本文關鍵詞：靈芝三萜和金銀花綠原酸生物合成途徑關鍵酶基因的挖掘及分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《北京協(xié)和醫(yī)學院》 2013年

靈芝三萜和金銀花綠原酸生物合成途徑關鍵酶基因的挖掘及分析

徐曉蘭  

【摘要】：闡明中藥生物活性成分的次生代謝途徑及其調控機制是現(xiàn)代中藥研究的重要內容之一。次生代謝工程在提高藥用植物目標產物含量上有著極大的應用潛能,但受傳統(tǒng)研究方法和技術所限,目前我們對其次生代謝途徑及調控機制的認知還較為粗略,因而期望通過次生代謝工程獲取大量的目標次生代謝物仍面臨著較大困難。功能基因組學(Functional Genomics)是在結構基因組學(Structural Genomics)的基礎上,利用后者提供的信息,應用高通量測序產生的大量數(shù)據(jù),在基因組或轉錄組水平上全面研究基因的表達、調控與功能,并探索基因之間、基因與蛋白質之間、基因及其產物與生長發(fā)育之間的相互聯(lián)系和規(guī)律。通過全基因組學或轉錄組學系統(tǒng)分析次生代謝物的生物合成途徑并發(fā)掘與之相關的基因,能夠使我們更充分地了解中藥的遺傳信息與背景,也將使利用次生代謝工程生產重要藥效成分成為可能。靈芝和金銀花是具有極高藥用價值和經(jīng)濟價值的傳統(tǒng)中藥,靈芝三萜和綠原酸分別是靈芝和金銀花的主要藥效成分之一,但目前對這些重要化合物的生物合成途徑仍缺少系統(tǒng)的研究。本課題采用功能基因組學研究方法從全基因組水平上對藥用真菌赤芝全基因組測序數(shù)據(jù)進行深入分析,以探索可能參與到靈芝三萜生物合成途徑的關鍵酶基因；運用高通量測序技術對藥用植物金銀花的轉錄組進行研究,以闡明其重要成分綠原酸的生物合成途徑,并對相關的關鍵基因進行克隆。本研究為靈芝三萜和綠原酸的生物合成研究奠定了基礎。 靈芝GANODERMA,又稱"Lingzhi",為赤芝Ganoderma lucidum或紫芝Ganoderma sinense的干燥子實體(中國藥典2010版),是我國著名的藥用真菌之一�，F(xiàn)代藥理研究表明靈芝有抗腫瘤,抗高血壓,抗病毒和增強免疫能力的功效,靈芝三萜類和靈芝多糖為該功效的主要活性物質。赤芝全基因組已由本課題組完成測序,該物種基因組大小為43.3MB,共有16,113個預測蛋白的編碼基因。本研究在赤芝全基因組數(shù)據(jù)庫中,鑒定了參與靈芝三萜合成上游途徑的11個關鍵酶,其中乙酰輔酶A乙�；D移酶(AACT)和法尼基焦磷酸合成酶(FPS)各有兩個編碼基因,其余都為單編碼基因；發(fā)現(xiàn)了214個可能參與到靈芝三萜下游合成途徑的候選細胞色素氧化酶基因(CYP450),其中195個可能具有真正的P450功能包括6個兼性P450(bifunctional P450, BiP450),這195個P450s分屬于24個基因簇。通過實時熒光定量PCR (QRT-PCR)檢測,78個P450基因與羊毛甾醇合酶(LAS)共表達,說明此78個P450很有可能參與到靈芝三萜骨架的結構修飾中。78個P450中,有28個為赤芝所獨有的新家族,另38個基因在其他物種中之前已被報道過。此外,24個基因簇中有5個與LAS共表達,它們極有可能是以基因簇的方式參與到靈芝三萜的合成途徑中。 金銀花LONICERA JAPONICA FLOS為忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或待初開的花。為我國傳統(tǒng)臨床用藥之一,具有抗炎,抗氧化和抗病毒的藥理學特性,主要活性成分為綠原酸(Chlorogenic acid, CGA)和木犀草苷(Luteoloside)。綠原酸和木犀草苷的生物合成途徑在其他物種中已有一定的研究,但在金銀花中還未見報道與證實。本實驗應用454GSFLxTitanium高通量測序平臺,對金銀花的轉錄組進行測序,完成了金銀花葉和花2個cDNA文庫測序,分別構建了花和葉的表達序列標簽(Expressed sequence tag, EST)文庫。從花的EST文庫中拼接得到21849個疊連群(contig),38187個單一序列(singleton);從葉的EST文庫中獲得14242個疊連群,40557個單一序列。應用生物信息學方法對所得EST序列從功能基因組水平上研究了綠原酸的次生代謝途徑。在金銀花中發(fā)現(xiàn)了幾乎所有的參與綠原酸生物合成的酶,其中包括羥基肉桂�；o酶A：奎尼酸羥基肉桂轉移酶(HQT)和羥基肉桂�；o酶A：莽草酸/奎尼酸的羥基肉桂轉移酶(HCT),同時也發(fā)現(xiàn)了所有參與木犀草苷生物合成的酶。本實驗通過RACE技術克隆了8個HQT和HCT基因,得到全長cDNA序列。與其它物種中已知的HQT和HCT氨基酸序列進行比對,發(fā)現(xiàn)其中2個HQT和1個HCT具有真正的保守結構域。此外,分析了其它參與次生代謝過程的重要基因包括P450和轉錄因子等。最后,通過花與葉的EST數(shù)據(jù)庫的比較,挖掘到分別在花和葉中表達的組織特異性基因。金銀花轉錄組的測序工作為關鍵酶基因的挖掘提供了基礎,并為進一步克隆其全長、研究其功能提供了依據(jù),同時也作為金銀花遺傳標記、基因表達、基因組學和功能基因組學的重要數(shù)據(jù)來源。 全基因組及轉錄組分析在中藥次生代謝途徑的研究中有著至關重要的作用,為相關酶基因的克隆、鑒定,以及揭示完整的次生代謝途徑提供了豐富的基因信息。本研究獲得了靈芝三萜和綠原酸生物合成途徑的信息,并挖掘了與金銀花生長發(fā)育相關的基因,為中藥次生代謝工程合成靈芝三萜及綠原酸奠定了理論基礎。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：S567.31;S567.79
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于永學;王英姿;;灰霉病菌抗藥性發(fā)生概況及機理研究進展[J];現(xiàn)代農業(yè)科技;2009年11期

