本文關(guān)鍵詞：一株抗黃萎病的番茄內(nèi)生放線菌的分離、篩選和鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著番茄栽培面積不斷擴(kuò)大,越來(lái)越多不合理的栽培方式出現(xiàn)在生產(chǎn)實(shí)踐中,加上倒茬困難,連年種植,設(shè)施蔬菜常發(fā)生植株生育遲緩、生長(zhǎng)勢(shì)下降、品質(zhì)變劣、土傳病原菌大量積累、真菌性病害大量發(fā)生等現(xiàn)象。黃萎病是設(shè)施番茄中最主要的病癥之一,已成為限制番茄生產(chǎn)和商品化的瓶頸問(wèn)題。放線菌一類(lèi)具有分枝的絲狀細(xì)胞和菌絲的一類(lèi)細(xì)菌,廣泛存在于不同的自然生態(tài)環(huán)境中。其多樣性豐富,經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)得到次級(jí)代謝產(chǎn)物具有諸多優(yōu)良功效。許多放線菌對(duì)植物真菌性病害都有高效防治作用。同時(shí),許多放線菌還表現(xiàn)出了一定的促生作用。作為目前相對(duì)較新的方向,植物內(nèi)生放線菌以其得天獨(dú)厚的天然優(yōu)勢(shì),越來(lái)越受到生物防治及相關(guān)領(lǐng)域的關(guān)注,并且很多高效活性放線菌株已經(jīng)作為優(yōu)勢(shì)菌源進(jìn)行商品化加工成為生防菌劑和生物有機(jī)肥等。為了發(fā)掘具有高效生防作用的植物內(nèi)生放線菌資源,本研究選用5種高效分離培養(yǎng)基分別對(duì)已充分研磨的健康和發(fā)病番茄植株的根內(nèi)和根際土壤中的放線菌分離和純化培養(yǎng)。將獲得的菌株通過(guò)培養(yǎng)特征和菌落形態(tài)學(xué)特征初步去除重復(fù),然后通過(guò)體外平板抑制試驗(yàn)分別對(duì)放線菌的孢子懸浮液和發(fā)酵液進(jìn)行抑制真菌活性篩選。配合田間進(jìn)行的番茄苗期試驗(yàn),進(jìn)一步驗(yàn)證放線菌的抗病和促生作用,及其在根內(nèi)和根際的定殖能力。將篩選后得到的高效拮抗菌株進(jìn)行16S rRNA基因序列擴(kuò)增并測(cè)序。結(jié)合形態(tài)培養(yǎng)學(xué)特征和生理生化特性研究,對(duì)活性菌株進(jìn)行多相分類(lèi)鑒定,最終獲得并確定目的放線菌株。為今后開(kāi)發(fā)和利用植物內(nèi)生放線菌資源的抗病性篩選提供數(shù)據(jù)支持和實(shí)踐基礎(chǔ),為內(nèi)生放線菌分離源的針對(duì)性選擇提供參考依據(jù),同時(shí)對(duì)未來(lái)生產(chǎn)實(shí)踐中生防菌劑的制備和使用積累生防菌資源。本研究主要結(jié)果如下:(1)以發(fā)病番茄植株和緊鄰的健康作為分離源,共分離得到的86株不同放線菌。其中50株來(lái)自健康植株,36株來(lái)自發(fā)病植株。根內(nèi)共分離純化得到32株放線菌,根際土壤中得到54株。(2)對(duì)分離純化出的86株植物內(nèi)生放線菌進(jìn)行體外抑菌活性檢測(cè)。其中8株對(duì)黃萎病菌表現(xiàn)出明顯抑制作用。在這8株拮抗菌中,3株來(lái)自健康植株(HHV1-5、HGS2-9、HAAG3-8);5株來(lái)自發(fā)病植株(DDPA1-2、DHV3-2、DAAG1-10、DGS3-6、DGS2-8)。其中DHV3-2對(duì)番茄黃萎病菌表現(xiàn)出了最大抑制活性,抑制半徑顯示為18.2mm。其抑制活性顯著高于其他放線菌。此外,DHV3-2還對(duì)很多病原真菌都顯示出了抑制作用。(3)對(duì)放線菌DHV3-2進(jìn)行了多相分類(lèi)學(xué)鑒定。通過(guò)分子生物學(xué)鑒定、形態(tài)培養(yǎng)特征鑒定以及生理生化特性鑒定,最終確定該菌株屬于鏈霉菌屬。(4)通過(guò)番茄苗期試驗(yàn)驗(yàn)證,接種高濃度內(nèi)生放線菌DHV3-2對(duì)番茄黃萎病具有明顯的抑制作用,發(fā)病率和病情指數(shù)均顯著降低;且具有一定的促生長(zhǎng)效果,接種放線菌可以顯著提高番茄幼苗的株高、地上部鮮質(zhì)量和全株鮮質(zhì)量;且在番茄幼苗的根組織和根際土壤中均有一定的定殖能力。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)中,相較于根組織,在番茄根際土壤中可培養(yǎng)放線菌的種類(lèi)更為豐富。相較于番茄健康株,在番茄發(fā)病株中發(fā)現(xiàn)了更多不同的活性放線菌。通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)篩選出最高活性的菌株DHV3-2,并在苗期活體試驗(yàn)中,表現(xiàn)出了較強(qiáng)的抗病作用和一定的促生作用。且DHV3-2具有一定的定殖能力。經(jīng)鑒定,DHV3-2是一株具有較大潛力的鏈霉菌。
【關(guān)鍵詞】：番茄 內(nèi)生放線菌 生物防治 黃萎病 鏈霉菌
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S476.1
【目錄】：

