發(fā)布時(shí)間：2017-09-25 05:10

  本文關(guān)鍵詞：木薯內(nèi)參照基因LAM2定性PCR和定量PCR分析

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【摘要】：在轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品的成分檢測(cè)中,內(nèi)參照基因(endogenous reference gene)起著重要的作用,木薯內(nèi)參照基因的研究是轉(zhuǎn)基因木薯成分定性PCR和定量PCR檢測(cè)的基礎(chǔ)。本研究選擇木薯的亞麻苦苷酶(linamarase,LAM)和Polyubiquitin(PUBQ)基因?yàn)檠芯繉?duì)象,運(yùn)用定性PCR的方法在22種木薯的不同品種中進(jìn)行穩(wěn)定性分析,在12種大戟科其它植物、20種非大戟科植物及五類(lèi)主要轉(zhuǎn)基因作物的混合樣品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中對(duì)LAM2和PUBQ1定性PCR引物進(jìn)行特異性檢測(cè)分析及靈敏度檢測(cè)分析。結(jié)果顯示:LAM2和PUBQ1引物在木薯的不同品種中均能得到穩(wěn)定性擴(kuò)增;在12種大戟科其它植物、20種非大戟科植物能夠進(jìn)行特異性擴(kuò)增,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn);LAM2在五類(lèi)主要轉(zhuǎn)基因作物的混合樣品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中也沒(méi)有非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn),而PUBQ1在五類(lèi)主要轉(zhuǎn)基因作物的混合樣品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中卻有很多的非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)。靈敏度檢測(cè)發(fā)現(xiàn)定性PCR LAM2檢測(cè)方法的靈敏度達(dá)到質(zhì)量百分含量0.01%,SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明LAM2的靈敏度可達(dá)到0.001~0.000 1 ng/μL。選擇部分品種的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,序列分析表明LAM2在不同品種的木薯的基因組DNA均可以擴(kuò)增到293 bp的核苷酸片段,比對(duì)分析表明所獲得的木薯不同品種中LAM2 PCR擴(kuò)增片段的核苷酸序列一致沒(méi)有發(fā)現(xiàn)變異位點(diǎn)。研究結(jié)果表明LAM2引物擴(kuò)增系統(tǒng)初步符合內(nèi)參照基因的種內(nèi)一致性,穩(wěn)定性,種間特異性的特點(diǎn),靈敏度檢測(cè)的要求可應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因木薯成分定性和定量PCR檢測(cè)。
【作者單位】： 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物技術(shù)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因植物及植物用微生物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心;中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技信息研究所;
【關(guān)鍵詞】： 木薯 內(nèi)參照基因 LAM PUBQ PCR
【基金】：科技部國(guó)際科技合作專(zhuān)項(xiàng)(2013DFA32020) 海南省重大科技項(xiàng)目子課題(ZDZX2013023-1) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(ITBB2015RC01)共同資助
【分類(lèi)號(hào)】：S533
【正文快照】： Establishment of Qualitative Polymerase Chain Reaction(PCR)and Quanti-tative PCR methods for Endogenous Reference Gene LAM2 in TransgenicCassavaLi Meiying1,2Liu Enping3Xia Qiyu1,2Guo Yunling1,2Yi Xiaoping1,2*Guo Anping1,2*1 Institute of Tropical Bioscien

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 夏立秋,張何,劉全蘭,陳宇,莫湘濤;蘇云金桿菌4.0718質(zhì)粒上殺蟲(chóng)晶體蛋白基因的PCR分析[J];生物技術(shù)通報(bào);2002年02期

2 嚴(yán)佳文;楊莉;袁飛榮;張家銀;李娜;王曉君;鄧子牛;;轉(zhuǎn)基因甜橙定量PCR分析體系的建立[J];中國(guó)園藝文摘;2010年04期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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本文編號(hào)：915527