本文關(guān)鍵詞：雞大腸埃希氏菌iss基因與其致病力相關(guān)性的研究

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【摘要】：大腸埃希氏菌(又名大腸桿菌)是自然環(huán)境中的常在菌,亦是溫血動物消化道下段的常住菌,屬革蘭氏陰性中等大小的桿菌。研究表明,某些血清型的大腸桿菌為致病菌,某些血清型的大腸桿菌不致病,是動物腸道的益生菌,而另一些大腸桿菌為條件致病菌,在一般情況下不致病,但在飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差、動物應(yīng)激、免疫力低下等情況下會造成發(fā)病。有研究表明,大腸桿菌iss基因(increased serum resistance gene)的存在與否是判定大腸桿菌致病性的重要手段之一。但亦有實驗表明,大腸桿菌iss基因幾乎存在于所有大腸桿菌中,因此,深入研究大腸桿菌iss基因與其致病力的關(guān)系對科學(xué)防治本病具有重要的指導(dǎo)意義。本研究對72株雞源大腸桿菌iss基因分別通過外套PCR、內(nèi)套PCR和實時熒光定量PCR進(jìn)行了檢測,檢測結(jié)果表明,利用外套PCR和內(nèi)套PCR檢測到69株菌具有iss基因,3株未檢測出iss基因,但實時熒光定量PCR檢測該3株菌均有iss基因的存在,實驗結(jié)果表明,iss基因在大腸桿菌中普遍存在,但其轉(zhuǎn)錄水平的高低因不同的菌株有所差異。將69株大腸桿菌iss基因序列進(jìn)行測序,與其他19株大腸桿菌序列一起進(jìn)行比對,共有16種不同的核苷酸序列,10種氨基酸序列,分別命名為type1-16和form1-10。經(jīng)過比對發(fā)現(xiàn),不同序列之間的差異很小,突變的位置較為固定,但多數(shù)氨基酸序列并未發(fā)生改變,表明該基因保守性很高。進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示,16種核苷酸序列的進(jìn)化樹分為2個主干,其中type15序列菌株和type16序列菌株位于同一分支,type1-14序列菌株位于同一大分支。氨基酸序列分析結(jié)果顯示,進(jìn)化樹主要分為2個大分支,其中form3、5序列菌株位于同一分支,其他序列菌株位于另一分支。隨機選取30株大腸桿菌分別接種雛雞進(jìn)行了致病性試驗,并進(jìn)行了實時熒光定量PCR檢測30株大腸桿菌iss基因的轉(zhuǎn)錄水平,檢測結(jié)果顯示,菌株相對拷貝數(shù)的對數(shù)與其毒力成正相關(guān)。分析發(fā)現(xiàn),相對拷貝數(shù)的對數(shù)、毒力及血清抗性三者兩兩之間存在正相關(guān)關(guān)系,相對拷貝數(shù)的對數(shù)和雛雞致死試驗結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.769,p=0.0000.01,極顯著正相關(guān);相對拷貝數(shù)的對數(shù)與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.662,p=0.0000.01,極顯著正相關(guān);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與雛雞致死結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.456,p=0.0110.05,顯著正相關(guān)。這說明iss基因的轉(zhuǎn)錄水平越高,大腸桿菌對于血清的抵抗能力越強,致病力越強。本研究結(jié)果顯示,iss基因在大腸桿菌中是廣泛存在的,與大腸桿菌致病力存在相關(guān)性,即iss基因轉(zhuǎn)錄水平越高,菌株毒力越強,且與血清抗性成正相關(guān)。通過本課題的研究,為大腸桿菌其他毒力基因的研究提供了借鑒,并為大腸桿菌致病性相關(guān)因素的深入研究提供了實驗數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：雞源大腸埃希氏菌 iss基因 致病力
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-18
• 1.1 大腸桿菌的主要生物學(xué)特性11
• 1.2 雞大腸桿菌病概述11-13
• 1.3 大腸桿菌的致病性因素13-16
• 1.3.1 菌毛13-14
• 1.3.2 鐵轉(zhuǎn)運系統(tǒng)14
• 1.3.3 溫敏性血凝素14-15
• 1.3.4 毒素15
• 1.3.5 外膜蛋白15
• 1.3.6 血清抗性15-16
• 1.4 大腸桿菌iss基因研究進(jìn)展16-17
• 1.5 研究的目的和意義17-18
• 2 材料與方法18-24
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.1.1 菌種18
• 2.1.2 實驗動物18
• 2.1.3 引物及序列合成18
• 2.1.4 主要試劑18-19
• 2.1.5 主要儀器設(shè)備19
• 2.2 實驗方法19-24
• 2.2.1 大腸桿菌的分離鑒定19-20
• 2.2.2 套式PCR檢測20-21
• 2.2.3 致病力檢測21
• 2.2.4 iss基因轉(zhuǎn)錄水平檢測21-23
• 2.2.5 血清抗性檢測23-24
• 3 結(jié)果與分析24-39
• 3.1 大腸桿菌分離鑒定結(jié)果24-25
• 3.2 套式PCR檢測iss基因結(jié)果25-27
• 3.3 序列比對及進(jìn)化分析結(jié)果27-33
• 3.3.1 大腸桿菌按序列分組結(jié)果27-29
• 3.3.2 iss基因進(jìn)化分析結(jié)果29-30
• 3.3.3 iss基因序列比對及同源性分析結(jié)果30-33
• 3.4 致病力檢測結(jié)果33-34
• 3.5 iss基因轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果34-38
• 3.5.1 iss基因標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果34-35
• 3.5.2 GAPDH基因標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果35-36
• 3.5.3 實時熒光定量PCR結(jié)果36-38
• 3.6 血清抗性檢測結(jié)果38-39
• 4 討論39-43
• 4.1 大腸桿菌iss基因在不同菌株中存在的普遍性39-40
• 4.2 iss基因與大腸桿菌致病力相關(guān)性分析40-41
• 4.3 血清抗性與大腸桿菌致病性相關(guān)性的分析41-43
• 5 結(jié)論43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：969386