本文關鍵詞：木薯內參照基因LAM2定性PCR和定量PCR分析

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【摘要】：在轉基因植物及其產品的成分檢測中,內參照基因(endogenous reference gene)起著重要的作用,木薯內參照基因的研究是轉基因木薯成分定性PCR和定量PCR檢測的基礎。本研究選擇木薯的亞麻苦苷酶(linamarase,LAM)和Polyubiquitin(PUBQ)基因為研究對象,運用定性PCR的方法在22種木薯的不同品種中進行穩(wěn)定性分析,在12種大戟科其它植物、20種非大戟科植物及五類主要轉基因作物的混合樣品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中對LAM2和PUBQ1定性PCR引物進行特異性檢測分析及靈敏度檢測分析。結果顯示:LAM2和PUBQ1引物在木薯的不同品種中均能得到穩(wěn)定性擴增;在12種大戟科其它植物、20種非大戟科植物能夠進行特異性擴增,沒有發(fā)現(xiàn)非特異性擴增產物出現(xiàn);LAM2在五類主要轉基因作物的混合樣品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中也沒有非特異性擴增產物出現(xiàn),而PUBQ1在五類主要轉基因作物的混合樣品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中卻有很多的非特異性擴增產物出現(xiàn)。靈敏度檢測發(fā)現(xiàn)定性PCR LAM2檢測方法的靈敏度達到質量百分含量0.01%,SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測結果表明LAM2的靈敏度可達到0.001~0.000 1 ng/μL。選擇部分品種的PCR擴增產物進行測序,序列分析表明LAM2在不同品種的木薯的基因組DNA均可以擴增到293 bp的核苷酸片段,比對分析表明所獲得的木薯不同品種中LAM2 PCR擴增片段的核苷酸序列一致沒有發(fā)現(xiàn)變異位點。研究結果表明LAM2引物擴增系統(tǒng)初步符合內參照基因的種內一致性,穩(wěn)定性,種間特異性的特點,靈敏度檢測的要求可應用于轉基因木薯成分定性和定量PCR檢測。
【作者單位】： 中國熱帶農業(yè)科學院熱帶生物技術研究所農業(yè)部熱帶作物生物技術與遺傳資源利用重點實驗室;農業(yè)部轉基因植物及植物用微生物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗測試中心;中國熱帶農業(yè)科學院科技信息研究所;
【關鍵詞】： 木薯 內參照基因 LAM PUBQ PCR
【基金】：科技部國際科技合作專項(2013DFA32020) 海南省重大科技項目子課題(ZDZX2013023-1) 中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費項目(ITBB2015RC01)共同資助
【分類號】：S533
【正文快照】： Establishment of Qualitative Polymerase Chain Reaction(PCR)and Quanti-tative PCR methods for Endogenous Reference Gene LAM2 in TransgenicCassavaLi Meiying1,2Liu Enping3Xia Qiyu1,2Guo Yunling1,2Yi Xiaoping1,2*Guo Anping1,2*1 Institute of Tropical Bioscien

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本文編號：915527