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《中國菌物學會第六屆會員代表大會（2014年學術(shù)年會）暨貴州省食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇會議摘要》2014年

里氏木霉表達系統(tǒng)構(gòu)建和優(yōu)化

鄒根  江艷萍  陳玲  劉睿  王成樹  周志華  

【摘要】：里氏木霉(Trichoderma reesei)作為纖維素酶工業(yè)中主要的生產(chǎn)菌株,在分泌能力方面有著巨大的優(yōu)勢。我們在前期以誘變、實驗室馴化等手段獲得一株胞外分泌能力強的高產(chǎn)菌株,并以此作為高效分泌表達的真核底盤細胞。首先,我們利用雙向選擇標記構(gòu)建了marker-free系統(tǒng),實現(xiàn)了多基因表達和敲除。為了提高異源蛋白的效率,還優(yōu)化了cbh1啟動子,將位于啟動子上的阻遏因子結(jié)合位點突變?yōu)榧せ钜蜃咏Y(jié)合位點。為了探究該分泌表達系統(tǒng)的特點,課題組選取了同為真核的商品化畢赤酵母(Pichia pastoris)分泌表達系統(tǒng)作為參考,以真菌來源的Bg1S作為外源蛋白,通過測定Bg1S的特性研究該系統(tǒng)的修飾特性。在T.reesei中,除了N224位點,其他三個僅被一個G1cNAc修飾。Trichoderma reesei的適度修飾使Bg1S在分泌量、酶活、穩(wěn)定性及其與底物的親和力等方面比畢赤酵母表達系統(tǒng)更具有優(yōu)勢。利用這一表達系統(tǒng),結(jié)合異源表達的一系列優(yōu)化手段,如融合基因、密碼子優(yōu)化、同源替換等,獲得了一系列高產(chǎn)菌株。對這些高產(chǎn)菌株進行進一步的遺傳操作,對其進行轉(zhuǎn)錄激活因子的過表達,阻遏因子的敲除,有效提高了目標蛋白的產(chǎn)量。這些工程菌株在小瓶發(fā)酵體系的酶活已和一些商品化酶制劑酶活相當。

【作者單位】：
【基金】：“973計劃”項目(2011CB707400) 自然科學基金青年科學基金項目(31300073) 中國科學院上海生命科學研究院優(yōu)秀青年人才領(lǐng)域前沿項目(2012KIP307)
【分類號】：Q78
【正文快照】：

里氏木霉表達系統(tǒng)構(gòu)建和優(yōu)化@鄒根$中科院上海生科院植生所!上海200032 @江艷萍$中科院上海生科院植生所!上海200032 @陳玲$中科院上海生科院植生所!上海200032 @劉睿$中科院上海生科院植生所!上海200032 @王成樹$中科院上海生科院植生所!上海200032 @周志華$中科院

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【共引文獻】

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本文編號：90041