發(fā)布時間：2017-10-03 01:04

  本文關(guān)鍵詞：豬DNAH2和NDEL1基因的多態(tài)性與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)性分析及其在組織間表達差異性研究

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【摘要】：本研究以中國地方品種豬沙子嶺豬、寧鄉(xiāng)豬、桃源黑豬、大圍子豬以及外來豬種大白豬5個豬種為研究對象,采用PCR-RFLP方法分別對DNAH2基因和NDEL1基因的遺傳多態(tài)性進行分析,計算其基因頻率及基因型頻率,并與豬肉質(zhì)性狀進行關(guān)聯(lián)分析。同時還利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測分析了兩個基因分別在不同品種豬間及不同組織中表達差異性,結(jié)果如下:采用PCR-RFLP方法并結(jié)合PCR產(chǎn)物測序比對結(jié)果發(fā)現(xiàn)DNAH2基因在-488位點上存在G→C突變,利用限制性內(nèi)切酶PvuⅡ酶切PCR產(chǎn)物,進行基因分型,結(jié)果表明在所選的各個品種豬中存在多態(tài)性。該基因與肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)分析表明,GC型個體的背膘厚和眼肌面積與GG型呈顯著性差異(P0.05);在失水率方面,GG型的值均顯著高于CC型和GC型(P0.05),其余肉質(zhì)性的基因型之間不存在顯著性差異。利用實時熒光定量PCR分析DNAH2基因在不同豬種和不同組織間的表達水平得出:除背肌外,DNAH2基因在大白豬各個組織中的表達量均高于沙子嶺豬相同組織中,且呈現(xiàn)出極顯著差異性(P0.01)。在大白豬的不同組織間,DNAH2在脾臟中的表達量最高,為1.38。背最長肌中的表達量極顯著低于其余各組織(P0.01)。在沙子嶺豬的各組織中,DNAH2基因在背最長肌和胰臟中的表達量均極顯著高于其余組織(P0.01),盲腸中的表達量與腿肌和脾臟呈極顯著差異(P0.01),與肺、小腸呈顯著性差異(P0.05)。采用限制性內(nèi)切酶Taq I酶切PCR產(chǎn)物,利用PCR-RFLP方法對NDEL1基因進行基因分型表明各品種豬在-509T→C位點均存在多態(tài)性�；蛐团c肉質(zhì)關(guān)聯(lián)分析得出:CC型個體的屠宰率顯著性低于TC型和TT型(P0.05);在眼肌面積和失水率方面,TT基因型與CC型和TC型呈顯著性差異(P0.05);其余肉質(zhì)性狀基因型之間差異性不顯著。實時熒光定量PCR分析其表達水平結(jié)果表明,同組織不同品種豬間,除肝臟外,NDEL1基因在其余各組織中的表達量均呈極顯著差異性(P0.01)。大白豬不同組織間差異性分析得出,心臟、胰、腿肌、腎、小腸相互之間且與其余各組織均呈極顯著差異(P0.01)。在沙子嶺豬的各個組織中,NDEL1基因在脾臟和腎中的表達量均極顯著高于其余組織且二者之間也呈現(xiàn)出極顯著差異(P0.01)。
【關(guān)鍵詞】：豬 DNAH2基因 NDEL1基因 PCR-RFLP 熒光定量PCR技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第一章文獻綜述9-24
• 前言9
• 1、豬肉質(zhì)性狀的研究9-13
• 1.1 肌內(nèi)脂肪含量10
• 1.2 肉色10-11
• 1.3 pH值11
• 1.4 系水力11-12
• 1.5 嫩度12
• 1.6 風(fēng)味12-13
• 2、豬肌內(nèi)脂肪的主效基因和候選基因13-17
• 2.1 主效基因13-14
• 2.2 候選基因14-17
• 3、DNA分子標(biāo)記17-21
• 3.1 限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)18
• 3.2 隨機擴增多態(tài)性DNA (RAPD)18-19
• 3.3 微衛(wèi)星DNA(SSR)19-20
• 3.4 擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)20
• 3.5 單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)20-21
• 3.6 單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，，SNP)21
• 4、DNAH2基因的研究進展21-22
• 5、NDEL1基因的研究進展22
• 6、目的與意義22-24
• 第二章 DNAH2和NDEL1基因的多態(tài)性及其與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析24-38
• 1、試驗材料24-25
• 1.1 樣品的采集24
• 1.2 試驗儀器設(shè)備24-25
• 1.3 試驗試劑及其配制方法25
• 1.4 試驗分子生物學(xué)軟件25
• 2 試驗方法25-30
• 2.1 DNA的提取25-26
• 2.2 DNA濃度的檢測26
• 2.3 引物設(shè)計和PCR擴增及檢測26-28
• 2.4 篩選SNP位點28
• 2.5 PCR產(chǎn)物的酶切28-29
• 2.6 種群遺傳學(xué)統(tǒng)計分析29-30
• 3、結(jié)果與分析30-38
• 3.1 DNA的提取結(jié)果30-31
• 3.2 PCR擴增及產(chǎn)物檢測結(jié)果31
• 3.3 突變位點的尋找31-32
• 3.4 酶切結(jié)果的檢測32-33
• 3.5 DNAH2基因和NDEL1基因多態(tài)性在不同豬種中的分布33-35
• 3.6 DNAH2基因和NDEL1基因多態(tài)性與肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)分析35-38
• 第三章 DNAH2基因和NDEL1基因在不同品種豬和組織間的表達差異分析38-49
• 1、試驗材料38-39
• 1.1 樣品采集38
• 1.2 試驗儀器38-39
• 1.3 試驗試劑39
• 2、試驗方法39-43
• 2.1 RNA的提取39-40
• 2.2 RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測40
• 2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄40-41
• 2.4 熒光定量PCR引物設(shè)計41-42
• 2.5 熒光定量PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件42
• 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析42-43
• 3、結(jié)果與分析43-49
• 3.1 DNAH2基因熒光定量PCR結(jié)果43-46
• 3.2 NDEL1基因熒光定量PCR結(jié)果46-49
• 第四章 討論與結(jié)論49-54
• 1、DNAH2基因和NDEL1基因SNP的檢測方法49-50
• 2、DNAH2基因和NDEL1基因多態(tài)性分析50-51
• 2.1 DNAH2基因多態(tài)性分析50-51
• 2.2 NDEL1基因多態(tài)性分析51
• 3、DNAH2基因和NDEL1基因與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析51-52
• 3.1 DNAH2基因與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析51-52
• 3.2 NDEL1基因與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析52
• 4、結(jié)論52-54
• 參考文獻54-62
• 致謝62-63
• 導(dǎo)師簡介63-64
• 作者簡介64-65

【參考文獻】

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本文編號：962248