• 摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 引言12-18
• 1.1 研究目的與意義12
• 1.2 國(guó)內(nèi)外研究的動(dòng)態(tài)和趨勢(shì)12-16
• 1.2.1 番茄產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及黃萎病防治措施12-13
• 1.2.2 植物內(nèi)生放線菌的定義13
• 1.2.3 植物內(nèi)生放線菌的生態(tài)重要性13-14
• 1.2.4 植物內(nèi)生放線菌的多樣性14-15
• 1.2.5 內(nèi)生菌防治植物病害研究進(jìn)展15-16
• 1.3 本研究的主要內(nèi)容及技術(shù)路線16-18
• 1.3.1 本研究主要內(nèi)容16-17
• 1.3.2 本研究技術(shù)路線17-18
• 2 材料與方法18-31
• 2.1 試驗(yàn)材料18
• 2.1.1 植株和根際土壤樣品18
• 2.1.2 供試真菌18
• 2.1.3 供試品種18
• 2.2 試劑與儀器18-19
• 2.2.1 主要試劑18-19
• 2.2.2 主要儀器19
• 2.3 主要培養(yǎng)基及制備方法19-22
• 2.3.1 分離培養(yǎng)基19-20
• 2.3.2 純化培養(yǎng)基20
• 2.3.3 菌絲體培養(yǎng)基20
• 2.3.4 大腸桿菌培養(yǎng)基20
• 2.3.5 生測(cè)培養(yǎng)基20
• 2.3.6 生理生化測(cè)定培養(yǎng)基20-21
• 2.3.7 形態(tài)觀察培養(yǎng)基21
• 2.3.8 發(fā)酵培養(yǎng)基21-22
• 2.4 根組織和根際土壤中放線菌分離22-23
• 2.4.1 樣品根組織中放線菌的分離純化22
• 2.4.2 根際土壤中放線菌的分離純化22-23
• 2.5 放線菌體外抑制活性檢測(cè)23-24
• 2.5.1 放線菌對(duì)黃萎病菌活性初測(cè)23
• 2.5.2 放線菌對(duì)黃萎病菌活性驗(yàn)證23
• 2.5.3 放線菌發(fā)酵液抑菌活性檢驗(yàn)23-24
• 2.6 放線菌多相分類(lèi)鑒定24-28
• 2.6.1 形態(tài)和培養(yǎng)特征鑒定24
• 2.6.2 生理生化特征鑒定24-26
• 2.6.3 分子水平鑒定26-28
• 2.7 苗期試驗(yàn)放線菌的生防和促生效果28-30
• 2.7.1 番茄黃萎病菌的致病能力驗(yàn)證28-29
• 2.7.2 苗期試驗(yàn)驗(yàn)證抗番茄黃萎病防效29
• 2.7.3 放線菌對(duì)番茄幼苗的促生作用29
• 2.7.4 放線菌在番茄幼苗根部定殖能力29-30
• 2.8 數(shù)據(jù)分析30-31
• 3 結(jié)果與分析31-43
• 3.1 番茄內(nèi)生放線菌分離及純化31-32
• 3.2 放線菌體外抑菌活性檢驗(yàn)32-36
• 3.2.1 放線菌孢子的抑制活性32-35
• 3.2.2 放線菌發(fā)酵液的抑制活性35-36
• 3.3 放線菌多相分類(lèi)鑒定36-39
• 3.3.1 16S r RNA序列測(cè)定及系統(tǒng)進(jìn)化分析36-37
• 3.3.2 形態(tài)及培養(yǎng)特征37-38
• 3.3.3 生理生化特征38-39
• 3.4 苗期試驗(yàn)放線菌的生防和促生效果39-43
• 3.4.1 番茄黃萎病菌的致病能力測(cè)定39-40
• 3.4.2 苗期試驗(yàn)驗(yàn)證抗番茄黃萎病防效40-42
• 3.4.3 放線菌對(duì)番茄幼苗的促生作用42
• 3.4.4 放線菌在番茄幼苗根部定殖能力42-43
• 4 討論43-45
• 4.1 植株發(fā)病后對(duì)活性菌株的招募能力43
• 4.2 活性菌株的抗病促生作用與定殖能力的關(guān)系43-44
• 4.3 放線菌株的鑒定和比對(duì)情況44-45
• 5 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文54

