本文關鍵詞：單增李斯特菌三重實時熒光PCR檢測的建立及其毒力基因在分離菌株中分布

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【摘要】：目的建立同時檢測單增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、內化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重實時熒光PCR檢測方法,并對101株單增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因進行了檢測,分析3個毒力基因在多位點序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚類群組中的分布情況。方法根據(jù)單增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列設計引物和小溝結合物(minor groove binder,MGB)探針建立三重熒光PCR方法,對其特異性、靈敏度和可重復性進行了測試,并對分離的101株單增李斯特菌進行三重PCR檢測。結果建立的三重實時熒光PCR方法特異于單增李斯特菌的檢測,重復性良好,組內Ct值變異系數(shù)均小于1.5%,靈敏度可達100CFU/mL。對101株單增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的檢出率分別為98%、75%和98%。在可被MLST分型的89株菌株中,groupI的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupII的57株菌株中有56株三個基因均檢出;groupIII的菌株hlyA、inlA和plcB三個基因均未檢出。結論本文建立的三重實時熒光PCR方法能準確、快速、穩(wěn)定的檢測單增李斯特菌,101株單增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三個毒力基因的檢出情況與單增李斯特菌的MLST分型聚類有較一致的關系,對分析單增李斯特菌毒力的強弱有重要參考意義。
【作者單位】： 黃埔出入境檢驗檢疫局;廣東出入境檢驗檢疫局;中國檢驗檢疫科學研究院;
【關鍵詞】： 單增李斯特菌 TaqMan-MGB三重實時熒光PCR 毒力基因分布 多位點序列分型
【基金】：廣東省科技計劃項目(No.2013B040402004)資助~~
【分類號】：R440
【正文快照】： (1.Huangpu Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Guangzhou510730,China;2.Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Guangzhou510730,China;3.Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing100025,China)Supported by Science and Technol

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本文編號：922248