本文關(guān)鍵詞：雞大腸埃希氏菌iss基因與其致病力相關(guān)性的研究

  更多相關(guān)文章： 雞源大腸埃希氏菌 iss基因 致病力

【摘要】：大腸埃希氏菌(又名大腸桿菌)是自然環(huán)境中的常在菌,亦是溫血?jiǎng)游锵老露蔚某Ｗ【?屬革蘭氏陰性中等大小的桿菌。研究表明,某些血清型的大腸桿菌為致病菌,某些血清型的大腸桿菌不致病,是動(dòng)物腸道的益生菌,而另一些大腸桿菌為條件致病菌,在一般情況下不致病,但在飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差、動(dòng)物應(yīng)激、免疫力低下等情況下會(huì)造成發(fā)病。有研究表明,大腸桿菌iss基因(increased serum resistance gene)的存在與否是判定大腸桿菌致病性的重要手段之一。但亦有實(shí)驗(yàn)表明,大腸桿菌iss基因幾乎存在于所有大腸桿菌中,因此,深入研究大腸桿菌iss基因與其致病力的關(guān)系對(duì)科學(xué)防治本病具有重要的指導(dǎo)意義。本研究對(duì)72株雞源大腸桿菌iss基因分別通過(guò)外套PCR、內(nèi)套PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行了檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果表明,利用外套PCR和內(nèi)套PCR檢測(cè)到69株菌具有iss基因,3株未檢測(cè)出iss基因,但實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)該3株菌均有iss基因的存在,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,iss基因在大腸桿菌中普遍存在,但其轉(zhuǎn)錄水平的高低因不同的菌株有所差異。將69株大腸桿菌iss基因序列進(jìn)行測(cè)序,與其他19株大腸桿菌序列一起進(jìn)行比對(duì),共有16種不同的核苷酸序列,10種氨基酸序列,分別命名為type1-16和form1-10。經(jīng)過(guò)比對(duì)發(fā)現(xiàn),不同序列之間的差異很小,突變的位置較為固定,但多數(shù)氨基酸序列并未發(fā)生改變,表明該基因保守性很高。進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果顯示,16種核苷酸序列的進(jìn)化樹(shù)分為2個(gè)主干,其中type15序列菌株和type16序列菌株位于同一分支,type1-14序列菌株位于同一大分支。氨基酸序列分析結(jié)果顯示,進(jìn)化樹(shù)主要分為2個(gè)大分支,其中form3、5序列菌株位于同一分支,其他序列菌株位于另一分支。隨機(jī)選取30株大腸桿菌分別接種雛雞進(jìn)行了致病性試驗(yàn),并進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)30株大腸桿菌iss基因的轉(zhuǎn)錄水平,檢測(cè)結(jié)果顯示,菌株相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)與其毒力成正相關(guān)。分析發(fā)現(xiàn),相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)、毒力及血清抗性三者兩兩之間存在正相關(guān)關(guān)系,相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)和雛雞致死試驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.769,p=0.0000.01,極顯著正相關(guān);相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.662,p=0.0000.01,極顯著正相關(guān);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與雛雞致死結(jié)果的相關(guān)性系數(shù)為0.456,p=0.0110.05,顯著正相關(guān)。這說(shuō)明iss基因的轉(zhuǎn)錄水平越高,大腸桿菌對(duì)于血清的抵抗能力越強(qiáng),致病力越強(qiáng)。本研究結(jié)果顯示,iss基因在大腸桿菌中是廣泛存在的,與大腸桿菌致病力存在相關(guān)性,即iss基因轉(zhuǎn)錄水平越高,菌株毒力越強(qiáng),且與血清抗性成正相關(guān)。通過(guò)本課題的研究,為大腸桿菌其他毒力基因的研究提供了借鑒,并為大腸桿菌致病性相關(guān)因素的深入研究提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：雞源大腸埃希氏菌 iss基因 致病力
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-18
• 1.1 大腸桿菌的主要生物學(xué)特性11
• 1.2 雞大腸桿菌病概述11-13
• 1.3 大腸桿菌的致病性因素13-16
• 1.3.1 菌毛13-14
• 1.3.2 鐵轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)14
• 1.3.3 溫敏性血凝素14-15
• 1.3.4 毒素15
• 1.3.5 外膜蛋白15
• 1.3.6 血清抗性15-16
• 1.4 大腸桿菌iss基因研究進(jìn)展16-17
• 1.5 研究的目的和意義17-18
• 2 材料與方法18-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.1.1 菌種18
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2.1.3 引物及序列合成18
• 2.1.4 主要試劑18-19
• 2.1.5 主要儀器設(shè)備19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-24
• 2.2.1 大腸桿菌的分離鑒定19-20
• 2.2.2 套式PCR檢測(cè)20-21
• 2.2.3 致病力檢測(cè)21
• 2.2.4 iss基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)21-23
• 2.2.5 血清抗性檢測(cè)23-24
• 3 結(jié)果與分析24-39
• 3.1 大腸桿菌分離鑒定結(jié)果24-25
• 3.2 套式PCR檢測(cè)iss基因結(jié)果25-27
• 3.3 序列比對(duì)及進(jìn)化分析結(jié)果27-33
• 3.3.1 大腸桿菌按序列分組結(jié)果27-29
• 3.3.2 iss基因進(jìn)化分析結(jié)果29-30
• 3.3.3 iss基因序列比對(duì)及同源性分析結(jié)果30-33
• 3.4 致病力檢測(cè)結(jié)果33-34
• 3.5 iss基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)結(jié)果34-38
• 3.5.1 iss基因標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果34-35
• 3.5.2 GAPDH基因標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果35-36
• 3.5.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果36-38
• 3.6 血清抗性檢測(cè)結(jié)果38-39
• 4 討論39-43
• 4.1 大腸桿菌iss基因在不同菌株中存在的普遍性39-40
• 4.2 iss基因與大腸桿菌致病力相關(guān)性分析40-41
• 4.3 血清抗性與大腸桿菌致病性相關(guān)性的分析41-43
• 5 結(jié)論43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文52

