目的:探討前列腺癌外泌體對(duì)基質(zhì)細(xì)胞WPMY-1遷移和侵襲能力的影響及其作用機(jī)制。方法:超速離心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F細(xì)胞上清中的外泌體,電鏡觀察外泌體的典型形態(tài)結(jié)構(gòu),Zetaview檢測外泌體的粒徑分布,Wb鑒定外泌體標(biāo)志蛋白及其他相關(guān)蛋白。將WPMY-1細(xì)胞與前列腺癌外泌體（40μg/ml）共孵育后,激光共聚焦顯微鏡觀察WPMY-1細(xì)胞對(duì)PKH67標(biāo)記的外泌體的攝取情況,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測WPMY-1細(xì)胞遷移和侵襲能力,qPCR檢測IL-8、PDGFB和MMP9等三種腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancer-associated fibroblast,CAF）分子表達(dá)水平,Wb檢測EGFR和ERK1/2蛋白磷酸化水平。結(jié)果:電鏡下可觀察到典型茶托狀外泌體結(jié)構(gòu),外泌體粒徑分布集中在100 nm左右,其標(biāo)志蛋白CD63和ALIX的表達(dá)證實(shí)了所提取顆粒為外泌體。此外,外泌體還表達(dá)EGFR、HER2和SRC等三種與前列腺癌進(jìn)展相關(guān)的蛋白。WPMY-1細(xì)胞與外泌體共孵育后,共聚焦顯微鏡下可看到該細(xì)胞攝取大量外泌體,明顯促進(jìn)WPMY-1細(xì)胞的遷移和侵襲能力（均P<0.01）;與... 

【文章來源】：中國腫瘤生物治療雜志. 2019年03期 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞株及主要試劑
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 外泌體分離與鑒定
    1.4 外泌體攝取實(shí)驗(yàn)檢測WPMY-1細(xì)胞攝取外泌體情況
    1.5 qPCR檢測CAF相關(guān)分子表達(dá)的水平
    1.6 Wb檢測LNCaP-AI+F細(xì)胞外泌體蛋白及外泌體處理后WPMY-1細(xì)胞中磷酸化蛋白的表達(dá)水平
    1.7 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測WPMY-1細(xì)胞遷移和侵襲能力
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 外泌體鑒定及其相關(guān)蛋白表達(dá)
    2.2 WPMY-1細(xì)胞大量攝取LNCaP-AI+F細(xì)胞來源的外泌體
    2.3 LNCaP-AI+F外泌體提高WPMY-1細(xì)胞遷移和侵襲能力
    2.4 LNCaP-AI+F外泌體促進(jìn)WPMY-1細(xì)胞高表達(dá)IL-8、PDGFB和MMP9
    2.5 LNCaP-AI+F外泌體促進(jìn)WPMY-1 EGFR信號(hào)通路活化
3 討論



本文編號(hào)：2957871