禽大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌（Avian Pathogenic Escherichia coli, APEC）引起的嚴重影響?zhàn)B禽業(yè)的傳染病之一。LuxS/AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)廣泛存在于革蘭氏陰性和陽性菌中，可產(chǎn)生用于細菌種間交流的通用自誘導(dǎo)信號分子AI-2（Autoinducer-2,AI-2），在細菌的許多生理功能中扮演著重要的角色。目前禽致病性大腸桿菌復(fù)雜的血清型和廣譜的耐藥性，給禽大腸桿菌病的防控提出了新的挑戰(zhàn),該菌LuxS/AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)的研究國內(nèi)外尚未見報道。本研究旨在通過對APEC的LuxS/AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)探究，為防控APEC感染，從細菌群體角度提供了新的思路，為進一步研究密度感應(yīng)系統(tǒng)對APEC的調(diào)控功能和機理提供參考。1.禽致病性大腸桿菌AI-2的檢測及其因素分析為探討APEC中是否存在LuxS/AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)。利用哈維弧菌BB170（vibrio harveyi BB170）對APEC是否產(chǎn)生信號分子AI-2進行檢測，結(jié)果表明APEC能產(chǎn)生自誘導(dǎo)信號分子AI-2。為探討禽致病性大腸桿菌在不同生長時期和不同培養(yǎng)條件下，信號分子AI-2活性與l... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學安徽省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞表
目錄
文獻綜述
主要技術(shù)路線
引言
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
        1.1.1 主要菌株及其培養(yǎng)
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要培養(yǎng)基及試劑配制
        1.1.4 試驗動物
        1.1.5 主要儀器設(shè)備
    1.2. 試驗方法
        1.2.1 禽致病性大腸桿菌 AI-2 的檢測
        1.2.2 PCR 引物設(shè)計
        1.2.3 luxS 和 pfs 的 mRNA 水平檢測
        1.2.4 luxS 和 pfs 的表達及純化
        1.2.5 重組蛋白 LuxS 多克隆抗體的制備及效價測定
        1.2.6 AI-2 的體外合成
        1.2.7 不同 AI-2 濃度下 APEC 生物被膜的檢測
        1.2.8 luxS 在禽致病性大腸桿菌中的分布
        1.2.9 luxS 缺失株和回復(fù)株的構(gòu)建
        1.2.10 生長曲線的測定
        1.2.11 運動性的測定
        1.2.12 半數(shù)致死量（LD50）的測定
        1.2.13 細胞黏附和入侵
        1.2.14 櫻桃谷鴨感染試驗
        1.2.15 毒力基因的轉(zhuǎn)錄水平的測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 禽致病性大腸桿菌 AI-2 的檢測及其因素分析
        2.1.1 不同 APEC 的 AI-2 活性檢測
        2.1.2 不同生長階段下 APEC 的 AI-2 活性檢測
        2.1.3 不同培養(yǎng)條件下 APEC 的 AI-2 活性檢測
        2.1.4 APEC 在不同生長階段 luxS 和 pfs mRNA 水平
        2.1.5 APEC 在不同培養(yǎng)條件下 luxS 和 pfs mRNA 水平
    2.2 禽致病性大腸桿菌 AI-2 的合成及其對生物被膜的影響
        2.2.1 luxS 和 pfs 的克隆以及表達載體的構(gòu)建
        2.2.2 LuxS 和 Pfs 的表達、純化及可溶性分析
        2.2.3 AI-2 濃度測定標準曲線
        2.2.4 AI-2 的體外合成及活性檢測
        2.2.5 AI-2 對 APEC 生物被膜形成能力的影響
    2.3 禽致病性大腸桿菌 luxS 缺失株的構(gòu)建及生物學特性分析
        2.3.1 luxS 在禽致病性大腸桿菌中的分布
        2.3.2 luxS 帶同源臂的抗氯霉素 DNA 片段的構(gòu)建
        2.3.3 禽致病性大腸桿菌 luxS 缺失株的鑒定
        2.3.4 禽致病性大腸桿菌 luxS 回復(fù)株的構(gòu)建
        2.3.5 不同菌株中 AI-2 的檢測
        2.3.6 生長曲線的測定
        2.3.7 luxS 對 APEC 運動性的影響
        2.3.8 luxS 對 APEC 致病性的影響
        2.3.9 luxS 對 APEC 毒力基因的轉(zhuǎn)錄水平的影響
3 討論
    3.1 禽致病性大腸桿菌 AI-2 的存在
    3.2 不同生長時期 AI-2 的產(chǎn)生及其 luxS 和 pfs 轉(zhuǎn)錄水平分析
    3.3 不同培養(yǎng)條件 AI-2 的產(chǎn)生及其 luxS 和 pfs 轉(zhuǎn)錄水平分析
    3.4 禽致病性大腸桿菌 AI-2 的合成
    3.5 AI-2 對禽致病性大腸桿菌生物被膜形成能力的影響
    3.6 禽致病性大腸桿菌 luxS 缺失株運動性分析
    3.7 禽致病性大腸桿菌 luxS 缺失株致病性分析
4 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
附作者在讀研期間發(fā)表的學術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]AI-2對鴨疫里氏桿菌粘附入侵Vero細胞及其相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響[J]. 劉蕾,韓先干,劉瑞,白灝,董洪亮,丁鏟,劉海文,于圣青.  微生物學報. 2013(03)
[2]禽致病性大腸桿菌強毒力島攝鐵功能與致病性關(guān)系的研究[J]. 李葉芳,白灝,彭開松,涂健,祁克宗.  中國獸醫(yī)科學. 2012(09)
[3]LuxS/AI-2對傷寒沙門菌基因表達的調(diào)節(jié)[J]. 羅哲,王敏,杜鴻,王菲,孟彥辰,倪斌,徐順高,黃新祥.  江蘇大學學報(醫(yī)學版). 2011(01)
[4]鴨致病性大腸桿菌的分離鑒定及其生物學特性分析[J]. 陳文靜,韓先干,何亮,胡青海,于圣青.  中國動物傳染病學報. 2010(02)



本文編號：3065065