本文關(guān)鍵詞：成年小鼠不同生殖時(shí)期子宮頸組織中脂滴和自噬體PPAR、LC3和Atg5基因表達(dá)特點(diǎn)及其分布規(guī)律的研究

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【摘要】：脂類是生命中必不可少的營(yíng)養(yǎng)成分,在不同條件下細(xì)胞內(nèi)脂類的代謝狀況影響著組織器官的生理功能。脂類的合成、修飾與分解受到多種因素的影響,例如能量供應(yīng)變化、細(xì)胞膜完整性、信號(hào)分子的轉(zhuǎn)導(dǎo)、激素及細(xì)胞因子的調(diào)控以及外界環(huán)境的改變等。由于脂質(zhì)代謝中多余的脂肪酸(FAs)對(duì)細(xì)胞是有害的,脂質(zhì)的相對(duì)穩(wěn)定性對(duì)細(xì)胞生存至關(guān)重要。為了預(yù)防脂類中毒,細(xì)胞會(huì)將多余的脂肪酸轉(zhuǎn)移到中性脂質(zhì)中,儲(chǔ)存在被叫做脂滴(LD)的細(xì)胞器中。這種細(xì)胞器不僅是脂質(zhì)和能量的存儲(chǔ)庫(kù),而且還參與蛋白質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)運(yùn)、某些激素的合成、膜的生物合成和膽固醇的穩(wěn)定性等。近年來(lái),脂滴生物學(xué)研究的焦點(diǎn)之一是噬脂體對(duì)脂滴內(nèi)脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)上。自噬體作為多功能細(xì)胞器,在維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)起著非常重要的作用,它主要起著細(xì)胞內(nèi)“清道夫”作用,可以清理胞質(zhì)內(nèi)被分解的蛋白質(zhì)、衰老的細(xì)胞器和進(jìn)入的病原體等。子宮頸是妊娠期間保胎的門戶和分娩時(shí)胎兒產(chǎn)出的必經(jīng)之路,其收縮與開張是主動(dòng)耗能的過(guò)程。子宮頸的關(guān)閉與開張是否正常直接影響妊娠和分娩。但是,小鼠子宮頸的能量來(lái)源是否與脂滴及自噬體調(diào)節(jié)有一定的關(guān)系,目前鮮有報(bào)道。本文為了探索小鼠子宮頸組織中脂滴與自噬體的分布規(guī)律及其相關(guān)性,分別采集成熟小鼠不同生殖時(shí)期的子宮頸,即空懷期、妊娠中期和分娩期三組,每組為50只,用免疫組織化學(xué)法(IHC)對(duì)組織中LC3和Atg5進(jìn)行定位,并與油紅O染色對(duì)LC3和Atg5和脂滴進(jìn)行復(fù)和定位;用Western Blot方法檢測(cè)組織中抗LC3和Atg5抗體的特異性;用熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)LC3和Atg5及PPARγⅡmRNA的相對(duì)表達(dá)水平;利用透射電鏡觀察脂滴和自噬體在子宮頸的分布。結(jié)果表明:脂滴和自噬體在成熟小鼠子宮頸的不同時(shí)期均存在,并呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律。利用Image-proplus 6.0軟件和IBM SPSS Statistics 19軟件對(duì)不同時(shí)期小鼠子宮頸組織中LC3和Atg5蛋白分布的定量分析顯示空懷期、妊娠中期、分娩期小鼠子宮頸中的LC3和Atg5蛋白表達(dá)均有極顯著差異(P㩳0.01);利用Image J軟件和IBM SPSS Statistics 19軟件進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析Western Blot結(jié)果顯示空懷期、妊娠中期、分娩期小鼠子宮頸中的Atg5蛋白表達(dá)均有極顯著差異(P0.01),LC3空懷期與妊娠中期和分娩期有極顯著差異(P㩳0.01),妊娠中期與分娩期之間有顯著差異(P0.05);脂滴和自噬體蛋白的mRNA表達(dá)量妊娠中期最高,其次分娩期,空懷期最低,并且各期之間差異極顯著(P0.01)。另外,空懷期脂滴和自噬體較大,但數(shù)量相對(duì)較少,主要集聚在宮頸腔上皮細(xì)胞第一層細(xì)胞的細(xì)胞核下側(cè),成簇存在,接觸較為松散。在電鏡下觀察脂滴呈現(xiàn)淺灰或灰白色。妊娠中期脂滴較小,呈現(xiàn)深灰色,主要聚集在腔上皮第一層細(xì)胞的腔側(cè),有的脫離腔上皮,成簇存在,并且數(shù)量多于空懷期;分娩期脂滴體積也較小,呈灰色不等,緊密聚集在腔上皮第一層細(xì)胞的腔側(cè)。