2 孫麗芳;邢少辰;張君;楊建福;王興智;董英山;;轉錄因子在植物進化和抗逆中的作用[J];基因組學與應用生物學;2009年03期

3 黃艷娟;肖桂林;;靈芝三萜藥理學作用研究進展[J];中醫(yī)藥導報;2008年09期

4 周憲林;;甲基茉莉酸對喜樹中HMGS基因表達的影響初探[J];井岡山醫(yī)專學報;2009年06期

5 李娜;王世明;陳軍;李玉祥;趙明文;;SEFA-PCR法克隆靈芝鯊烯合酶基因啟動子及其序列分析[J];菌物學報;2006年04期

6 劉高強;王曉玲;;靈芝免疫調節(jié)和抗腫瘤作用的研究進展[J];菌物學報;2010年01期

7 甘淋玲;盧一卉;周成合;;哌嗪化合物作為酶抑制劑的研究進展[J];中國生化藥物雜志;2009年02期

8 陳士林;何柳;劉明珠;錢俊;閆海霞;程翔林;錢忠直;;本草基因組方法學研究[J];世界科學技術(中醫(yī)藥現(xiàn)代化);2010年03期

9 王雪霞;薛永常;趙文超;;木質素生物合成中C3H/HCT的研究進展[J];生命的化學;2008年05期

10 趙壽元;人類基因組計劃研究現(xiàn)狀[J];生物工程進展;1991年04期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳耀生;藥用植物三七三萜合成途徑功能酶特征與植物三萜合成通路分子進化[D];廣西醫(yī)科大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 姚健;靈芝異戊二烯焦磷酸異構酶基因的克隆及其表達特性的研究[D];南京農業(yè)大學;2011年

