?４－１?Ｔａｉｒａ?ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ??１．主管?２．緩沖球?３．測定球?４．毛細管?５．儲器?６．寬管??７．支管?ａ，?ｂ．環(huán)形測定線??運動黏度（ｍｍ２／ｓ）＝Ｋｔ??動力黏度（ＣＰ）＝?Ｋｔ＇ｐ??式中：??Ｋ一為用已知黏度的標準液測得的黏度計常數(shù)，ｍｍ２／Ｓ２；??Ｔ一為測得的平均流出時間，ｓ；??３６??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同佐劑的新城疫疫苗免疫效果的研究[J]. 施建春,楊惠萍.  山西農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2014(06)
[2]雞新城疫、禽流感（H9亞型）二聯(lián)油乳劑滅活疫苗免疫效力試驗[J]. 白軍,劉淑紅,焦鐵軍,王運宏,黃建斌,李河林,馬建玲,趙希斌,于三科.  動物醫(yī)學進展. 2013(03)
[3]水禽用H5亞型禽流感滅活疫苗對高致病性禽流感病毒流行毒株的免疫保護效果研究[J]. 吳濤,毛婭卿,王嘉,王哲,蔣桃珍.  中國獸藥雜志. 2013(03)
[4]新城疫濃縮滅活疫苗的初步研究[J]. 李俊平,李啟紅,楊承槐,劉丹,李慧姣,蔣桃珍,黃建華.  中國獸藥雜志. 2012(12)
[5]8種中藥多糖及其硫酸化衍生物對新城疫病毒的影響[J]. 王春花,金秧敏,張燕華,李春艷,張秀英.  中國獸醫(yī)雜志. 2012(08)
[6]雞新城疫病毒感染不同細胞的病變特性研究[J]. 豆艷麗,吳潤,劉磊.  甘肅農(nóng)業(yè)大學學報. 2012(02)
[7]2010—2011年河南省部分地區(qū)H9亞型禽流感、新城疫和雞傳染性支氣管炎的流行病學調(diào)查[J]. 岳旭龍,陳禮朋,李雙亮,高文明,張宇耕,崔保安,李新生.  中國農(nóng)學通報. 2012(08)
[8]漢中市雛雞群H9亞型禽流感病毒和新城疫病毒混合感染的血清學診斷[J]. 韓永剛,莫虹斐,徐小虎,何建亮,羅曉榮,陳樹林.  動物醫(yī)學進展. 2012(02)
[9]影響雞新城疫（La Sota株）活疫苗抗原病毒含量因素的探討[J]. 江興華.  福建畜牧獸醫(yī). 2011(04)
[10]H5亞型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5對鴨免疫保護效力的研究[J]. 李俊平,趙雙成,常曉飛,柳金雄,曾顯營,衛(wèi)星輝,李�；�,姜永萍,陳化蘭.  中國預防獸醫(yī)學報. 2011(03)

碩士論文
[1]禽流感（H9亞型）滅活疫苗乳化工藝優(yōu)化[D]. 王斌.南京農(nóng)業(yè)大學 2013
[2]禽流感病毒抗原濃縮方法的建立及濃縮疫苗對雞體免疫效果的研究[D]. 李愛芬.河南農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3529312