目的 研究載脂蛋白AI（ApoAI）模擬肽D4F對(duì)巨噬源性泡沫細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）-C/EBP同源蛋白（CHOP）信號(hào)途徑的影響，以探討其可能的抗動(dòng)脈粥樣硬化（AS）機(jī)制。 方法 24只8周齡雄性apoE-/-小鼠，給予高脂（15.8%）高膽固醇（1.25%）飲食兩周后，隨機(jī)分為3組（n=8），分別腹腔注射生理鹽水（模型組）、紊亂模擬肽sD4F （1mg/kg·d，sD4F組）和ApoAI模擬肽D4F （1mg/kg·d，D4F組）。同周齡雄性C57BL/6J小鼠給予普通飲食且腹腔注射生理鹽水作為正常對(duì)照。6周后處死，采用ELISA法檢測(cè)血清氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平，并切取小鼠主動(dòng)脈根部制備冰凍切片，采用HE染色和油紅O染色檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化病變及粥樣斑塊脂質(zhì)含量，分別采用Masson染色和TUNEL法檢測(cè)斑塊內(nèi)膠原纖維含量和細(xì)胞凋亡情況，用免疫熒光化學(xué)方法檢測(cè)斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞標(biāo)志分子MOMA-2、ERS標(biāo)志分子CHOP和糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）水平。體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞，在不同濃度（0、12.5、25和50mg/L） D4F或50mg/L紊亂模擬肽sD4F預(yù)處理1h后，與ox-LDL （100mg/L）共同孵育24h或與5mg/L ERS誘導(dǎo)劑衣霉素（tunicamycin，TM）共同孵育12h。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡，分別采用Western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析CHOP蛋白和mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果 sD4F組與模型組比較各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。實(shí)驗(yàn)前后各組小鼠體重變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與正常對(duì)照組（3.45±1.53μg/ml）比較，模型組小鼠血清ox-LDL水平（8.90±1.27μg/ml）顯著升高，而D4F組ox-LDL水平（6.36±0.34μg/ml）明顯降低，較模型組減少25.5%（P﹤0.05）。D4F顯著減少主動(dòng)脈根部病變總面積和脂質(zhì)陽(yáng)性區(qū)百分比，而增加斑塊內(nèi)膠原纖維含量，分別為模型組的72.3%（P﹤0.05）、59.9%（P﹤0.01）和140%（P﹤0.05）。與模型組比較，D4F組主動(dòng)脈根部斑塊巨噬細(xì)胞聚積和細(xì)胞凋亡率明顯降低，分別為模型組的65.6%（P﹤0.05）和61.2%（P﹤0.01），且ERS標(biāo)志分子GRP78和促凋亡蛋白CHOP表達(dá)顯著減少，分別為模型組的68.1%（P﹤0.05）和61.1%（P﹤0.01）。在體外實(shí)驗(yàn)中，D4F明顯降低ox-LDL所誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡，并下調(diào)CHOP蛋白和mRNA表達(dá)，且呈濃度依賴性（P0.05或P0.01）。另外，D4F顯著減輕ERS誘導(dǎo)劑TM所誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡，并在mRNA和蛋白水平均可抑制CHOP上調(diào)，與TM組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。結(jié)論 ApoAI模擬肽D4F可減輕apoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變內(nèi)巨噬細(xì)胞的聚集，抑制細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與抑制CHOP介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞ERS凋亡途徑有關(guān)。
【學(xué)位單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R543.5
【部分圖文】：

圖 3 D4F 對(duì)主動(dòng)脈根部脂質(zhì)沉積的影響。A：油紅 O 染色各組小鼠主動(dòng)脈根部切片，放大倍數(shù)為×物鏡 4。B：各組小鼠主動(dòng)脈根部脂質(zhì)陽(yáng)性區(qū)相對(duì)定量，以占主動(dòng)脈根部病變總面積百分比表示。Mean±SD，n=8. ##P < 0.01vs Model 組。D4FModelsD4FB202530ntentoinoraae)#

圖 7 D4F 對(duì) ox-LDL 所誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響。Mean±SD，n=4. 對(duì)照（con）組比較，*P<0.05，**P<0.01；與 ox-LDL 組比較，#P<0.05，##P<0.Conox-LDLox-LDL+sD4F ox-LDL+D4##*****##

4F對(duì)ox-LDL所誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響
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本文編號(hào)：2872933