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3 詹剛明,榮曉瑩,孫廣宇;兩株頡頏內(nèi)生放線菌的分離及生防活性檢測(cè)[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年05期

4 劉慧芹;張姝;韓巨才;劉慧平;;番茄等植物內(nèi)生放線菌的分離及抑菌作用[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年09期

5 周鑫鈺;朱宏建;雷湘華;周倩;;植物內(nèi)生放線菌應(yīng)用研究進(jìn)展[J];江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2010年12期

6 古力山·買(mǎi)買(mǎi)提;趙國(guó)玉;董志芳;吾甫爾·米吉提;;一株藍(lán)麻黃內(nèi)生放線菌的分離、鑒定和活性研究[J];生物技術(shù);2009年04期

7 邱并生;;紅樹(shù)林內(nèi)生放線菌[J];微生物學(xué)通報(bào);2012年06期

8 馬強(qiáng);宗兆鋒;梁亞萍;;鳳縣幾種野生植物內(nèi)生放線菌的分離篩選[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2007年03期

9 朱文勇;李潔;趙國(guó)振;黃海玉;秦盛;趙立興;徐麗華;;喜樹(shù)內(nèi)生放線菌多樣性及抗菌活性評(píng)價(jià)[J];微生物學(xué)通報(bào);2010年02期

10 張秀敏;張利平;李景晨;;艾葉內(nèi)生放線菌的分離、系統(tǒng)發(fā)育及相關(guān)特性研究[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

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2 郝麗;馬海龍;徐潤(rùn);顧沛雯;;寧夏干旱荒漠區(qū)苦豆子內(nèi)生放線菌的分離鑒定[A];第二次全國(guó)植物抗病蟲(chóng)和病害流行與控制學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

3 王彩霞;董向麗;李保華;于馮;劉海南;;植物內(nèi)生放線菌A-1的鑒定及其防病潛力和防病機(jī)制研究[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

4 黃麗麗;涂璇;康振生;高小寧;;植物內(nèi)生放線菌TIASA5菌株抑菌活性物質(zhì)的研究[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

5 徐紅星;呂仲賢;陳建明;鄭許松;張玨鋒;陳列忠;俞曉平;王向軍;;銀杏內(nèi)生放線菌HG2393菌株發(fā)酵過(guò)程及其殺蟲(chóng)活性的初步研究[A];農(nóng)業(yè)生物災(zāi)害預(yù)防與控制研究[C];2005年

6 王心選;黃麗麗;康振生;;一株生防內(nèi)生放線菌發(fā)酵液的抑菌譜及其穩(wěn)定性研究[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

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1 祁鶴興;苦豆子內(nèi)生放線菌多樣性及其抗生素合成酶基因的挖掘[D];寧夏大學(xué);2015年

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9 馬強(qiáng);鳳縣野生植物內(nèi)生放線菌的分離篩選及鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

10 梁亞萍;野生植物內(nèi)生放線菌的篩選研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：一株抗黃萎病的番茄內(nèi)生放線菌的分離、篩選和鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：440155