各時(shí)期的自噬體與脂滴的表達(dá)成正相關(guān)。以上這些結(jié)果表明,不同生殖時(shí)期的子宮頸中的脂滴與自噬體存在著密切關(guān)系,脂滴的大小和數(shù)量受自噬體的調(diào)節(jié)。這預(yù)示著妊娠期子宮頸的強(qiáng)勁收縮所消耗的能量可能比分娩期子宮頸的急性開張耗能更大,而空懷時(shí)期子宮頸耗能最少。自噬體表達(dá)的增強(qiáng)可能預(yù)示著其在清理更多的來(lái)自脂滴的脂肪酸,預(yù)防細(xì)胞內(nèi)脂肪酸中毒上起重要作用。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 子宮頸 自噬體 脂滴 LC3 Atg5 PPARγⅡ
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S865.13
【目錄】：

• 符號(hào)說(shuō)明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-19
• 1.1 自噬11-16
• 1.1.1 自噬體的分類11-12
• 1.1.2 自噬體的形成12-13
• 1.1.3 自噬體相關(guān)基因與蛋白13-14
• 1.1.4 自噬的適應(yīng)性反應(yīng)14-15
• 1.1.5 自噬體與脂滴15-16
• 1.2 脂滴16-18
• 1.2.1 脂滴的結(jié)構(gòu)與功能16-17
• 1.2.2 脂滴相關(guān)蛋白17-18
• 1.3 子宮頸18-19
• 2 材料與方法19-38
• 2.1 材料19-22
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 2.1.2 主要藥品與試劑19
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備19-20
• 2.1.4 主要試劑配制20-22
• 2.2 試驗(yàn)方法22-38
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理22-23
• 2.2.2 試驗(yàn)樣本的采集23
• 2.2.3 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)LC3和Atg5在小鼠子宮頸組織中的定位23-28
• 2.2.4 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)抗LC3和Atg5抗體在小鼠子宮頸組織中的特異性28-32
• 2.2.5 熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)小鼠子宮頸組織中的LC3、Atg5及PPARγⅡ的相對(duì)表達(dá)水平32-36
• 2.2.6 子宮頸組織透射電鏡觀察試驗(yàn)方法36-38
• 3 結(jié)果與分析38-50
• 3.1 脂滴、LC3和Atg5蛋白在小鼠子宮頸組織中的分布38-41
• 3.1.1 子宮頸組織中LC3和Atg5的分布38-40
• 3.1.2 子宮頸組織中脂滴與LC3和Atg5的分布及其關(guān)系40-41
• 3.2 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)抗LC3和Atg5抗體在小鼠子宮頸組織中的特異性41-42
• 3.3 小鼠子宮頸組織的熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果42-48
• 3.3.1 組織樣本總RNA提取的完整性與純度以及熒光定量RT-PCR的重復(fù)性42-43
• 3.3.2 RT-PCR得到的擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性43
• 3.3.3 RT-PCR擴(kuò)增LC3、Atg5和PPARγⅡ基因片段產(chǎn)物的擴(kuò)增曲線、熔解曲線及擴(kuò)增效率曲線43-45
• 3.3.4 RT-PCR檢測(cè)目的基因的表達(dá)效果45-48
• 3.4 小鼠子宮頸組織透射電鏡觀察結(jié)果48-50
• 4 討論50-52
• 5 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 致謝60-61
• 作者簡(jiǎn)介及發(fā)表論文情況61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：924823