本文關(guān)鍵詞：褐飛虱唾液蛋白的鑒定與基因功能分析

  更多相關(guān)文章： 褐飛虱 唾液蛋白 NlCaM qRT-PCR RNAi EPG 原核表達(dá)

【摘要】：褐飛虱有“亞洲水稻頭號害蟲”之稱,而唾液是褐飛虱危害水稻、傳播病毒最主要的媒介,在褐飛虱取食過程中扮演著重要角色；研究褐飛虱唾液,對在分子水平上明確褐飛虱危害水稻的機(jī)制以及建立新型有效的防治策略具有重要意義。本文通過Parafilm膜夾營養(yǎng)液的方法,收集了3組共計(jì)24000頭褐飛虱的唾液,再利用質(zhì)譜技術(shù)測定褐飛虱唾液中的蛋白,通過整合分析,首次成功地從褐飛虱唾液中直接鑒定得到206個(gè)褐飛虱唾液蛋白及其編碼基因。從中選取12個(gè)基因,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及RNAi分析。發(fā)育特異性表達(dá)顯示其中有9個(gè)基因的雄蟲相對表達(dá)量高于雌蟲；組織特異性表達(dá)顯示有8個(gè)基因均在唾液腺表達(dá)量最高,其中6個(gè)為唾液腺特異性表達(dá)。RNAi表明12個(gè)基因中的1個(gè)基因—--NlCaM的沉默,具有明顯的致死作用。NICaM基因的ORF長450bp,編碼一種由149個(gè)氨基酸組成、預(yù)計(jì)分子量為16.4kDa的鈣調(diào)素蛋白,具有典型的EF-hand結(jié)構(gòu)域。qRT-PCR表明NlCaM基因在唾液腺表達(dá)量最高,各發(fā)育時(shí)期表達(dá)差異不大,雄蟲略高。沉默NlCaM基因后,褐飛虱發(fā)育畸形,羽化后體色變黑、翅膀卷曲；致死率達(dá)到100%；發(fā)育歷期延長；同時(shí)褐飛虱的取食量和取食行為發(fā)生變化,蜜露分泌量測定結(jié)果表明褐飛虱取食量減少,EPG結(jié)果表明褐飛虱的刺探時(shí)間延長且在木質(zhì)部的取食時(shí)間減少,取食困難。綜上,NlCaM基因在褐飛虱取食過程和其他生理生化代謝中均有重要作用。本結(jié)果揭示了褐飛虱唾液蛋白的組成,擴(kuò)展了我們對刺吸式口器昆蟲唾液的認(rèn)識(shí),也為用RNAi技術(shù)防治褐飛虱提供了潛在靶標(biāo)基因。
【關(guān)鍵詞】：褐飛虱 唾液蛋白 NlCaM qRT-PCR RNAi EPG 原核表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S435.112.3
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1.1 植食性刺吸式昆蟲唾液的組分與功能11-14
• 1.1.1 唾液在植食性刺吸式昆蟲取食過程中的基礎(chǔ)作用11-12
• 1.1.2 唾液在植食性刺吸式昆蟲誘導(dǎo)植物防御中的作用12-13
• 1.1.3 唾液在植食性刺吸式昆蟲抑制植物防御中的作用13-14
• 1.2 RNAi在昆蟲基因功能研究中的應(yīng)用14-15
• 1.3 褐飛虱唾液蛋白研究的目的與意義15-17
• 1.4 技術(shù)路線17-19
• 第2章 褐飛虱唾液蛋白的獲取與鑒定19-23
• 2.1 材料與方法19-21
• 2.1.1 供試褐飛虱與水稻19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與工具19-20
• 2.1.3 毛果蕓香堿誘導(dǎo)法收集褐飛虱唾液20
• 2.1.4 Parafilm膜夾營養(yǎng)液法收集褐飛虱唾液20-21
• 2.2 結(jié)果與分析21-23
• 第3章 褐飛虱唾液蛋白基因的時(shí)空表達(dá)特異性23-29
• 3.1 材料與方法23-25
• 3.1.1 收集褐飛虱各發(fā)育階段與各組織的樣本23
• 3.1.2 提取褐飛虱各樣本的RNA23-24
• 3.1.3 反轉(zhuǎn)錄24
• 3.1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR24-25
• 3.2 結(jié)果與分析25-29
• 3.2.1 褐飛虱唾液蛋白基因的組織表達(dá)特異性25-26
• 3.2.2 褐飛虱唾液蛋白基因的發(fā)育表達(dá)特異性26-27
• 3.2.3 褐飛虱唾液蛋白基因在長短翅雌雄蟲中的表達(dá)差異27-28
• 3.2.4 分析討論28-29
• 第4章 褐飛虱唾液蛋白基因NlCaM的RNAi29-45
• 4.1 材料與方法29-34
• 4.1.1 蟲源與菌株29
• 4.1.2 主要試劑與工具29-30
• 4.1.3 NlCaM基因的序列分析與克隆30
• 4.1.4 dsRNA的體外合成與顯微注射30-32
• 4.1.5 dsRNA的干擾效果檢測32
• 4.1.6 dsNlCaM干擾后褐飛虱的存活率統(tǒng)計(jì)32
• 4.1.7 dsNlCaM干擾后褐飛虱的發(fā)育歷期變化32
• 4.1.8 dsNlCaM干擾后褐飛虱的取食量變化32-33
• 4.1.9 dsNlCaM干擾后褐飛虱的取食行為變化33-34
• 4.2 結(jié)果與分析34-45
• 4.2.1 NlCaM基因的序列分析與克隆34-35
• 4.2.2 NlCaM基因的時(shí)空表達(dá)模式35-36
• 4.2.3 NlCaM基因的RNAi沉默效果36-37
• 4.2.4 沉默NlCaM對褐飛虱形態(tài)、存活率、發(fā)育歷期的影響37-38
• 4.2.5 沉默NlCaM對褐飛虱取食量與取食行為的影響38-42
• 4.2.6 NlCaM基因的分析與討論42-45
• 第5章 褐飛虱唾液蛋白基因NlCaM的抗體制備45-49
• 5.1 材料與方法45-48
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制45-46
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法46-48
• 5.2 結(jié)果與分析48-49
• 總結(jié)與展望49-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 在讀期間發(fā)表論文57-59
• 致謝59

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃曉慧;褐飛虱唾液蛋白的鑒定與基因功能分析[D];浙江大學(xué);2016年

2 王曉菲;卡馬西平唾液濃度與血液濃度的相關(guān)性及其影響因素的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

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本文編號：922756