2 于湘莉;紫杉醇生物合成上游途徑中重要酶基因克隆[D];天津大學;2004年

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁媛;楊毅;開桂青;潘見;;靈芝三萜提取工藝研究[J];安徽化工;2007年04期

2 于俊紅;黃綿佳;田維敏;;巴西橡膠樹橡膠生物合成調控的研究進展[J];安徽農學通報;2007年12期

3 呂超田;姚向陽;孫程;;靈芝主要活性物質及其藥理作用研究進展[J];安徽農學通報(上半月刊);2011年01期

4 方傳代;鄒盛勤;;反相高效液相色譜法測定金銀花中黃酮類成分的含量[J];安徽農業(yè)科學;2006年11期

5 王惠君;王文泉;楊子賢;王海燕;李杰;付瑜華;;橡膠綜述[J];安徽農業(yè)科學;2006年13期

6 劉強;叢麗娜;張宗申;;植物甾醇與三萜類皂苷生物合成基因調控的研究進展[J];安徽農業(yè)科學;2006年19期

7 馬彥芳;;金銀花抗氧化作用的研究[J];安徽農業(yè)科學;2007年11期

8 黃炎;郭慶水;徐立新;陳守才;;巴西橡膠樹的分子生物學研究進展[J];安徽農業(yè)科學;2008年02期

9 姜洪芳;張衛(wèi)明;張玖;;忍冬葉黃酮類化合物的提取分離與結構鑒定[J];安徽農業(yè)科學;2008年27期

10 白明生;李國旗;姚澍輝;陳彥云;;寧夏引種金銀花與原產地金銀花中綠原酸和總黃酮含量的比較測定[J];安徽農業(yè)科學;2008年28期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫霞;鄭成淑;王秀峰;邢世巖;束懷瑞;;菊花花芽分化期葉片和莖尖轉錄組表達分析[A];中國觀賞園藝研究進展2011[C];2011年

2 黃志偉;鄭金貴;郭明殊;;三萜類化合物的藥理作用及代謝調控的分子生物學研究進展[A];福建省科協(xié)第五屆學術年會提高海峽西岸經(jīng)濟區(qū)農業(yè)綜合生產能力分會場論文集[C];2005年

3 易博;翟紅莉;;基因工程在生產藥用植物次生代謝產物中的應用[A];海南省藥學會二○一○年學術年會會議論文集[C];2010年

4 崔政偉;孫麗娟;;微波真空干燥高粘度的靈芝濃縮液[A];2005年全國農產品加工、食品和包裝工程學術研討會論文集[C];2005年

5 陳軍輝;吳鳳琪;李文龍;楊佰娟;殷月芬;黎先春;王小如;;液相色譜-電噴霧飛行時間質譜法分析赤芝中的三萜類成分[A];2006第六屆中國藥學會學術年會論文集[C];2006年

6 宋經(jīng)元;吳春穎;陳士林;;EST技術及其在藥用植物功能基因挖掘中的應用研究[A];第九屆全國中藥和天然藥物學術研討會大會報告及論文集[C];2007年

7 陳若蕓;劉超;李保明;王洪慶;;野生和不同培養(yǎng)條件下靈芝中的三萜類含量比較[A];首屆藥用真菌產業(yè)發(fā)展暨學術研討會論文集[C];2005年