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 樊琛;劉桂芹;王宇;王亞君;李一經(jīng);;雞大腸桿菌O2/O74混合血清型菌株iss基因的克隆與序列測(cè)定[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年11期

2 樊琛;劉桂芹;王亞君;李一經(jīng);;Iss蛋白在雞源大腸桿菌不同毒力菌株中的檢測(cè)[J];畜牧與獸醫(yī);2010年02期

3 ;[J];;年期

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 本報(bào)記者 躍進(jìn);ISS：召回用戶(hù)[N];計(jì)算機(jī)世界;2004年

2 李玲;ISS力挺私有化 電盈股價(jià)逆市上漲[N];證券時(shí)報(bào);2009年

3 通訊員 尹鳳玲;聯(lián)想神州數(shù)碼與ISS攜手阻擊黑客[N];北京科技報(bào);2000年

4 ;聯(lián)想神州數(shù)碼與ISS攜手反黑[N];中華建筑報(bào);2000年

5 涇輯;ISS固化劑在堤壩建設(shè)中的應(yīng)用[N];中國(guó)水利報(bào);2002年

6 ;Proventia：ISS的安全新主張[N];網(wǎng)絡(luò)世界;2004年

7 庭筠;汽車(chē)安全新概念：ISS系統(tǒng)（下）[N];中國(guó)汽車(chē)報(bào);2000年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉魯文;基于LIBS技術(shù)對(duì)ISS改性紅色黏土的陽(yáng)離子遷移過(guò)程研究[D];中國(guó)地質(zhì)大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 徐旺燁;雞大腸埃希氏菌iss基因與其致病力相關(guān)性的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 曾祥文;快速功能級(jí)ISS自動(dòng)生成技術(shù)的研究[D];華北電力大學(xué)（北京）;2009年

，

本文編號(hào)：969386