8 楊慶堯;周月琴;楊曉彤;;靈芝三萜的化學研究進展[A];首屆海峽兩岸食（藥）用菌學術研討會論文集[C];2005年

9 周月琴;楊曉彤;楊慶堯;;靈芝三萜的藥理活性研究進展[A];首屆海峽兩岸食（藥）用菌學術研討會論文集[C];2005年

10 李娜;趙明文;;釀酒酵母鯊烯單加氧酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達[A];首屆全國食用菌中青年專家學術交流會論文集[C];2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賴曉芳;中國對蝦應答WSSV侵染相關基因的研究[D];中國海洋大學;2010年

2 徐立新;MeJA對人參DS基因表達的影響及DS在酵母中的表達[D];吉林大學;2011年

3 吳穎;遼東楤木三萜皂苷合成相關基因克隆及功能研究[D];吉林大學;2011年

4 張來;竹節(jié)參離體培養(yǎng)與鯊烯合酶（squalene synthase，SS）基因的克隆及代謝研究[D];西南大學;2011年

5 吳碧蘭;復方穿心蓮體外抗呼吸道病毒及體內抗甲1型流感病毒的作用研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

6 張荻;百子蓮花芽分化及開花機理研究[D];東北林業(yè)大學;2011年

7 王士杰;茉莉酸甲酯誘導的人參發(fā)根培養(yǎng)及SSH文庫構建研究[D];吉林農業(yè)大學;2011年

8 太志剛;四種花卉的化學成分及其抗氧化活性研究[D];云南大學;2011年

9 李文龍;痰熱清注射液生產過程質量控制方法研究[D];浙江大學;2011年

10 侯毅平;禾谷鐮孢菌（Fusarium graminearum）對氰烯菌酯的抗藥性機制研究[D];南京農業(yè)大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程再功;雙黃連系列制劑中連翹有效成分的定性定量及口服液指紋圖譜研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2010年

2 劉文英;豫產道地中藥材金銀花離體培養(yǎng)技術研究[D];河南師范大學;2010年

3 曾光;苜蓿抗逆基因的cDNA克隆和轉基因煙草功能的初步驗證[D];新疆農業(yè)大學;2010年

4 陳香;靈芝酸單體T片劑的制備及其藥動學研究[D];華東理工大學;2011年

5 王文炳;山東道地藥材金銀花三種品系的鑒別研究[D];山東中醫(yī)藥大學;2010年

6 龔華棟;貓人參藥材質量評價與質量控制關鍵技術的研究[D];浙江大學;2011年

7 王磊;基于“譜—效”結合的金銀花藥效物質篩選的初步研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2010年

8 李科志;RNA干擾技術在絞股藍鯊烯合酶基因功能研究中的應用[D];廣西醫(yī)科大學;2011年

9 李燁;靈芪蠲肝膠囊含藥血清對PDGF誘導的大鼠肝星狀細胞增殖及JAK/STAT信號通路的影響[D];瀘州醫(yī)學院;2011年

10 成慧;龍牙楤木三萜皂苷生物合成途徑中相關基因的研究[D];吉林大學;2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王春雷,蘆柏震,侯桂蘭;熊果酸抗腫瘤作用研究進展[J];安徽醫(yī)藥;2005年10期

2 王先遠,金宏,許志勤,高蘭興;苦瓜皂甙降血糖作用及其機制初探[J];氨基酸和生物資源;2001年03期

3 葛君;朱妤婕;吳軍;姚蓓蓓;;絞股藍皂苷對家兔腸缺血再灌注致心肌損傷的保護作用[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2006年04期

4 王志潔,黃鐵牛,劉焱文,楊占秋,方學韞;黃芪總皂甙抗HSV_2的實驗研究[J];浙江中醫(yī)學院學報;2001年05期

5 何薇;曾祖平;;知母皂苷及其苷元抗衰老作用的研究進展[J];北京中醫(yī);2006年06期

6 喬萍,楊貴貞;三七皂苷單體Rg1對D-半乳糖模型鼠學習記憶和免疫功能的影響[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2003年03期

7 崔新明,李艷茹,呂文偉,崔麗,劉潔,田建明,李龍云,葉金梅,張志偉,竇瑩;人參皂苷Rg2對急性心源性休克犬心肌的保護作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2003年04期

8 王春剛,賈曉晶,董麗華,吳鎮(zhèn)鳳,龔守良,馬興元,陳燕萍;西洋參葉三醇組皂苷對乳腺癌放療患者外周血免疫球蛋白、補體水平及淋巴細胞CD4、CD8和CD25表達的影響[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2005年02期

9 梅少林;袁紅艷;常雅萍;李平亞;盧丹;;人參皂苷Rg3體外抗HSV-1活性與免疫調節(jié)效應[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2006年06期

10 夏冬,林志彬,李榮芷,何云慶;靈芝多糖對小鼠免疫功能的影響(英文)[J];北京醫(yī)科大學學報;1989年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 宋水山,周培瑾;聚羥基烷酸的生物合成途徑及相關基因組特性的研究進展(綜述)[J];河北省科學院學報;2001年02期

2 汪華;崔志峰;;莽草酸生物合成途徑的調控[J];生物技術通報;2009年03期

3 張巖;湯定欽;周明兵;;植物生氰糖苷研究進展[J];生物技術通報;2009年04期

4 李家玉;王海斌;林志華;陳榮山;何海斌;;植物次生代謝物的結構、生物合成及其功能分析——生物堿[J];農業(yè)科學研究;2009年04期

5 熊立瑰;劉仲華;黃建安;;茶兒茶素研究進展[J];茶葉通訊;2011年01期

6 馮志華;王遠山;鄭裕國;;阿卡波糖的生物合成途徑研究進展[J];生物技術通報;2011年08期

7 劉永立;胡海濤;蘭大偉;;維生素C的生物合成及其基因調控研究進展[J];果樹學報;2006年03期

8 趙遠;胡志剛;陳克平;;鱗翅目昆蟲性信息素合成的分子機制研究進展[J];蠶業(yè)科學;2006年04期

9 李金花;張綺紋;牛正田;盧孟柱;Carl J Douglas;;木質素生物合成及其基因調控的研究進展[J];世界林業(yè)研究;2007年01期

10 馬君蘭;李成;魏穎;李莉;趙越;;異黃酮的生物合成途徑及其調控[J];東北農業(yè)大學學報;2007年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭妍;王浩陽;許文平;;抗壞血酸在果實采后后熟進程中的作用[A];2008園藝學進展（第八輯）——中國園藝學會第八屆青年學術討論會暨現(xiàn)代園藝論壇論文集[C];2008年

2 江宏文;張毅;林曉珊;;麥角固醇高產菌株選育方法的新進展[A];“科技創(chuàng)新與食品產業(yè)可持續(xù)發(fā)展”學術研討會暨2008年廣東省食品學會年會論文集[C];2008年

3 陳莉;;三萜皂甙生物合成途徑及其關鍵酶的研究概述[A];廣西生物化學與分子生物學會第六次學術研討會論文摘要[C];2003年

4 張上隆;;植物類胡蘿卜素的生物合成及其調控[A];張上隆果樹學文選[C];2006年

5 夏濤;高麗萍;韋朝領;劉亞軍;王云生;高可君;張憲林;楊冬青;孫美蓮;王正榮;張立明;;茶樹兒茶素生物合成研究進展[A];中國茶葉科技創(chuàng)新與產業(yè)發(fā)展學術研討會論文集[C];2009年

6 楊錦芬;陳蔚文;何國振;徐暉;何瑞;詹若挺;王永炎;;陽春砂萜類成分生物合成上游功能基因的研究[A];中國植物學會七十五周年年會論文摘要匯編（1933-2008）[C];2008年

7 張興國;李貞霞;鄧小燕;蘇成剛;劉佩瑛;;魔芋葡甘聚糖生物合成研究進展[A];中國園藝學會第五屆青年學術討論會論文集[C];2002年

8 宋東輝;侯李君;宋西峰;施定基;;藍藻脂肪酸合成途徑乙酰輔酶A羧化酶基因的克隆與穿梭表達載體的構建[A];中國海洋湖沼學會藻類學分會第七屆會員大會暨第十四次學術討論會論文摘要集[C];2007年

9 高東堯;馬蘭青;韓俊友;李彥舫;;高山紅景天紅景天甙生物合成代謝途徑初探[A];中國植物學會七十五周年年會論文摘要匯編（1933-2008）[C];2008年

10 陳道付;金海濤;李紹鈺;;赭曲霉毒素A對肉雞的危害[A];河南省畜牧獸醫(yī)學會第七屆理事會第二次會議暨2008年學術研討會論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蒲昭和;[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

2 庾晉 子蔭;[N];大眾衛(wèi)生報;2003年

3 王純;[N];中藥報;2001年

4 本報記者　 徐亞靜;[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 庾晉 子萌;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

6 本報記者 鄭紅艷;[N];農資導報;2009年

7 李生;[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 海南康農堂藥用植物研究所高級農藝師 陳康林;[N];科技日報;2003年

9 操秀英;[N];科技日報;2007年

10 ;[N];中國信息報;2003年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐曉蘭;靈芝三萜和金銀花綠原酸生物合成途徑關鍵酶基因的挖掘及分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

2 徐江;基于全基因組的靈芝藥用模式真菌創(chuàng)建研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

3 龐永珍;銀杏黃酮和萜類化合物生物合成途徑中重要相關基因的克隆和研究[D];復旦大學;2005年

4 李殷;植物維生素E生物合成途徑及調控[D];復旦大學;2009年

5 吳耀生;藥用植物三七三萜合成途徑功能酶特征與植物三萜合成通路分子進化[D];廣西醫(yī)科大學;2008年

6 王力生;苦玄參的化學成分研究及應用[D];北京中醫(yī)藥大學;2004年

7 馬蘭青;高山紅景天紅景天甙生物合成相關基因的克隆及功能分析[D];吉林大學;2005年

8 葉立斌;靈芝子實體多糖（綴合物）的純化、結構鑒定、分子改性和生物活性研究[D];南京農業(yè)大學;2008年

9 王鵬;通過RNA介導的基因抑制對煙堿代謝調控的研究[D];復旦大學;2007年

10 楊柳青;蛇根木阿嗎靈生物合成途徑中三個重要酶的表達，純化，結晶，，三維結構表征及催化機理研究[D];浙江大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 谷曉策;基于改造茉莉酸甲酯生物合成途徑的丹參次生代謝工程新策略[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

2 周蓉;靈芝三萜的提取及其對α-鵝膏毒肽所致肝損傷的保護作用研究[D];湖南師范大學;2011年

3 齊川;不同來源靈芝主要活性成分變異[D];浙江農林大學;2012年

4 姚松君;靈芝三萜的超聲波提取工藝及其指紋圖譜檢測方法的研究[D];華南理工大學;2010年

5 張月紅;青錢柳葉三萜類化合物提取純化、分離鑒定及其抑菌活性研究[D];江西農業(yè)大學;2012年

6 劉志梅;3種金銀花的光合生理特性及耐旱性研究[D];浙江農林大學;2012年

7 方磊;苔蘚植物地錢的化學成分研究[D];山東大學;2007年

8 丁一新;靈芝法呢基焦磷酸合酶基因的克隆和表達特性研究[D];南京農業(yè)大學;2008年

9 彭惺蓉;無柄靈芝與反柄紫芝的化學成分及生物活性研究[D];云南農業(yè)大學;2012年

10 敖宏;靈芝蛋白的提取、酶解及抗氧化性能研究[D];華南理工大學;2010年

  本文關鍵詞：靈芝三萜和金銀花綠原酸生物合成途徑關鍵酶基因的挖掘及分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：99435